ISOLAMENTO DE MICRO-

ORGANISMOS COM ATIVIDADE

LIPOLÍTICA A PARTIR DE AMOSTRAS

AMBIENTAIS

André Dalcin Salvagni1, Marcelo Zimmerman1 , Joana Wagner Oliveira, Janaina Tibola,

Débora Vom Endt2

1Graduando em Engenharia de Bioprocessos e Biotecnologia, Uergs, Novo Hamburgo – RS, andre-salvagni@uergs.edu.br

2Docente da Universidade Estadual do Rio Grande do Sul, Uergs, Novo Hamburgo – RS, debora-endt@uergs.edu.br

INTRODUÇÃO

Microorganismos lipolíticos Produtores de Lipase

O biodiesel é uma interessante alternativa de

combustível de fonte renovável e menos poluente.

Enzima envolvida na produção de biodiesel

Produção de Biodiesel

Catalizador inorgânico

Hidróxido de sódio

• alto consumo de energia

• grande quantidade de rejeitos

industriais (transesterificação

química)

Catalizador enzimático

A lipase catalisa a reação de

transesterificação, produzindo ésteres

de ácidos graxos (biodiesel) e glicerol

não contaminado com álcali.

INTRODUÇÃO

(Fonte: Castro H. F. 2004)

INTRODUÇÃO

Reação de Transesterificação

OBJETIVO

Isolar e caracterizar micro-

organismos com atividade

lipolítica obtidos a partir de

amostras ambientais.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Coleta das amostras

ambientais.

Amostras

líquidas

500ml

Amostras

Sólidas

500g

Preparo de cinco

diluições seriadas em

solução salina 0,1%.

Semeadura de 0,1 mL para

cada diluição seriada em placa

contendo meio NA.

Semeadura de 0,5 mL com

em placa contendo meio

NA.

As amostras foram

incubadas por 48horas

à 28°C

Repicagem das colônias com

diferênças macroscópicas com a

técnica de esgotamento em placas de

petri contendo meio NA.

Amostras: Compostagem doméstica.

Óleo utilizado para

coocção.

Conserva de tomate seco.

Isolamento

Repicagem por esgotamento.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Coloração com cristal violeta e

avaliação microscópica para

distinguir fungos de bactérias.

Fungos crescidos em

meio BDA. Bactérias crescidas em

meio NA.

Separação entre fungos e bactérias

Visualização microscópica de bactérias.

Visualização de hifas de fungo.

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Crescimento em

erlenmeyes de 125 ml, à

temperatura ambiente por

24 horas no shaker à 150

rpm.

Crescimento dos

fungos em 5 ml de

caldo de batata.

Preparo para o meio de identificação

Crescimento das

bactérias em 5 ml

de Circle Grow.

Erlenmeyer contendo meio circle grow

PROCEDIMENTO EXPERIMENTAL

Observação em

transiluminador UV

302nm.

Fungo Rhizopus

cepa 6150 usado com

controle.

Meios mínimos (1% de tryptona, 0,5% de

extrato de levedura, 0,5 % NaCl )

suplementados com 0,001% de Rhodamina B e

2,5% de azeite de oliva.

As amostras foram

incubadas por 48horas à

28°C

Seleção de micro-organismos produtores de lipase

Controle positivo (Rhizophus 6150, visualizado em luz uv 302 nm

Controle positivo (Rhizophus 6150, vizualizado em luz ambiente.

Alíquota de 20 μl do

inoculo.

RESULTADOS

• Foram Isolados 66 micro-organismos.

– 47 de bactérias e 19 de fungos.

• 32 apresentaram atividade lipolítica.

– (26 de bactérias e 6 de fungos).

Resultado positivo , visualizado em luz uv 202 nm

CONCLUSÃO

• Das 66 colônias, 32 apresentaram atividade

lipolítica, correspondendo a 48,5% do total.

• Maiores estudos serão realizados para

determinar a morfologia micro e macroscópica,

e a quantidade de lipase produzida será

avaliada através de titulação ácido-base.

REFERÊNCIAS

1. Choo DW, Kurihara T, Suzuki T, Soda K, Esaki N. A cold-adapted lipase of an Alaskan psychrotroph, Pseudomonas sp. strain B11-1: gene cloning and enzyme purification and characterization. Appl Environ Microbiol 1998;64(2):486–91..

2. HASAN, F., SHAH, A. A., HAMEED, A. Methods for detection and characterization of lipases: A comprehensive review. Biotechnology Advances, 27 (2009), 782–798.

3. TORTORA, G.J.; FUNKE, B.R.; CASE, C.L. Microbiologia.

Editora Artmed, 6ª edição. 2003.

OBRIGADO