Reagentes-PCR protocolo
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5/12/2018 Reagentes-PCR protocolo - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/reagentes-pcr-protocolo 1/3
http://www.biotecnologia.com.br/revista/bio14/pcrnamicologia.pdf
Volume da reação para 25uL
A concentração para Taq polimerase está errada.
5/12/2018 Reagentes-PCR protocolo - slidepdf.com
http://slidepdf.com/reader/full/reagentes-pcr-protocolo 2/3
Meio reacional para PCR
Reagentes Volume em µl para
uma amostra
Conc. do
Estoque
Conc.
final
Observações
Água MilliQ 26 Autoclavada e tratada com UV
Tampão 10X (100mM
Tris-HCl pH 8,3, 15
mM MgCl2 e 500 mM
KCl, 0,01% gelatin)
5 10X 1x Estocada a -25°C. As novas concentrações finaispara Tris-HCl, KCl e gelatina são respectivamente:10mM, 50mM e 0,001%
dNTPs 1 10mM 0,2mM Estocar a -20°C. Evitar mudanças frequentes detemperatura. Mixar bem antes de usar.
BSA 2 10mg/ml 0,4mg/ml
Estocada a -25°C
Primer FW 2,5 25 µM 1,25 µM Estoque já diluído do frasco original, que está 100µM em TE.
Primer RE 2,5 25 µM 1,25 µM Estoque já diluído do frasco original, que está 100µM em TE.
MgCl2 ------------------ ------------------
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Já está presente no tampão 10X. Quando diluídosua concentração fica 1,5 mM (em muitostrabalhos a concentração variou de 0,5 a 2,5mM)
DNA 2 P material emEstocada a -25°C e p
Volume total 50