INSTITUTO SUPERIOR DE CIÊNCIAS DA SAÚDE EGAS MONIZ Soraya... · effective symptomatic recourse...
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INSTITUTO SUPERIOR DE CIÊNCIAS DA SAÚDE EGAS MONIZ
MESTRADO INTEGRADO EM CIÊNCIAS FARMACÊUTICAS
MECANISMOS MOLECULARES ENVOLVENDO A ALFA-SINUCLEÍNA E A SINFILINA-1
Trabalho submetido por Soraya Barbosa Tayob
para a obtenção do grau de Mestre em Ciências Farmacêuticas
Trabalho orientado por Professor Doutor Alexandre Quintas
fevereiro de 2014
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
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Agradecimentos
Ao meu orientador, Professor Alexandre Quintas, pela sua disponibilidade, apoio,
compreensão e paciência ao longo da realização deste trabalho. Que sem a sua ajuda
não seria possível terminar esta etapa.
Ao meu querido Pai, porque sem ele nada disto seria possível. Muito obrigado Pai, por
tudo. Por tornares tudo possível. Por fazeres com que fosse possível concluir o Grau de
Mestre em Ciências Farmacêuticas. Obrigado. A um pai extraordinário.
À minha Mãe por todo o apoio. Porque ‘’Quem tem mãe tem tudo’’. Obrigado por seres
a melhor mãe que alguma vez poderia ter desejado.
Ao Luís Timóteo Ramos, pela paciência infindável, pelo apoio, pela força e por
acreditar em mim. Sempre. Espero ter a oportunidade de retribuir todo o apoio.
Aos meus amigos, que me acompanharam durante estes anos. Fizeram com que fossem
uns anos maravilhosos.
‘’Souvent il m'arrivait
Devant mon chevalet
De passer des nuits blanches
Retouchant le dessin’’
Charles Aznavour
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Resumo
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Resumo
A Doença de Parkinson (DP) é a patologia neurodegenerativa mais prevalente logo a
seguir à doença de Alzheimer, afectando 1% dos indivíduos com idades superiores a 60
anos. A DP é caracterizada, clinicamente, por severos sintomas motores incluindo
tremor, rigidez muscular, instabilidade postural e bradicinesia. Uma das principais
características é a presença de Corpos de Lewy associada a uma perda substancial dos
neurónios dopaminérgicos na substância nigra pars compacta.
A DP é uma doença multifactorial de etiologia desconhecida, em que tanto os
factores genéticos como os ambientais têm uma influência notória. Diversos
mecanismos patogénicos podem estar envolvidos na patogénese da DP, incluindo um
aumento excessivo dos níveis de stress oxidativo e disfunções a nível da mitocôndria,
associado à presença de proteínas misfolding e alterações no sistema ubiquitina-
proteassoma assim como no sistema autofagia-lisossoma.
A DP permanece incurável, sendo a farmacoterapia com levodopa a mais eficaz no
controlo da sintomatologia e considerada a terapêutica de primeira linha. Ainda não é
possível abrandar ou parar o processo degenerativo característico da DP através da
terapêutica farmacológica disponível.
A alfa-Sinucleína, uma pequena proteína expressa no cérebro, é um dos principais
componentes dos Corpos de Lewy. A alfa-Sinucleína encontra-se ulfolded no seu estado
nativo e pode ter um papel importante a nível da transmissão sináptica e na fisiologia
dos neurónios dopaminérgicos. Pensa-se que esta proteína está fortemente relacionada
com a patogénese da DP e a toxicidade induzida pela alfa-Sinucleína pode envolver
diversos mecanismos, como a agregação ou interacção com outras proteínas e
moléculas, incluindo a Sinfilina-1.
A Sinfilina-1 é uma proteína citoplasmática que se localiza perto das vesículas
sinápticas e colocaliza-se com a alfa-Sinucleína dentro dos Corpos de Lewy. A
Sinfilina-1 interage tanto in vitro como in vivo com a alfa-Sinucleína promovendo a sua
agregação, o que pode influenciar a formação dos Corpos de Lewy nos neurónios.
