Reação de Hill e Extração de Pigmentos.1
-
Upload
octaviolomonaco -
Category
Documents
-
view
31 -
download
6
description
Transcript of Reação de Hill e Extração de Pigmentos.1
Bioquímica Experimental II
Reação de Hill e Extração de Pigmentos
Dayane Faviero
Matheus Francischini
Octavio Lomonaco
Tamara Poletti
Profª : Maria Eleonora Andrade de Carvalho
Fotossíntese
Anteriormente o processo de fotossíntese era conhecido como:
CO2 + H2O CH2O + O2
Nos meados da década 30 descobriu-se que algumas bactérias quando alimentadas com substrato apropriado eram capazes de em presença de luz reduzir o CO2 sem produção de O2, passando a equação à:
CO2 + H2 A CH2O + H2O + 2A-
Reação de HillO reagente de Hill fisiológico é o NADP+, onde ele é o aceptor artificial de elétrons.
2NADP+ + 2H2O 2NADPH+H+ + O2
Fig. 1- Absorção de luz e transporte de elétrons pelos fotossistemas II e I
DCPIP – 2,6-diclorofenolindofenol• É um indicador redox, sendo considerado um reagente de Hill.• Quando o extrato de folhas contendo cloroplasto é iluminado, em
presença do corante, o corante azul se torna incolor e O2 é produzido.•
Pigmentos
Pigmentos
Antocianinas:Presentes nas flores e frutos, conferindo as cores laranja, rosa, vermelho, violeta, são pigmentos polares e portanto hidrossolúveis, essas substancias ainda geram a atração de insetos e animais polinizadores, e causam a inibição de larvas.
ANTOCIANINASCLOROFILAS
Pigmentos
Carotenóides:São substâncias apolares e lipossolúveis, responsáveis pela coloração do amarelo ao laranja, presente em algumas frutas e vegetais, damasco, cenoura, abóbora, beterraba, e em menor quantia nos vegetais folhosos como couve, repolho, espinafre, agrião e brócolis entre outros, tem poder antioxidante (inibe radicais livres, prevenindo o envelhecimento)
Pigmentos
Metodologia
Materiais utilizados:• Espinafre• Acetona• Tampão fosfato de sódio 0,1 M, pH 7,0 com sacarose 0,3
M• 2,6-diclorofenolindofenol• Homogeneizador• Gaze• Banho de gelo• Papel alumínio
MetodologiaReação de Hill• Picar 15 g de folha de espinafre sem nervuras• Colocar em um homogeneizador com 50 mL de tampão fosfato com sacarose• Homogeneizar por 30 s a 70% da capacidade do homogeneizador• Filtrar imediatamente em 6 • camadas de gaze
Metodologia
Em cada tubo tinhamos:• 4,5 mL de Tampão Fosfato com sacarose• 2 gotas de DCPIP• 0,2 mL do homogeneizado
1-Tubo coberto com papel alumínio2-Tubo exposto a luz solar
Metodologia
Extração de pigmentos
- 5 folhas de espinafre/pétalas de rosa
- 15 mLs de acetona
- Descansar por 30 min
Metodologia
Cromatografia:
- Concentrar a solução (7x) no papel- Colocar o papel na mistura- Esperar 1 hora
Metodologia
Éter de petróleo /isopropanol4:1
ResultadosReação de Hill
No tubo 1, o corante DCPIP se manteve azul (não foi reduzido).
No tubo 2, o corante DCPIP foi reduzido, se tornando incolor, prevalecendo a coloração esverdeada da clorofila.
1 2
Teste de cromatografia em papel de pigmentos de espinafre e pétalas de rosa
O princípio que permite a análise usa a adsorção seletiva, na qual os componentes se separam em uma fase móvel (Éter de petróleo e isopropanol na proporção de 1:4)Éter de petróleo é um solvente apolar, o Isopropanol por sua vez é um solvente polar. E uma fase estacionária é desempenhada pelo Papel Whatman polar.
76mm
17 mm
Pigmentos
Clorofila do extrato de espinafre arrastada pela fração de solvente apolar (éter de petróleo). d = 74 mm e Rf = 0,97
Antocianinas como a pelargonidina e a cianidina de cores vermelha e carmim respectivamente, não se moveram muito, demonstrando afinidade com o papel polar. d = 17mm Rf = 0,22
Pequena quantidade de pigmento apolar no caso imaginamos serem carotenoides, eluídos em éter de petróleo apolar.d = 71mm Rf =0,94
Perguntas
Reação de Hill• Qual a diferença entre os tubos?• Por que ocorreu diferença na coloração? Esse
resultado era o esperado?• Qual o papel do DCPIP?• Por que durante a homogeneização foi necessário
o uso do tampão?• E por que as vidrarias estavam em banho de gelo?
Perguntas
• Extração de pigmentos:• Por que utilizamos acetona na extração?• Por que utilizamos eter de petróleo e isopropanol
na proporção 4:1?• Qual a polaridade do papel de Whatman?• Porque observamos duas marcas na amostra da
pétala?• Porque ambas as amostras apresentam uma marcana mesma altura?