7/22/2019 Marquito - Biochemestry (1)

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Universidade Estadual do Paran campus Unio

da Vitria

Gustavo Kotarski

Vitor Sena Kosera

Julio Csar de Paula

REAES DE INDENTIFICAO DE PROTENAS, AMINOCIDOS

SULFURADOS, COM ANEL AROMTICOE REAO DE SAKAGUSHI

Relatrio apresentado como requisito parcial

para obteno de conceito na disciplina de

Bioqumica do curso de Licenciatura em

Qumica pela UNESPAR Universidade

Estadual do Paran campus Faculdade

Estadual de Filosofia Cincias e Letras de

Unio da Vitria.

Profo Marcos Joaquim Vieira

UNIO DA VITRIA

2014

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1. INTRODUO

Devido s ligaes peptdicas e presena de diferentes aminocidos,

as protenas reagem com uma variedade de reagentes, formando produtos

coloridos. Algumas reaes de colorao so especficas para aminocidosencontrados na composio das protenas, por exemplo: reao xantoproteca

(tirosina, triptofano e fenilalamina), reao de Millon (tirosina), reao de

HopkinsCole (triptofano), reao de Sakaguchi (arginina), etc. Estas reaes,

so importantes tanto na deteco como na dosagem de aminocidos e

protenas. Outras reaes, mais importantes, so aquelas chamadas de gerais,

porque iro caracterizar grupamentos comuns a todas as protenas, ou seja,

grupo amino e ligaes peptdicas.Aminocidos contendo enxofre (sulfurados) tambm exercem um papel

importante no metabolismo. Pode ser obtida a partir de alimentos, tais como as

sementes de gergelim, castanhas do Brasil, peixe, carne, ou atravs da

suplementao. Deficincia de metionina rara, mas quando presente, ainda

que parcialmente, pode levar reduo da taxa de crescimento, juntamente

com leses no fgado, perda de massa muscular, edema, leses na pele e

letargia.

2. OBJETIVOS

Esta prtica teve como objetivos caracterizar a presena de protenas

atravs de testes que reconheam a presena de peptdeos com mais de trs

resduos de aminocidos (reao do Biureto); a presena de arginina na cadeia

peptdica (reao de Sakaguchi); a presena de aminocidos sulfurados

(reao para aminocidos sulfurados).

3. PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

3.1 REAO DE IDENTIFICAO DE PROTENAS (cido-Base de Lewis):

Utilizou-se 4 tubos de ensaio, que foram separados em tubo com leite,

clara de ovo, gelatina e gua (Branco). Adicionou-se 1 mL de cada amostra em

seu respectivo tubo de ensaio. Em seguida foi adicionado mais 1 mL de

NaOH(2,5M). Os tubos foram homogeneizados, e se adicionou mais 1 mL deCuSO4 (5%), onde foi homogeneizada e anotada as mudanas de cor.

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Tubo 1

(Leite)

Tubo 2

(Clara de ovo)

Tubo 3

(Gelatina)

Tubo 4

(gua)

Amostra 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

CuSO4 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

NaOH (2,5N) 1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

3.2 REAO PARA AMINOCIDOS SULFURADOS:

Esta reao utilizada para verificar a presena de aminocidos

sulfurados em soluo. Separou-se 3 tubos de ensaio para a realizao das

reaes. Foi pipetado em um tubo de ensaio 1 ml de leite, clara de ovo e

soluo de gelatina. Em seguida, adicionou-se 1 ml de NaOH 2,5 N e a soluo

foi aquecida durante um minuto. Juntou-se, ento, 5 gotas de acetato de

chumbo e a soluo foi aquecida durante 5 minutos.

3.3 Reao de identificao de aminocidos com anel aromtico:

Em 2 tubos de ensaio, respectivamente, foi adicionados 1mL de leite e

clara de ovo, cada uma em um tubo de ensaio. Aps isso, foram adicionados

as solues nos tubos de ensaio, com uma pipeta, nos 2 tubos de ensaio, mais

1 mL de cido ntrico (HNO3), homogeneizou-se e levou para aquecer por 5

min. Aps o aquecimento adicionou-se mais 4mL de NaOH(10M), e

homogeneizado novamente, e anotou-se os resultados.

Amostra HNO3

Aquecer embanho-maria

5 min

NaOH 10M

Tubo 1

(Clara de ovo)

1 mL 1 mL 4 mL

Tubo 2 (Leite) 1 mL 1 mL 4 mL

3.4 REAO DE SAKAGUCHI:

Esta reao utilizada para verificar a presena da arginina em soluo.Foi pipetado 1 ml das amostras em seus respectivos tubos de ensaio. Em

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seguida, adicionou se 5 mL de NaOH 2,5 N, 5 gotas da soluo de alfa-naftol e

4 gotas de hipoclorito de sdio.

4. RESULTADOS E DICUSSES

4.1Na reao de identificao de protenas (cido-Base de Lewis), o

sulfato de cobre (CuSO4) interage com o aminocido, porm essa reao s

acontece em soluo alcalina, por isso foi adicionado NaOH (2,5 N), com essa

atrao ouve uma mudana tanto em sua estrutura, quanto na sua cor, que

ficou violeta, que deu positivo para biureto, assim conseguiu-se identificar qual

das solues possui protena em sua constituio, e qual era apenas gua

(branco). A cor desenvolvida numa reao de ons de Cu2+em meio alcalino

com estas protenas deve-se exclusivamente s ligaes peptdicas e a sua

intensidade proporcional quantidade de tais ligaes.

4.2 Na reao para aminocidos sulfurados, o aquecimento de protenas

em meio alcalino resulta na liberao de enxofre da cistena e da cistina, sob a

forma de sulfato. O sulfato evidenciado pela adio de acetato de chumbo,

dando precipitado castanho ou preto de sulfeto de chumbo. A soluo com

protenas apresentou colorao escura, o mesmo no pode ser observado na

soluo controle, com gua destilada no lugar da soluo de protenas.

4.3 Na reao de identificao de aminocidos com anel aromtico, teve

2 amostras, sendo que uma era clara de ovo e outra era leite, que so

identificadas por possurem anel aromticos. O tubo contendo a clara de ovo

mudou de colorao, ficando marrom, ento a amostra constituda por

protenas. O tubo contendo leite mudou de colorao para um tom de marrom

(ch), em decorrncia de a amostra possuir mais de um anel aromtico em suacomposio.

4.4 Na reao de Sakaguchi, o grupamento guanidina presente na

arginina reage em meio alcalino com o alfa-naftol e hipoclorito, resultando em

um produto de colorao avermelhada. O tubo de ensaio com a soluo de

protenas apresentou colorao avermelhada, indicando a presena de arginina

no peptdeo.

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5. CONSIDERAES FINAIS

A partir dos resultados observados, conclui-se que possvel determinar

a presena de protenas em soluo com o auxlio de reaes qumicas

conhecidas, bem como a natureza de alguns aminocidos presentes nestasprotenas.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

- SACHS, L. G. Aminocidos e Protenas Disponvel em Acessado :

20/05/2014 s 20:33 hrs.

- STEFANI, R. Propriedades Fsicas e Reaes de Protenas Disponvel em

< http://pt.slideshare.net/ricstefani/q-alimentos-proteinas-reaes > Acessado:

21/05/2014 s 9:13 hrs.