Palavras-Chave : alfa-Sinucleína, Sinfilina-1, Doença de Parkinson, Neurodegeneração
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
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Abstract
Parkinson’s Diesease is one of the most common neurodegenerative diseases,
affecting 1% of individuals over 60 years old. PD is characterized clinically by severe
motor symptoms including uncontrollable resting tremor, muscular rigidity, postural
instability, and bradykinesia. The pathological hallmarks are the presence of Lewy
bodies and massive lost of dopaminergic neuros in the pars compacta of the substantia
nigra.
PD is a multifactorial disease with unknow etiology, in which both genetic and
environmental factors play importante roles. Various pathogenic mechanisms may be
involved in pathogenesis of PD including abnormally increased oxidative stress and
mitochondrial dysfunction, together with protein misfolding and impairments in the
ubiquitin–proteasome and autophagy-lysosomal systems.
PD remains a uncurable disease, pharmacotherapy with levodopa represents an
effective symptomatic recourse and remains a clinical gold standard treatment for PD,
however, any currently available therapies could slow our stop the degenerative process
in PD brain.
The major component of Lewy body is alpha-synuclein, a small protein which is
widely expressed in the brain. Alpha-sinuclein is natively unfolded protein whitch may
have an important role in sinaptic transmission and dopaminergic neuron physiology.
This protein is thought to be critically implicated in PD pathophysiology and the
mechanism by which alpha-sinuclein induces neuronal cell toxicity may involve
multiple pathways, such as aggregation or interaction with other proteins and molecules,
including synphilin-1.
Synphilin-1 represents a cytoplasmatic protein that localizes close to synaptic
vesicles and colocalizes with alpha-synuclein into Lewy bodies. Synphilin-1 interacts
both in vitro and in vivo with alpha-synuclein promoting its agregation, witch may have
implications for Lewy bodies formation in neural cells.
Keywords : Alpha-synuclein, Synphilin-1, Parkinson’s Disease, Neurodegeneration
Índice Geral
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Índice Geral
Agradecimentos
Resumo
Abstract
Índice Geral
Índice De Figuras
Índice De Tabelas
Abreviaturas
1. Introdução
1.1. Doença De Parkinson
1.1.1. Aspectos Históricos
1.1.2. Fisiopatologia
1.1.3. Indutores e Mecanismos da Génese da Doença de Parkinson
1.1.3.1. Stress Oxidativo
1.1.3.2. Disfunção Mitocondrial
1.1.3.3. Disfunção do Sistema Ubiquitina-Proteassoma
1.1.4. Mecanismos Moleculares
1.1.4.1. Factores Ambientais
1.1.4.2. Factores Genéticos
2. Diagnostico e Farmacoterapia na Doença de Parkinson
2.1. Quadro Clínico e Diagnostico da DP
2.2. Terapêutica Farmacológica na Doença de Parkinson
3. Mecanismos Moleculares da Doença de Parkinson Envolvendo a alfa-
Sinucleína e a Sinfilina1
3.1. alfa-Sinucleína
3.1.1. Estrutura e Localização
3.1.2. Funções da alfa-Sinucleína
3.1.3. Envolvimento na doença de Parkinson
3.2. Sinfilina-1
3.2.1. Estrutura e Localização
3.2.2. Funções da Sinfilina-1
3.2.3. Envolvimento na doença de Parkinson
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Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
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3.3. Interacção da alfa-Sinucleína com a Sinfilina-1
3.4. Agregação Proteica e a Formação de Corpos de Inclusão : Toxicidade ou
Neuroprotecção?
4. Considerações Finais
5. Referências Bibliográficas
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Índice de Figuras
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Índice De Figuras Figura 1 - Anatomia e Fisiologia da DP
Figura 2 - Alterações da Mitocôndria.
Figura 3 - Via da Ubiquitina-Proteassoma
Figura 4 - Mecanismos Neurodegenerativos
Figura 5 - Representação Esquemática do Metabolismo Do MPTP
Figura 6 - Representação Esquemática do Metabolismo Do MPP+.
Figura 7 - Representação Esquemática da Estrutura da α-Syn
Figura 8 - Representação Esquemática do Processo de Agregação da α-Syn
Figura 9 - Proposta de Modelo da Toxicidade da α-Syn
Figura 10 - Visão Esquemática da Sinfilina-1
Figura 11- Representação Esquemática da Sinfilina-1 e da Sinfilina-1A
Figura 12 - Representação Esquemática da Interacção entre a α-Syn e a Sinfilina-1
Figura 13 - Representação Esquemática da Formação de Corpos de Inclusão em
Modelos Celulares da DP
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Índice De Tabelas
Tabela 1 - Resumo dos Genes Envolvidos na DP 35!
