Preparação da lâmina de extensão sanguínea (Esfregaço de Sangue)

Material: Sangue periférico

Técnica: Leishman

O leishmam é uma mistura de Romanowsky apresentando eosina, azul de metileno e azur de metileno na sua composição. O azur de metileno é o azul de metileno oxidado.

Seqüência na preparação da lâmina.

1. Fazer a assepsia do dedo em algodão embebido com álcool; 2. Furar o dedo utilizando uma microlanceta; 3. Colocar a gota de sangue na extremidade de uma lâmina histológica breviamante

limpa; 4. Utilizando-se de outra lâmina histológica, fazer corretamente o esfregaço

deixando uma película de sangue sobre a lâmina; Segurar a lâmina, contendo a gota de sangue, com os dedos polegar e

indicador da mão esquerda; Inclinar uma outra lâmina histológica a 450, segurando com os dedos

polegar e indicador, da mão direita. Levar a lâmina inclinada até o início da gota de sangue;

Quando a lâmina toca na gota, o sangue escorre em seu bordo. Ai deve-se fazer voltar a lâmina inclinada para trás, formando-se então a película de sangue.

5. Deixar secar ao ar; 6. Colocar a lâmina sobre um suporte na pia; 7. Cobrir o esfregaço com Leishman e deixar por 4 minutos; 8. Sem retirar o Leishman, adicionar água destilada e deixar por 7 minutos; 9. Escorrer a lâmina na pia; 10. Lavar a lâmina com água destilada; 11. Deixar secar ao ar;

12. Observar a lâmina com 1000x de aumento, utilizando a objetiva de imersão;

Observação de Sangue periférico

Observar com 1000x de aumento. Utilizar o óleo de imersão

Observar as hemácias (também denominados eritrócitos ou glóbulos vermelhos), leucócitos (também denominado glóbulos brancos) e as plaquetas.

O numero de hemácias varia de 4,5 a 6 milhões por mm3 de sangue, o número de leucócitos de 8.000 a 10.000 por mm3 de sangue e o de plaquetas de 150.000 a 400.000 por mm3 de sangue.

1. HEMÁCIAS

A quantidade de hemácias é muito maior que a de leucócitos e plaquetas, daí a predominância das mesmas no campo microscópico.

As hemácias que são células anucleadas quando adultas e que se coram em róseo-amarelado pela eosina.

2. Leucócitos

Os leucócitos estão subdivididos em granulócitos e agranulócitos.

Os granulócitos apresentam granulações específicas sempre com a mesma forma tamanho e ultraestrutura.

Os agranulócitos não apresentam granulações específicas.

Os núcleos de todos os leucócitos se coram em púrpura pelo azur de metileno.

• Linfócitos

Os linfócitos podem ser classificados em pequenos, médios e grandes. O seu núcleo ocupa quase toda célula e o citoplasma azulado fica mais na periferia.

• Monócitos

Os monócitos que geralmente apresentam o núcleo em forma de feijão ou de rim, são células grandes e com o citoplasma bem azulado.

Presença de hemácias,2 neutrófilos e monócito bem característico.

• Eosinófilo

Os eosinófilos geralmente apresentam o núcleo bilobulado com uma ponte cromatínica. Os grânulos são maiores que os dos neutrófilos e se coram em vermelho pela eosina.

• Basófilos

Os basófilos apresentam-se com núcleo que pode ter uma forma de “S”. Os grânulos do basófilo ficam bem escuros e podem mascarar o núcleo, no entanto, também estão presentes no citoplasma; e o seu nome já indica a sua afinidade.

• Neutrófilos

Os neutrófilos podem apresentar-se com núcleos em forma de bastão ou segmentados. Quanto maior o número de segmentos, mais velha é a célula. Os grânulos dos neutrófilos se coram em salmão por um mistura de componentes.

3. Plaquetas

As plaquetas que na realidade são fragmentos de megacariócitos se coram em vermelho, e apresentam-se relativamente menores em relação às hemácias.

As plaquetas ligadas à coagulação do sangue podem apresentar-se isoladas ou agrupadas sendo róseo-avermelhadas. Elas são pequenas, pois são fragmentos de células maiores chamadas megacariócitos.