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Isospora belli
Cryptosporidium spp
Cyclospora cayetanensis
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Apicomplexa Filo: Apicomplexa
Classe: Sporozoea
Ordem: Coccidiida/ Eucoccidiida
Subordem: Eimeriina
Família: Sarcocystidae – Sarcocystis hominis
Eimeriidae – Isospora belli, Cyclospora caeytanensis
Cryptosporidiidae- Crysptosporidium spp
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Ciclo Vital Ciclo assexuado e sexuado
Esporozoíta – adesão pelo complexo apical – invasão celular – crescimento- esquizogonia – esquizonte – merozoítos
Merozoítas: pode dar novo ciclo sexuado ou produzir ciclo sexuado.
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Ciclo Vital Ciclo sexuado:
Merozoítos – diferenciação em gametócitos – microgametócitos (masculino) e macrogametócitos (feminino) – fecundação– ovo ou zigoto – oocisto
Oocisto – liberação de esporozoítos – início de um novo ciclo.
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Coccídios Várias espécies de Eimeriina causam doenças em aves,
gado e outros animais.
Galinhas, patos, pombos, perus e faisões são infectados por mais de 20 espécies.
Fácil caracterização do gênero pela presença de oocistos com 2 esporocistos de 4 esporozoítas cada.
Ingestão de carne de animais parasitados resulta na eliminação dos oocistos pelos humanos sem que isso cause patologia pois atravessam o tubo sem desencistarem.
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Coccídios Espécies que parasitam o homem :
Isospora belli
Cryptosporidium spp
Cyclospora cayetanensis
Sarcocystis hominis
Sarcocystis suihominis
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Isospora belli Ingestão de oocistos esporulados e liberação dos
esporozoítos
Invasão e divisão por esquizogonia
Lesão celular e liberação dos merozoítas
Diferenciação em gametócitos
Oocistos Elipticos com extremidades estreitas
Medem 30 x 12 μm
Encontrados nas fezes na forma imatura com presença de massa citoplasmática nucleada e cheia de granulações, com regiões polares livres
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Oocisto A célula única divide-se em duas com produção do
esporoblasto
No solo:
Esporogonia. Os esporoblastos produzem membrana cística produzindo o esporocisto.
Maturação completa ocorre quando cada esporocisto produzir 4 espoozoítos.
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Ciclo evolutivo
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Oocisto de Isospora belli
Ilustração disponível em Rey, 2010
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Ilustração disponível em http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/ImageLibrary/Cystoisosporiasis_il.htm
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Ilustração disponível em http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/ImageLibrary/Cystoisosporiasis_il.htm
Oocisto imaturo corado com safranina
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Oocisto imaturo analisado por microscopia de fluorescência
Ilustração disponível em http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/ImageLibrary/Cystoisosporiasis_il.htm
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Patologia Podem ser assintomáticas
Infecções benignas com invasão de células epiteliais e das criptas de Lieberkuhn do ID com reação inflamatória da mucosa
Quando sintomática: perda do apetite, astenia, dor de cabeça, náusea, evacuações com cólicas e dores abdominais.
Início pode ser súbito com febre e diarreia
Cura espontânea e completa em aproximadamente 40 dias
AIDS: diarréia debilitante que pode levar a morte.
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Oocisto de Isospora belli em corte de duodeno
Ilustração disponível em http://pathology5.pathology.jhmi.edu/micro/v18n09.htm
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Ilustração disponível em http://www.annals.org/content/121/9/663/F1.expansion.html
Merozoítos e gametócitos presentes nas células intestinais
merozoitos
gametócitos
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Cryptosporidium spp Filo: Apicomplexa
Classe: Sporozoa
Subclasse: Cocidia
Ordem: Eucocidiida
Subordem: Eimiriina
Família: Criptosporidiidae
Gênero: Cryptosporidium
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Cryptosporidium spp Parasitos encontrados em grande número de animais:
mamíferos, aves, répteis e peixes
As espécies de aves e mamíferos podem contaminar o homem.
Protozoário causador da diarreia
São álcool-ácidos resistentes
Transmissão ocorre pela ingestão ou inalação de oocistos esporulados
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Ciclo evolutivo Ingestão de oocisto
Liberação de 4 esporozoítos no intestino delgado
Invasão do esporozoíto na membrana celular sem invasão citoplasmática.
Formação de vacúolo parasitóforo intracelular e extracitoplasmático
Reprodução assexuada dentro do vacúolo com produção de meronte 1 º –liberação do merozoíto 1º- invasão celular - meronte 2º – liberação do merozoíto 2º.
