LEUCÓCITOS leukos =...
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Valores de referência em Hematologia (Williams Hematology, 7th Ed., 2006)
Valores de referência em Hematologia (Williams Hematology, 7th Ed., 2006)
Valores de referência em Hematologia (Wintrobe Hematologia Clínica, 9ª Ed., 1998)
HEMATOPOESE
Compartimentos dos leucócitos
• Medula óssea
• Sangue periférico
• Tecidos
Leucograma avalia os leucócitos do sangue periférico
Compartimentos dos leucócitos
Fonte: Hoffbrand et al, 2004 – Fundamentos de Hematologia
Leucograma
• Contagem dos leucócitos totais
Câmara de contagem de células
Automação
• Contagem diferencial relativa
Contagem de no mínimo 100 leucócitos diferenciando pelo tipo de leucócito (um a um).
• Contagem diferencial absoluta
Com o número de leucócitos totais e as porcentagens de cada célula obtidas na contagem diferencial é possível calcular o número absoluto de cada um dos leucócitos
Leucograma
Contagem diferencial relativa • Contagem de no mínimo 100 leucócitos diferenciando pelo tipo de células • Se houver leucocitose (contagem global de leucócitos > 10 . 103/uL) deve-se contar na
contagem diferencial maior número de células (200 ou 500).
Para identificar cada um dos leucócito, utilize os seguintes
critérios morfológicos:
Tamanho da célula
Razão núcleo/citoplasma
Características do citoplasma (cor, presença ou ausência de grânulos, cor e tamanho dos grânulos)
Características do núcleo
(forma, cor, padrão de cromatina, presença e ausência de nucléolo)
Os leucócitos podem ser classificados
Granulações no citoplasma • Granulócitos (neutrófilos, eosinófilos e basófilos)
• Agranulócitos (monócitos e linfócitos)
Segmentação do núcleo • Polimorfonucleares (neutrófilos, eosinófilos e basófilos)
• Mononucleares (monócitos e linfócitos)
De acordo com a função
• Fagócitos (neutrófilos, eosinófilos, basófilos e monócitos)
• Imunócitos (linfócitos)
Granulócitos
Agranulócitos
LEUCÓCITOS
NEUTRÓFILOS
EOSINÓFILOS
BASÓFILOS
LINFÓCITOS
MONÓCITOS
Contagem relativa dos leucócitos
• É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.
Campo muito grosso Campo adequado Campo muito fino
Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no
mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.
Campo muito
grosso Campo adequado Campo muito fino
Contagem relativa dos leucócitos • É realizada através da análise morfológica dos leucócitos, contando no
mínimo 100 leucócitos, diferenciando célula a célula.
A
A
B
A – Cerca de 25 células
B- Cerca de 50 células
Contagem relativa dos leucócitos As células não tem distribuição uniforme na extensão sanguínea
Cabeça Corpo Cauda
Os linfócitos predominam no meio da extensão
Neutrófilos e monócitos predominam nas margens e na cauda
LEUCÓCITOS
Linfócito
Monócito
Neutrófilo Eosinófilo
Basófilo
LEUCOGRAMA
Avalia alterações quantitativas e morfológicas dos leucócitos
Contagem dos leucócitos totais
Valores de referência: 5,0 a 11,0 x 103/uL (ou 109/L)
ou
4,0 a 11,0 x 103/uL
- Leucocitose = leucócitos totais > 11,0 x 103/uL
- Leucopenia = leucócitos totais < 4,0 x 103/uL
Exemplo Contagem de leucócitos totais: 9,0 x 103/L
Células % Número absoluto
( /L)
Neutrófilos bastonetes 02
Neutrófilos segmentados
57
Eosinófilos 03
Basófilos 01
Linfócitos 31
Monócitos 06
total 100
Contagem de leucócitos totais: 9,0 x 103/L
