UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

COLÉGIO TÉCNICO

PATOLOGIA CLÍNICA

MICROBIOLOGIA CLÍNICA

MARIANA COSTA

ESTHER IOLANDA SILVA FROIS

AULA PRÁTICA DE PREPARO DE MEIOS DE CULTURA E

PLANTIO PRIMÁRIO

BELO HORIZONTE

2014

INTRODUÇÃO

Para o estudo e identificação das bactérias é necessário isolá-las e cultivá-las,

fornecendo as condições físicas e químicas para que elas se reproduzam e aumentem seu

inoculo. O cultivo de bactérias é feito no meio de cultura, meio que fornece os nutrientes e

condições químicas adequadas para seu crescimento, sendo que a maioria das bactérias cresce

neles. Há vários tipos de meios de cultura, classificados quanto ao seu estado físico, finalidade e

características.

Quando uma amostra é coletada e levada ao laboratório clínico a fim de realizar sua

análise microbiológica, o primeiro passo é o cultivo da amostra em um meio de cultura simples,

permitindo o crescimento das bactérias presentes, denominado de cultivo simples. Após o

crescimento, as bactérias da amostra são sujeitas a testes, como a coloração de Gram, e cultivos

secundários em meios que promovem o isolamento e identificação da bactéria-alvo.

METODOLOGIA

-Materiais e métodos-

I. Preparo dos meios de cultura Agar Citrato-Simmons e Agar sangue.

AGAR CITRATO-SIMMONS

Dissolver 2,42 g do meio-base em 100mL de água destilada;

Misturar a solução por 10 a 15 minutos;

Aquecer em banho-maria por 1 minuto, agitando o tubo.

Distribuir 4mL do líquido em tubos de ensaio e tampá-los com rolha ou algodão.

Esterilizar o meio antes de usar.

AGAR SANGUE.

Pesar e hidratar o meio-base de Agar conforme as instruções do fabricante;

Esterilizar em autoclave;

Esfriar a +/- 50°C;

Adicionar 5 ml de sangue para cada 100mL de base;

Homogeneizar delicadamente, evitando bolhas;

Distribuir o líquido em placas de Petri, tampá-las e aguardar esfriar.

Esterilizar em autoclave antes de usar.

II. Plantio primário em meio de cultura sólido.

Identificar os meios de cultura;

Flambar a alça de platina (bacteriológica) no bico de Bunsen;

Semear a amostra biológica, em 3 áreas na placa de Petri, em zigue-zague, afundando e

flambando a alça de platina a cada mudança de área. Realizar esse processo num raio de 10

cm da chama azul do Bico de Bunsen;

Fig. 1- forma das estrias no meio de cultura sólido.

Encubar em estufa a 37°C, até haver o crescimento bacteriano.

III. Análise microscópica.

Identificar as lâminas;

Preparar o esfregaço para coloração de Gram. No caso de meio de cultura solido, com a alça

de platina, adicionar uma gota de solução salina na lâmina, coletar 1 colônia do meio de

cultura e misturar na gota, dissolvendo a colônia. No caso de meio de cultura líquido, com a

alça de platina, coletar uma gota do meio de cultura liquido e depositar sobre a lâmina.

Realizar ambos os processos num raio de 10 cm da chama azul do Bico de Bunsen,

flambando a alça a cada processo;

Aguardar secar;

Corar a lâmina com o método de Gram;

Analisar no microscópio, com o condensador de luz alto e em objetiva de 100x, usando óleo

de imersão.

RESULTADO

Foram preparados dois cultivos primários: um em Agar sangue e outro em Agar EMB ou

Teague, sendo que o ultimo foi trago pronto para o uso pela professora. Em ambos os meios,

foram cultivadas bactérias do gênero Enterococcus.

Após o período de 3 dias de incubação, numa estufa a 37°C, foram observados as seguintes

resultados:

Placa com Agar sangue- foi observada presença de colônias da bactéria. Houve crescimento

bacteriano.

Placa com Agar EMB- não houve o crescimento da bactéria, mas foi observada que houve o

crescimento de fungo na placa.

As bactérias, após a coloração de Gram, na microscopia, apresentaram formato de bastão e

coloração roxa, sendo bastonetes Gram-negativos.

CONCLUSÃO

Houve o crescimento bacteriano no Agar sangue devido a sua característica de permitir

o crescimento de bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. Na placa com Agar EMB não

houve o crescimento de bactérias devido à sua característica de seletividade, pois ele é um

meio seletivo que permite o crescimento de bactérias Gram negativas, inibindo as Gram-

positivas, indicando que a bactéria em questão é Gram-positiva; fato que foi comprovado

pela visualização do esfregaço corado pelo método de Gram ao microscópio. Houve o

crescimento de fungo na placa com Agar EMB devido à contaminação no plantio primário,

possivelmente devido ao manuseio da placa fora do raio de esterilização da chama do bico

de Bunsen ou pela flambagem incorreta da alça de platina.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Descrição dos meios de cultura empregados nos exames microbiológicos. Disponível em:

˂http://www.anvisa.gov.br/servicosaude/manuais/microbiologia/mod_4_2004.pdf˃. Acesso

em: 25 mar. 2014.

Meios de cultura: tipos de meio de cultura, meios mais usados em microbiologia.

Disponível em: ˂http://www.ebah.com.br/content/ABAAAfPOsAI/meios-cultura˃. Acesso

em: 26 mar. 2014.