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Ciclo evolutivo
Merozíto 2º –micro e macrogameta – zigoto – esporocisto de parede delgada e esporocisto de parede espessa
Esporocisto de parede espessa: eliminado nas fezes
Esporocisto de parede delgada: rompimento dentro do intestino causando auto-infecção
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Ilustração disponível em http://www.coccidia.icb.usp.br/disciplinas/BMP222/aulas/Sarcocystis_Cryptosporidium_2011.pdf
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Oocistos presentes nas células epiteliais - intestinais. ID de ovelha
Ilustração disponível em www.coccidia.icb.usp.br
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Meronte de Cryptosporidium com membrana externa destruída, expondo merozoítos. Intestino delgado de ovelha – micrografia eletrônica de varredura
Ilustração disponível em www.coccidia.icb.usp.br
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Ilustração disponível em www.coccidia.icb.usp.br
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Ilustração disponível em http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/ImageLibrary/Cryptosporidiosis_il.htm
Medem aproximadamente 3 a 6 µm
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Ilustração disponível em http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/ImageLibrary/Cryptosporidiosis_il.htm
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Ilustração disponpivel em http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/HTML/ImageLibrary/Cryptosporidiosis_il.htm
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Patologia Criptosporidiose
Oocistos aderidos a microvilosidades: sindrome de má absorção
Imunocompetentes: quadro benigno e autolimitante com duração de 10 dias.
Sintomas mais severos em crianças
Diarreia aquosa com 3 a 10 evacuações diárias que pode durar de 1 a 30 dias
Dor abdominal, anorexia, febre, dor de cabeça, náusea e vômito
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Patogenia Imunodeficientes:
Diarreia crônica que pode durar meses
Desequilíbrio eletrolítico
Mortalidade elevada
Resistência a antimicrobianos
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Cyclospora cayetanensis
Filo: Apicomplexa
Classe: Sporozoea
Ordem: Eucoccidiida
Família: Eimeriidae
Gênero: Cyclospora
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Cyclospora cayetanensis Formas evolutivas:
Esporozoítos
Trofozoítos
Merozoítos
Gametócitos
Oocistos com dois esporozítos
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Cyclospora cayetanensis Tipo de reprodução:
Assexuda: esquizogonia
Sexuada: gametogonia e esporogonia
Reservatório:
Homem
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Cyclospora cayetanensis Ciclo evolutivo
Ingestão de cistos esporulados contendo 2 esporcistos com 2 esporozoítos
Liberação dos esporozoítos e invasão celular (ID)
Diferenciação em trofozoítos e multiplicação por esquizogonia
Formação do esquizonte e liberação dos merozoítos
Novo ciclo ou produção de gametócitos
Formação de oocisto não esporulado eliminado nas fezes
Esporulação ocorre em dias à semanas em temperatura de 22 a 32ºC
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Cyclospora cayetanensis
Oocisto semelhante ao de Cryptosporidium
Esférico, membrana dupla , apresentando 8-10 µm de diâmetro (2x maiores do que os oocistos de Cryptosporidium)
Utilização de morfometria com micrômetro ocular para identificação das espécies
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Ilustrações disponíveis em http://www.dpd.cdc.gov/dpdx/html/ImageLibrary/Cyclosporiasis_il.htm
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Oocisto de C. cayetanensis corado com safranina
Oocisto de C. cayetanensis visível à microscopia de UV
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Patologia Assintomáticos
Sintomáticos:
Diarreia: autolimitada que dura 3 a 4 dias com aproximadamente 4 a 10 evacuações diárias e explosivas;
podem ocorrer recaídas frequentes durante um período de 2 a 3 semanas
Aspecto não sanguinolento, mas com presença de fleuma
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Patologia Outros sintomas:
dor abdominal, náuseas e vômitos, perda de peso, fadiga, febre baixa
Em indivíduos imunocomprometidos o quadro diarreico é crônico e intermitente
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Espécie
Forma encontrada nas fezes
Tamanho (µm)
Estrutura do oocisto
Isospora belli Oocisto não esporulado
30 x 12 2 esporocistos com 4 esporozoítos
Cryptosporidium parvum
Oocisto esporulado
4 – 6 4 esporozoítos
Cyclospora cayetanensis
Oocisto não esporulado
8 -10 2 esporocistos com 2 esporozoítos cada
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Diagnóstico
Pesquisa de anticorpos circulantes: Elisa e IFI
Microscopia por contraste de fase ou luz UV: autofluorescência
Filtro: 330-365 nm (oocistos de coloração azul )
450-490 nm (oocistos de coloração verde)
Pesquisa de oocisto em material de biópsia intestinal
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Diagnóstico Pesquisa de oocisto nas fezes
Método de Sheather
Método de Willis
Coloração especial de Kinyoun (modificado)
Método de Henriksen e Pohlenz
Ziehl-Neelsen
Método da safranina
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Diagnóstico Método de Sheather
Preparar uma diluição de material fecal 1:2 com solução fisiológica
Filtrar o material e tranferí-lo para tubo cônico até atingir metade do tubo
Completar o tubo com solução saturada de açúcar
Cobrir o tubo com papel lamínula de plástico ou papel celofane transparente e homogeneizá-lo por agitação
Retirar a lamínula e colocá-la sobre uma lâmina para análise em microscopia em objetiva de 40
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Diagnóstico Método de Willis
Colocar 10g de fezes num frasco de Borrel ou no próprio recipiente onde estão as fezes
Homogeneíza-las com um pouco de solução saturada de sal (NaCl) ou de açúcar
Completar o volume até a borda do frasco.