Neutrófilos bastonetes
9.000 -------------------------- 100%
x -------------------------- 2%
X= 180 neutrófilos bastonetes/ L
Neutrófilos segmentados
9.000 -------------------------- 100%
x -------------------------- 57%
X= 5.130 neutrófilos segmentados/ L
Fórmula leucocitária relativa e absoluta
Células % Número absoluto
/L de sangue
Neutrófilos bastonetes 02 180
Neutrófilos segmentados
57 5.130
Eosinófilos 03 270
Basófilos 01 90
Linfócitos 31 2.790
Monócitos 06 540
total 100 9.000
Neutrófilos
Disciplina de Fisiologia do Sistema Hematopoético 2011
Neutrófilos
• É o leucócito mais frequente no sangue periférico do adulto
• Apresenta vários estágios de maturação (mieloblastos, promielócitos, mielócitos, metamielócitos, neutrófilos
bastonetes e neutrófilos segmentados)
A meia vida dos neutrófilos desde a fase de mieloblasto até a morte é de 9 a 10 dias
• No sangue periférico são encontrados, fisiologicamente, poucos neutrófilos bastonetes ( 2 a 5%) e grande frequência ( 50 a 60%) são neutrófilos segmentados
• No sangue do adulto é o leucócito mais predominante
(40-70%)
• Alto poder de fagocitose
• Primeira linha de defesa contra microorganismos
• Vida-média curta na circulação sanguínea (6 horas)
• Pool de neutrófilos: Medula Óssea, Circulação Sanguínea e Tecidos
NEUTRÓFILOS - características
Williams 7ª ed.
• Núcleo
- polimórfico
- 2-5 lóbulos
- cromatina condensada de coloração púrpura
• Citoplasma
- ligeiramente acidófilo
- granulações abundantes, finas e de coloração rósea
• Tamanho: 12-15 µm
NEUTRÓFILOS - morfologia
Williams 7ª ed.
Constituintes dos grânulos dos neutrófilos
Grânulos específicos
Lactoferrina Lizozima Fosfatase alcalina Colagenase tipo IV
Grânulos Azurófilos
MPO (mieloperoxidase) Lizozimas Elastase Colagenase Catepsina G
GRÂNULOS PRIMÁRIOS
ou
GRÂNULOS SECUNDÁRIOS
ou
Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489.
NEUTRÓFILOS – maturação e morfologia
NEUTRÓFILOS – maturação e morfologia
IL-3 Atua em fases precoses da hematopoese, afetando as células pluripotentes.
GM-CSF Estímulo de granulócitos-monócitos
G-CSF Estímulo de granulócitos
Stem Cell factor Estímulo para células progenitoras
Regulam a produção, sobrevivência e atividade
funcional
NEUTRÓFILOS – maturação
Granulação Início Conteúdo
Grânulos azurófilos Promielócito Hidrolases Fosfatase ácida Β-glicuronidase Mieloperoxidase Elastase Arilsulfatase Proteínas cationicas
Grânulos específicos Mielócito Lisozima Lactoferrina Colagenase Ativador de plasminogênio Aminopeptidase
Grânulos terciários Mielócito Gelatinase
Organelas citoplasmáticas
Fosfatase alcalina
NEUTRÓFILOS – grânulos
• Quimiotaxia
Citocinas
Monocinas
Toxinas bacterianas
Células e tecidos necrosados
• Diapedese
Selectinas e integrinas
Moléculas de adesão intercelular (ICAM)
• Comunicação com outras células
Recrutamento de células para o local da infecção
NEUTRÓFILOS – funções
Fagocitose
Degranulação ou ação
enzimática;
Geração de radicais oxidantes
Queda do pH no interior do fagossoma.
NEUTRÓFILOS – Funções
Fagocitose
Fagocitose
1) Reconhecimento e fixação da partícula 2) Engolfamento 3) Destruição ou degradação
Mecanismos dependentes de O2 (O2- e MPO)
Lizozima, lactoferrina, proteína básica principal
NEUTRÓFILOS – quimiotaxia e diapedese
Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489.
