José Luiz Pedreira Mouriño - Embrapa · 21 Efeito da utilização de bactérias probióticas...
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José Luiz Pedreira MouriñoUniversidade Federal de Santa Catarina
Departamento de Aquicultura
Laboratório de Camarões Marinhos
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1. Introdução Definição de ProbioticosPor que utilizar os probioticos...
2. Características desejáveis em um probiotico
4. Modos de ação e Seleção de probioticos
5. Experiências acompanhadas......
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1.FULLER (1987)
2.GRAM et al. (1999)
3.VERSCHUERE et al., (2000)
4.GATESOUPE(1999)
Obs: BOYD E MASSAUNT (1999)
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Definição de Acordo com as vias de aplicação e ação dos microorganismos
Melhora da qualidade de Água.Antagonista a patógenos
Não ou incerto Sim
Adaptado de Gatesoupe(1999)
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Desequilíbrio ambiental
Enfermidades
Probioticos
Por que utilizar estes produtos...
AlternativasAlternativas para combate , diminuição ou erradicação
BiocontroleBiorremediaçao
Via tradicional
Uso indiscriminado
Resistência a antibióticos
Esquema adaptado de Ricardo Cedeño, CENAIM, Equador
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Uso indiscriminado de antibióticos
Bactérias Resistentes
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Figura 1: Flutuação na população de bactérias de um tanque de larvicultura pela utilização de um antibiótico (adaptado de Maeda et al, 1997) .
48 horas no caso da agrimicinaTempo em horas
Aplicação de um antibiótico
bac
téria
s (c
élu
las
por
ml)
106
48 horas no caso da agrimicinaTempo em horas
Aplicação de um antibiótico
bac
téria
s (c
élu
las
por
ml)
106
48 horas no caso da agrimicinaTempo em horas
Aplicação de um antibiótico
bac
téria
s (c
élu
las
por
ml)
106
48 horas no caso da agrimicinaTempo em horas
Aplicação de um antibiótico
bac
téria
s (c
élu
las
por
ml)
106
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1 – Atua rapidamente no equilíbrio microbiano ecológico
2 – Não deixa resíduos
3 – Não causa impacto negativo ao meio ambiente (avaliando sempre o microorganismo a ser trabalhado)
1 – Difícil isolar bactérias benéficas,
2 – Necessita de conhecimento da microflora
3 – Difícil a produção em larga escala.
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Características desejáveis de um probiótico
1 – Inibir a proliferação de patógenos por exclusão
competitiva ou produção de compostos
inibitórios
2 – Melhorar a taxa de crescimento do animal
3 – Melhorar a conversão alimentar
4 – Melhorar a sobrevivência frente a infecção por
patógenos5 – Produzir substâncias imunoestimulantes6- Melhorar a qualidade de água
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Possiveis Modos de Açao
Muitas publicaçoes na aquicultura
Se o candidato nao se proliferar dentro do trato digestivo é bem possivel que seu efeito seja fraco, necessitando aplicaçao continua via dieta ou aplicaçao na agua.
Ele deve sempre alcançar a localizaçao do efeito desejado.!!!!!!!!!!
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Antagonismo à patógenos
Probiótico
Patógeno
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Devem produzir químicos com características bactericidas e bacteriostáticas
Produtos:
Antibióticos, bacteriocinas, sideroforos, lisozimas , proteases, peróxido de hidrogênio, ácidos orgânicos........
Probiótico
Patógeno
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Competição por substratos orgânicos
C:N
podepode --se manipular a microbiotase manipular a microbiota
Exemplo: Exemplo:
1 sistemas superintensivos de cria1 sistemas superintensivos de cria çção sem renovaão sem renova çção.ão.
