SECRETARIA DE EDUCAÇÃO PROFISSIONAL E TECNOLÓGICAINSTITUTO FEDERAL SUL-RIO-GRANDENSECURSO DE QUÍMICA

Disciplina de Microbiologia II Profª. Lizângela Ferreira

Contagem de Microrganismos

A contagem de heterotróficos, também conhecida

como contagem padrão em placas, é um procedimento que

objetiva estimar o número de bactérias heterotróficas na

água, particularmente como uma ferramenta para

acompanhar variações nas condições de processo, no caso

das águas minerais, ou a eficiência das diversas etapas de

tratamento, no caso de águas tratadas. Permite ainda

verificar as condições higiênicas em diferentes pontos da

rede de distribuição.

O método de contagem em placas é uma técnica geral

de enumeração de microrganismos, que pode ser utilizado

tanto para a contagem de heterotróficos como também

para a contagem de outros grupos, gêneros ou espécies,

como Escherichia coli, Enterococcus, Pseudomonas,

Coliformes Totais e Fecais e outros. Essa versatilidade é

decorrente do princípio do método, que se baseia na

premissa de que cada célula microbiana presente em uma

amostra irá formar, quando fixada em um meio de cultura

sólido adequado, uma colônia visível e isolada. O que

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determina o grupo a ser contado é a seleção dos meios de

cultura (meios de enriquecimento, meios seletivos ou meios

seletivos diferenciais) e condições de incubação

(temperatura e atmosfera), selecionando o grupo, gênero

ou espécie que se deseja contar. Como as células

microbianas muitas vezes ocorrem em agrupamentos

(pares, tétrades, cachos, cadeias, etc.), não é possível

estabelecer uma relação direta entre o nº de colônias e o nº

de células. A relação correta é feita entre o nº de colônias e

o nº de “unidades formadoras de colônias” (UFC), que

podem ser tanto células individuais como agrupamentos

característicos de certos microrganismos.

Há três procedimentos básicos para a contagem de

microrganismos em placas:

Plaqueamento em Profundidade (pour plate):

Permite a inoculação de até 2,0mL de amostra as

suas diluições, indicado para a análise de amostras

com contagens acima de 102/mL, porque a inoculação

de diluições permite abranger uma faixa ampla de

variação.

Limite de Detecção: 1UFC/mL

Colocar em uma placa de Petri, com auxilio de uma

pipeta previamente esterilizada, 1mL do inóculo e em

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seguida verter o meio de cultura liquefeito. Após

misturar.

Plaqueamento em Superfície (spread plate): Limita

o volume inoculado a 0,1mL da amostra ou suas

diluições, mas permite uma melhor visualização das

características das colônias na superfície, além de

facilitar sua transferência para outros meios de

cultura.

Limite de Detecção: 10UFC/mL

Plaquear o meio de cultura e esperar solidificar. Com

uma pipeta previamente esterilizada, inocular sobre o

meio de cultura 0,1mL do inoculo e espalhar com o

auxilio de uma alça de Drigalski.

Filtração em Membrana: Permite analisar maiores

volumes, concentrando os microrganismos presentes

no volume inoculado.

Indicado para amostras com contagens abaixo de

1UFC/mL, fora do limite de detecção dos dois outros

métodos.

Contagem por Filtração em Membrana

Conjunto de filtração previamente esterilizado;

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Bomba de vácuo;

Membranas de 47mm de diâmentro, porosidade

de 0,45micrometros, brancas e quadriculadas;

Água de diluição (tampão fosfato com cloreto de

magnésio);

Placas Petri;

Provetas de 100mL estéreis;

Pinças para transferência das membranas,

mergulhadas em etanol;

Estufa incubadora regulada a 35ºC.

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