Borregaard, 2010. Immunity, 33.
NEUTRÓFILOS – quimiotaxia e diapedese
Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489.
NEUTRÓFILOS – mecanismos de ação
Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489.
NEUTRÓFILOS – comunicação com outras células
Amulic et al. Annu. Rev. Immunol. 2012.30:459-489.
NEUTRÓFILOS – inflamação
Produção de neutrófilos, eosinófilos e basófilos
Granulopoese
Neutrófilos
Fonte: Hoffbrand et al, 2004 – Fundamentos de Hematologia
Mieloblastos (mais imaturo)
Promielócitos
Mielocítos
Metamielócitos
Neutrófilos bastonetes
Neutrófilos segmentados
TECIDOS
Borregaard, 2010. Immunity, 33.
GRANULOPOESE
Cinética dos neutrófilos
MEDULA ÓSSEA
Pool mitótico (2 a 3 dias) Maturação e estoque (5 a 7 dias)
Stem cell, mieloblastos,
promielócitos e mielócitos Metamielócitos, bastonetes e
neutrófilos segmentados)
Pool mitótico
Quatro ou cinco
divisões
Cinética dos neutrófilos
SANGUE PERIFÉRICO
Medula óssea
Sangue
(margem)
Tecidos
Sangue
(pool circulante)
Tempo médio de vida: 5-10 dias
Maturação
Reserva
NEUTRÓFILOS – compartimentos
Cinética dos neutrófilos
Em condições de estresse e em processos reacionais
O tempo de maturação pode ser diminuído
O número de divisões podem ser abolidas
As células podem ser liberadas no sangue periférico precocemente
Em processo infecciosos
O tempo decorrido do estágio de mielócito a neutrófilo segmentado no sangue periférico pode ser reduzido a 48 horas.
Cinética dos neutrófilos
Os neutrófilos circulam no sangue periférico cerca de 6 a 10 horas
Aproximadamente a metade da quantidade de neutrófilos presentes
no sangue periférico estão marginados
Mudanças na posição de marginados para circulantes podem ocorrer
em condições de estresse, exercícios físicos ou após a
administração de adrenalina, levando a leucocitose transitória
A taxa de produção de neutrófilos é de 1,63 x 109 células/ kg de
peso corpóreo
Esta produção pode aumentar dramaticamente frente a um
estímulo inflamatório
Neutrofilia
Número de neutrófilos > 8.000 /uL
(contagem absoluta desta célula no hemograma)
NEUTROPENIA
Número de neutrófilos < 2.000/ul
Intensidade da neutropenia:
• Discreta: 1.000 a 2.000 neutrófilos/uL de sangue
• Moderada: 500 a 1.000 neutrófilos/uL de sangue
• Grave: < 500 neutrófilos/uL de sangue
EOSINÓFILOS
Eosinófilos
célula de 10-15µm
granular, com afinidade por eosina
originada a partir de cél. hematopoética CD34+
IL3, IL5 e GM-CSF são críticas para a estimulação da MO para a sua produção
essas citocinas também são produzidas por linfócitos T, CD4 e CD 8+
Citoplasma com granulação grosseira alaranjada
Núcleo polimórfico (normalmente bilobulado)
Tamanho: 10-15 µm;
Frequência relativa: até 4%
EOSINÓFILOS - morfologia
Grânulos contém proteína básica tóxica para parasitas e células
Também contém hidrolases ácidas, peroxidases, fosfolipases e catepsinas
Neutraliza a heparina e induz liberação dos basófilos
Os eosinófilos secretam IL-1, IL-3, IL-6, IL-8, TNF-α e GM-CSF
EOSINÓFILOS - grânulos
• Grânulos ricos em enzimas
• Vida média na circulação = 14-18h
• Migram para os tecidos permanecendo por aproximadamente 12 dias
• Eosinófilos maduros expressam CD16 e CD32.