Colocar na boca do frasco uma lâmina, que deverá estar em contato com o líquido.
Deixar em repouso por 5 minutos.
Findo esse tempo, retirar rapidamente a lâmina, deixando a parte molhada voltada para cima.
Cobrir com lamínula, corar com Lugol e examinar com objetiva 10x.
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Diagnóstico Coloração especial de Kinyoun modificado (a frio)
Análise de Cryptosporidium spp e I. belli
Oocistos coram-se do rosa ao vermelho, ao púrpura sobre fundo verde
Preparar esfregaço (não espesso) com uma ou duas gotas de fezes (frescas ou concentradas por método de MIFC)
Deixar secar a temperatura de 60ºC
Fixar com álcool metílico por 30 seg (secar temperatura ambiente)
Corar com corante de Kinyoun por um minuto
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Diagnóstico Lavar com água destilada Solução álcool ácido (ácido
sulfúrico)por dois minutos
Lavar com água destilada
Corar o fundo com solução de verde de malaquita a 3% por dois minutos
Lavar com água destilada
Deixar o esfregaço secar e montar com resina sintética
Examinar em objetiva de imersão
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Diagnóstico Método de Henriksen e Pohlenz
Esfregaço permanente corado indicado para pequisa de coccidioses intesinais
Utilizado para verificação da morfologia
Pesquisa de organismos omitidos na visualização de exame a fresco
Arquivo
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Diagnóstico Método de Henriksen e Pohlenz
Preparar um esfregaço delgado com parte do sedimento obtido após centrifugação.
Deixar secar a temperatura ambiente.
Fixar com álcool metílico por 5 minutos.
Deixar secar a temperatura ambiente.
Corar com o corante de Kinyoun (a frio), durante uma hora.
Lavar em água corrente.
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Diagnóstico
Diferenciar com solução aquosa de ácido sulfúrico a 2% (30 segundos a um minuto) até que não saia mais corante da lâmina.
Lavar em água corrente.
Corar o fundo com solução de verde malaquita a 5%, por 8 minutos.
Lavar em água corrente e secar.
Examinar com objetiva de imersão.
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Diagnóstico Ziehl-Neelsen ( à quente)
Aquecimento da fucsina fenicada usada na coloração
Preparar a amostra com fezes frescas ou preservadas
Deixar secar a temperatura ambienteou pelo aquecimento
Corar com fucsina-fenicada aquecendo a lâmina até a emissão de vapores por cinco minutos
Escorrer o corante e lavar com água corrente
Diferenciar com sol. aquosa de ácido sulfúrico a 5% por 30 segundos
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Diagnóstico
Lavar com água corrente.
Corar o fundo com solução de azul de metileno a 0,3% por um minuto
Lavar com água corrente e secar
Montar resina sintética.
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Diagnóstico Método da safranina
Oocistos corados de vermelho alaranjado com fundo azul ou verde.
Coloração uniforme para Cyclospora cayetanensis
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Diagnóstico Preparar um esfregaço delgado com o material obtido por
concentração (MIFC)
Secar a temperatura ambiente
Mergular as laminas em solução aquosa de safranina a 1% a aquecer no forno de microondas em potencia alta por 30”
Lavar com água corrente por 30”
Mergulhar a lâmina em sol aquosa de verde de malaquita ou azul de metileno1% por 1’.
Lavar em água corrente por 30”.
Montar em resina sintética
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Referência bibliográfica DE CARLI, Geraldo Attílio. Parasitologia Clínica.2.Ed.São
Paulo: Ed. Atheneu, 2207. 906p NEVES, David Pereira. Parasitologia humana. 11.Ed.São Paulo:
Editora Atheneu, 2005. 494p. REY, Luis. Bases da Parasitologia Médica. 3.Ed.Rio de Janeiro:
Guanabara Koogan.2010.391p. PEREIRA, J. T.; SOCCOL, V. T.; COSTA, A. O.; CASTRO, E. A.;
OSAKI, S. C.; PAULINO, R. C..Cryptosporidium spp.: para controlar é necessário conhecer. Departamento de Patologia Básica – Universidade Federal do Paraná. Revista Saúde e Ambiente / Health and Environment Journal, v. 10, n. 2, dez. 09
www.dpd.cdc.gov www.coccidia.icb.usp.br http://pathology5.pathology.jhmi.edu/micro/v18n09.htm