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�Este é provavelmente o primeiro efeito probiótico
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Seleçao de Probióticos
Adaptado de Verschuere et al. (2000)
Aquisição de cepas bacterianas
Screnning in vitro
Screnning in vivo em pequena escala
ok
Teste de patogenicidade frente ao organismo alvo
ok
Experimentos in vivo , escala piloto
ok
Patogenicidade frente a outros níveis tróficos envolvidos (se tiver)
ok
PROBIOTICO
NAO
NAO
NAO
NAO
LIXO
17Bactérias diversasIsolamento por
esgotamentoCepa pura
Isolamento das cepas
retirada do trato digestivo
macerado
Semeado em MRS
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- Monitoramento microbiológico da produção de larvas de peneideos;
- Isolamento e caracterização de cepas patogênicas de camarões e peixes;
-Formação de material humano;
- Desenvolvimento de linhas de pesquisa:
a) Desenvolvimento de Probióticos para aquicultura;
b) Desenvolvimento de vacinas (celulas inativadas bacterianas) para peixes e camaroes.
c) Avaliaçao de Antimicrobianos alternativos (Cal, Extrato de algas, etc);
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Experiências....
� Dados com camarões
� Dados com tilápias
� Dados com Jundiás
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AVALIAÇÃO DA CAPACIDADE DE CEPAS DE BACTÉRIAS LÁTICAS ISOLADAS DE CAMARÕES MARINHOS (Litopenaues vannamei) NO SUL DO BRASIL NA
INIBIÇÃO IN VITRO DE Vibrio harveyi
Trabalho apresentado no V SIRGEALC Montevideo-Uruguai
Felipe do Nascimento Vieira1, Celso C. Buglione Neto1, Cristina Ramirez 2,3, Elpídio Beltrame1 , Fabiola Santiago Pedrotti1, Luis A.
Vinatea1, José Luiz Pedreira Mourino1
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Efeito da utilização de bactérias probióticas ácido-lácticas na
larvicultura de camarões marinhos (Litopenaeus vannamei) quanto àsobrevivência e microbiologia da
água e larvas.
Trabalho apresentado no I CBBM Niteroi-RJ
Felipe do Nascimento Vieira, Fabiola Santiago Pedrotti, Celso C.Buglione Neto, Elpídio Beltrame, Maurício Laterça Martins, Cristina Ramirez, Luis Alejandro Vinatea, José Luiz Pedreira Mouriño.
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Sobrevivência na Larvicultura (até PL1)
0102030405060
cepa 1 cepa 2 controle
Tratamentos
sobr
eviv
ênci
a (%
)
cepa 1
cepa 2
controle
23
0
1
2
3
4
5
6
7
cepa 1 cepa 2 controle
log(
UF
C)/
mL
cepa 1 cepa 2 controle
Contagem do macerado de larvas em TCBS
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Sobrevivência da larvas após 48h da infecção por Vibrio harveyi
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Sobrevivência às 48h
cepa 1 infectada por V.harveyi
Sem a inoculação demicroorganismos
cepa 2 infectada por V.harveyi
sem probióticosinfectada por V. harveyi
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USO DE DIETA SUPLEMENTADA COM BACTÉRIAS PROBIÓTICAS NO CONTROLE DE BACTÉRIAS PATOGÊNICAS EM CAMARÕES MARINHOS (Litopenaeus vannamei)
Vieira, F.N; Buglione, C.C.; Jatobá, A.; Pedrotti, F.S1; Beltrame, E.; Vinatea, L.A.; Martins, M.L.; Barracco, M.A. & Mouriño, José Luiz
Pedreira
Trabalho apresentado no V ENBRAPOA em Maceió
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Objetivo
Este trabalho objetivou avaliar o efeito da adição de inoculo da
bactéria Lactobacillus B6 na dieta de camarões mari nhos
(Litopenaeus vannamei) durante a engorda no (a):
a) ganho de peso dos camarões;
b) flora bacteriana do trato digestivo dos camarões;
c) na sobrevivência dos camarões após a infecção por V. haveyi;
d) na contagem de hemócitos e atividade da enzima fe noloxidase
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Material e Métodos
Engorda:
400 PL20 por tanque de 1000L