EOSINÓFILOS - características
• Combate a parasitas multicelulares
Degranulação
“Fagocitose frustrada”
Citotóxico para parasitas e células hospedeiras
Através dos receptores Fc, os eosinófilos se conjugam com os parasitos recobertos com anticorpos, degranulam e liberam o seu conteúdo granular sobre a cutícula dos parasitos
• Fagocitose de complexos Ag-Ac
• Resposta alérgica
EOSINÓFILOS - funções
• Liberação de mediadores pró-inflamatórios
Estimula liberação de histamina pelos basófilos
• Apresentação de Ag à linfócitos T
• Redução de respostas inflamatórias
EOSINÓFILOS - FUNÇÕES
Valores da normalidade no sangue periférico
• 50-500/µL
• Eosinofilia:
• Leve: 500-1500/µL
• Moderada: 1500-5000/µL
• Severa: > 5000/µL
VALORES DE REFERÊNCIA PARA EOSINÓFILOS
BASÓFILOS
Citoplasma com granulação grosseira preta ou roxa
Núcleo polimórfico
Tamanho: 12-14 µm
Frequência relativa: 0-1%
BASÓFILOS - morfologia
• Participam de reações alérgicas – reações de
hipersensibilidade imediata
•Promovem atração de eosinófilos
•Produzem mediadores químicos importantes
BASÓFILOS - FUNÇÕES
• Histamina – participa reação inflamatória
• Prostaglandinas – dor e broncoconstrição
• IL-3 – atração de eosinófilos
BASÓFILOS - Mediadores químicos principais
BASOFILIA (> 0,3/ L )
• reações de hipersensibilidade
• leucemia mielóide crônica
• policitemia vera, metaplasia mieloide
MONÓCITOS
Citoplasma azul acinzentado (vacúolos)
Núcleo irregular (reniforme)
Maior leucócito circulante
Vida na circulação: 1-3 dias
Tamanho: 12-20 µm
Frequência relativa: 1 a 10%
MONÓCITOS - morfologia
Fagocitose – bactérias, debris celulares, células senescentes, partículas
Processamento de antígenos
Imunidade celular - citotoxicidade celular dependente de anticorpos
Produção de citocinas
Macrófagos
MONÓCITOS - funções
Tamanho maior que o monócito
Grânulos no citoplasma
Formas heterogêneas
Vacúolos
Modula respostas à citocinas
Secreção de moléculas bioativas
MACRÓFAGOS - tecidos
Macrófagos alveolares Células de Kupffer Foam cell
MACRÓFAGOS
Localizações comuns:
• Intestino
• Trato Genitourinário
• Pele
• Pulmões
• Medula óssea (histiócito)
MACRÓFAGOS
Ingersoll et al. Trends in Immunology 32(10). 2011.
MACRÓFAGOS
Ingersoll et al. Trends in Immunology 32(10). 2011.
Shi e
Pam
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Nat
Rev
Imm
un
ol.
11
(11
):7
62
-74
. 20
11
.
LINFÓCITOS
LINFÓCITOS
Tipos de linfócitos
Linfócitos T
Linfócitos B
Natural killer - NK
Não é possivel identificar cada um dos
tipos de linfócitos através da análise
morfológica (corantes de Romanovsky)
Identificação é feita através dos antígenos
de diferenciação (citometria de fluxo)
CD “cluster differentiation”
Citoplasma azul acinzentado
Núcleo pleomórfico
Alta relação N/C
Tamanho: 8-10 µm
Meia vida na circulação: dias, meses ou anos
Frequência relativa sangue adulto: 25 a 35%
Frequência diferente em crianças e adultos
LINFÓCITOS - morfologia
LINFÓCITOS
Tipos de linfócitos
Linfócitos T (resposta imune celular)
Linfócitos B (resposta imune humoral)
Natural killer – NK (resposta imune
inespecífica)
LINFÓCITOS
Tanto os linfócitos T como os B são capazes de
recircular do vaso para tecido e vice versa
Ativação da resposta imune depende:
Interação entre linfócitos T, B e células dendríticas
Moléculas de adesão presentes nas membranas
celulares
Os linfócitos T podem ser ativados
Estas células que apresentam morfologia de
células maduras, após a ativação readquire
a aparência de blastos e entra em divisão
LINFÓCITOS LINFÓCITOS T
A maioria dos linfócitos circulantes são
linfócitos T (~ 80%)
Função
Imunidade mediada por células
(reconhecimento de antígenos)
Inclui a hipersensibilidade tardia, rejeição
de enxertos, reações enxerto-hospedeiro,
defesa contra organismos intracelulares
(como os bacilos da tuberculose e
brucelose) e provavelmente defesa contra
células neoplásicas.
