Introdução ao delineamento experimental

Prof. Dr. Vinicius CamposDisciplina de Bioestatística e Delineamento Experimental

Graduação em Biotecnologia - UFPel

Abordagens da aula...

O que é um experimento?

Um experimento é um teste feito para validar uma

hipótese

A experimentação razão pela qual nós estamos onde

estamos

O que um experimento propiciapara o pesquisador

Planejamento do experimento

Planejamento do experimento

Mas como driblamos este

problema?

Definindo objetivos

específicos

1. Defina a pergunta2. Esboce o experimento– Variáveis experimentais– Controles– Número de amostras e repetições do exp.– Estatística

3. Organize o experimento4. Realize o experimento5. Colete e analise os dados

Planejamento do experimento

• Não pensar sobre a necessidade do exp. • Planejar experimentos grandes• Esquecer dos controles• Não verificar se todos os reagentes estão

disponíveis• Não verificar se a estrutura do laboratório é

suficiente para a execução do experimento• Não saber como é feita a coleta e análise dos

dados

Erros comuns no planejamento

• Buscar leitura sobre experimentos semelhantes/metodologias– Buscar protocolos– Entrar em contato com pesquisadores

• Ler poucos artigos no início– Artigos em português e depois em inglês

• Buscar artigos sobre o tema uma vez por semana

Referencial teórico

Referencial teórico

Referencial teórico

Referencial teórico

• Controles experimentais– Marcador de peso molecular de DNA

• Controles de tratamento– Positivos ou negativos• Controles positivos

- soro sabidamente contaminado

• Controles negativos– soro sabidamente não-contaminado

Controles

• Intervalos de tempo– Expressão gênica em 0, 2, 4, 8, 16 h após o tratamento com IGF-1 em

células tumorais em cultivo

Controles

O que fazer se não der para fazer os controles?• Alguns controles podem ser excluídos

nesta ordem:1.Controles de procedimento2.Duplicatas de controles experimentais

Se tiver que excluir outros controles desista do experimento!!!

Controles

• Cuidados com as normas de cada técnica

• Rigidez na repetibilidade

• Use protocolos estabelecidos

Execução do experimento

1. Obtenha o protocolo

2. Leia o protocolo e veja se ele faz sentido

3. Prepare os reagentes listados no protocolo,

verifique e reserve os equipamentos necessários

4. Siga o protocolo exatamente na primeira vez

5. Modifique o protocolo baseado na sua

experiência com ele

Execução do experimento - protocolos

Protocolos

• Coleta dos dados– Saiba que tipo de resultado você está coletando!!!

Exemplo: Avaliação da produção de ROS em oócitos maturados in vitro

Técnica: coloração dos oócitos com 2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína – corante fluorescente

Resultado: ????

Coleta e análise dos dados

Oócitos corados com 2', 7'- diacetato de diclorofluoresceína

Intensidade de fluorescência dos oócitos corados

• Estatística– Comparação dos dados

– Cálculos para testar se a diferença entre os dados é devida ao tratamento ou é meramente ao acaso

– Identificar previamente que teste estatístico será usado para comparar o tipo de dados que será obtido

– Usar softwares estatísticos

Análise dos dados

• Os dados deverão ser resumidos e organizados para apresentação e futura publicação

– Em tabelas – quando é importante a apresentação dos valores

– Em gráficos – apresentação distribuições, tendências ou relacionamento entre variáveis

Apresentação dos dados

Intensidade de fluorescência dos oócitos corados

• O experimento funcionou? – controles

• Quais são os resultados? - análise

• O que o experimento significa? - discussão

• Outros investigadores vão entender o

experimento? - pergunte

• O resultado pode ser repetido? – faça novamente

Interpretação de resultados

O experimento NÃO funciona!!!

• Checar os equipamentos

• Checar os reagentes

• Refaça parte do experimento

• Refaça todo o experimento

• Pense em trocar de experimento

Geralmente as idéias precedem a tecnologia

disponivel

O experimento funciona!!!

• Escreva e publique os resultados

imediatamente!!!

• Deposite uma patente de invenção!!!

Prof. Dr. Vinicius Farias CamposGraduação em Biotecnologiafariascampos@gmail.comvcampos_ib@ufpel.edu.br