4 tanques alimentados com dieta suplementada com probióticos
4 tanques alimentados com dieta sem probióticos
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Material e Métodos
Condições experimentais:
- temperatura 29 ± 2oC
- renovação de 100% de água diário
- alimentação em bandejas 4x ao dia
- biometrias realizadas a cada 15 dias
sistema de água clara Alimentação em bandejas
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Material e Métodos
microbiologia do trato digestivo:
retirada do trato
digestivo
Macerado em água estéril e diluído
serialmente (1/10) 5x
TCBS
MRS
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Material e Métodos
Infecção experimental com 30 camarões por tanque de 100L:
Alimentado com probiótico e inoculado com solução salina
Alimentado com probiótico e inoculado com Vibrio harveyi
Alimentado com ração controle e inoculado com
solução salina
Alimentado com ração controle e inoculado com
Vibrio harveyi
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Resultados
0,00
1,00
2,00
3,00
4,00
5,00
6,00
20/3 27/3 3/4 10/4 17/4 24/4 1/5 8/5 15/5 22/5 29/5 5/6data
peso
(g)
Controle Probiotico
Curva de crescimento dos camarões:
32
0
1
2
3
4
5
6
25/4 25/06
Probiótico Controle
Quantificação de bactérias lácticas no trato digestivo
Dados expressos em log(ufc/g)
a
bb
b
a
33
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
probiótico +salina
controle +salina
probiótico +vibrio
controle +vibrio
sobr
eviv
ênci
a (%
)
Sobrevivência dos camarões após 10h da infecção
a
c
b
a
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Contagem de Vibrio na hemolinfa
0
100
200
300
400
500
600
Probiótico +salina
Controle +salina
Probiótico +vibrio
Controle +vibrio
ufc/
mL
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- O probiótico não teve efeito no crescimento dos camarões
- O probiótico teve ação inibitória nas bactérias do trato digestivo dos camarões
- O probiótico melhorou a sobrevivência dos camarões a infecção por V. harveyi
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-Trabalho desenvolvido pelo mestrando Adolfo Jatobá, (AQI, CCA, UFSC).
- Isolou 15 possíveis cepas de tilápias
- As cepa mostraram boa capacidade de inibição in vitro de patógenos
- Colonizaram tilápias
- Melhoraram o sistema imune das tilápias (maior proliferação de células de defesa)
- Serão testadas em policultivo na Fazenda Experimental Yakult no final do ano
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39
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•potencial uso probiótico na aquicultura •boa eficácia no combate in vitro frente diversos patôgenos.
•As cepas suplementadas a ração alteraram a colonização da microflora gastrointestinal da tilápia do Nilo, modificando a dominância de Enterobácterias para bactérias ácido-láticas • melhoraram a resposta hematológica dos animais desafiados com Enteroccoccus sp., aumentando o número de suas células de defesa.
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Isolamento e seleção de cepas probioticas em Jundiá.
Halos de inibição em mm
BAL V.H. V. alg.V. ang HER Ent. D. M.L. E.C. P.A A.h
Q1 9 13 10 0 15 0 11 10Q2 0 8 0 0 0 0 14 8Q3 0 9 9 11 15 11 12 8Q4 0 8 0 0 0 0 0 8Q5 0 8 9 0 0 0 14 8Q6 0 14 10 9 20 9 16 11Q7 0 8 0 3 10 0 13 8Q8 9 10 0 6 16 14 14 8Q9 0 10 3 0 18 12 9 8
Q10 0 9 0 6 13 13 12 9Q11 0 12 9 0 19 19 0 9LV4 0 8 9 0 21 21 0 9
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Experiências...
� Equipe técnica envolvida:� 3 pós graduandos: � Felipe do Nascimento Vieira (Doutorando)
� Celso Carlos Buglione (Mestrando) � Adolfo Jatoba (Mestrando)
� 2 graduandos: Fabiola Santiago Pedrotti e Bruno Correa.
� Professores envolvidos: Mauricio Laterça Martins e Elpidio Beltrame.
Equipe do setor de Microbiologia do LCM-UFSC