• Imunidade celular
• Produção de citocinas
• Regulação dos linfócitos B
• Tipos: T helper e T citotóxico.
Funções do Linfócito T
Disciplina de Fisiologia do Sistema Hematopoético 2011
SUB-TIPOS DE LINFÓCITOS T
(Classificados quanto a função)
Linfócitos T auxiliares (Helper) – CD4
São aqueles que induzem a síntese de
imunoglobulinas pelos linfócitos B.
Ativam LT CD8 e Macrófagos (MØ).
São sub-divididos em:
CD4 tipo 1 ou Th1: secretam IL2 e interferon
gama, mas não secretam IL 4,5 e 6 – predomínio de
resposta celular (LT e MØ).
CD 4 tipo 2 ou Th2: secretam IL 4,5 e 6 e não
secretam IL2 e interferon gama – predomínio de
resposta humoral (LB)
LINFÓCITO
Linfócitos ATIPICOS (reativos)
SUB-TIPOS DE LINFÓCITOS T
(Classificados quanto a função)
Linfócitos T citotóxicos – CD8
-Células infectadas
-Células neoplásicas
-Células alogênicas
Disciplina de Fisiologia do Sistema Hematopoético 2011
LINFÓCITOS
LINFÓCITOS B (~10-15%)
atuam na imunidade humoral, ou seja, na
produção e secreção de anticorpos, após
a transformação em plasmócito (Ag-
específico).
Marcadores de linfócitos B
CD34+
CD38+
CD10+
CD19+
Imunidade humoral
Produção de anticorpos
Apresenta Ag para o Linfócito T
Plasmócito
Funções do Linfócito B
Medula óssea
Linfócito
LINFÓCITOS
NK “natural killer”
São desprovidos de marcadores de
células T e de células B, são chamados
de células “null”
Cerca de 5 % do total da população de
linfócitos
Sua função é destruir as células
infectadas e células neoplásicas.
Tem receptor para Fc de IgG
Marcadores: CD16+ e CD56+
Funções das células NK
• Imuno-regulatórias - potente capacidade de produção de citocinas
• Função citotóxica – destruição de células infectadas e células tumorais
LINFOCITOSE
O aumento de células em divisão nos linfonodos e no baço é responsável pela linfocitose no sangue periférico
Linfocitose = aumento do número absoluto de linfócitos no sangue periférico
Número de linfócitos > 4,5 .103/uL no adulto
Número de linfócitos > 9,0 . 103/uL na criança
fase aguda das infecções
corticoterapia, quimioterapia, radioterapia
lupus eritematoso sistêmico
infecções por vírus, AIDS, sarampo, polio, varicela
estresse e desnutrição protéico calórica
LINFOCITOPENIA ( < 1.000/ L ) Cecil linfopenia < 1.500 linfócitos/ L
Martini. Fundamentals of Anatomy & Physiology. 6ed. Cap22, 2004.
Maturação e distribuição dos linfócitos
NK CELLS
Viv
ier
et a
l. N
at Im
mu
no
l. 9
(5).
20
08
Williams 7ª ed.
NK cell functions. The known and suspected biological roles of NK cells are indicated in red and blue, respectively.
Viv
ier
et a
l. N
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mu
no
l. 9
(5).
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08
Células NK