Tabela 2 - Critérios de Diagnóstico da DP 37!
Tabela 3 - Fármacos Agonistas dos Receptores de Dopamina 41!
Abreviaturas
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Abreviaturas !AADC - Descarboxilase Dos Aminoácidos L-Aromáticos Ach- Acetilcolina (do inglês Acetylcholine)
BHE- Barreira Hematoencefálica
cI- Complexo I
CL- Corpos de Lewy
CMA- Autofagia Mediada por Chaperonas (do inglês Chaperone-mediated autophagy
COMT%&%Catecol-O-Metiltransferase%
CTE – Cadeia Transportadora de Electrões
DAT- Transportadores de Dopamina (do inglês dopamine active transporter)
DP- Doença de Parkinson
GPi- Globo Pálido Interno
GSH%&%!Glutationa!(do!inglês!Glutathione)!
GSK3B- Glicogénio Quinase-3-� (do inglês Glycogen synthase kinase 3 beta)
L&dopa%&%Levodopa!
NOS- Óxido Nítrico Sintetase (do inglês nitric oxide synthase)
PP2A%& Proteína Fosfatase 2A%
Pu- Putamên
ROS- Espécies Reactivas de Oxigénio (do inglês Reactive Oxygen Species)
SNC- Sistema Nervoso Central
SNpc- Substância nigra pars compacta
SOD- Superóxido Dismutase
SUP- Sistema Ubiquitina-Proteassoma
Th- Tálamo (do inglês Thalamus)
VMAT- Transportadores Vesiculares de Monoamina (do inglês vesicular monoamine
transporter)
WT%–%Wild-Type1
α-Syn- alfa-Sinucleína (do inglês Alpha-Synuclein)
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
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1. Introdução
1.1 Doença De Parkinson
A Doença de Parkinson (DP) é uma doença neurológica crónica e progressiva
associada a uma perda substancial de neurónios dopaminérgicos da substancia nigra
pars compacta (SNpc) e outras alterações complexas que conduzem ao aparecimento
de diversos sintomas motores e não-motores (Perfeito, Cunha-Oliveira, & Rego, 2012).
É a segunda doença neurodegenerativa mais comum, apresentando um risco de 1% após
os 60 anos e que aumenta até 4% após os 80 anos (Dexter & Jenner, 2013; Lau &
Breteler, 2006). Tanto a incidência como a prevalência da doença aumentam com a
idade, contudo, são ligeiramente superiores no sexo masculino (F. J. S. Lee & Liu,
2008).
Na Europa, a prevalência varia desde 65.6/100.000 a 12500/100.00 sendo a
incidência anual de 5/100 000 a 346/100 000 (Pereira, 2011; von Campenhausen et al.,
2005).
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1.1.1 Aspectos Históricos
Apesar de já ser conhecida previamente na antiga Índia pelo nome de ‘’Kampavata’’,
a Doença de Parkinson foi descrita pela primeira vez numa monografia, em 1817, por
James Parkinson no seu estudo ‘’An Essay on the Shaking Palsy’’ (Corti, Lesage, &
Brice, 2011; Teive, 1998). James Parkinson intitula a efemeridade como ‘’Paralisia
Agitante’’ e caracteriza a doença pela presença de movimentos trémulos involuntários,
com diminuição da força muscular, com tendência para a inclinação do tronco para a
frente e com alteração da marcha, sendo os sentidos e o intelecto não afectados
(Parkinson, 2002; Teive, 1998).
‘’Involuntary tremulous motion, with lessened muscular power, in parts not in
action and even when supported; with a propensity to bend the trunk forwards, and to
pass from a walking to a running pace: the senses and intellects being
uninjured.’’(Parkinson, 1817, 2002)
No entanto, foi Jean-Martin Charcot, considerado o pai da Neurologia, que teve um
contributo extraordinário na definição clínica da Doença de Parkinson. Primariamente,
Introdução
11!
foi Jean-Martin Charcot quem sugeriu a mudança de nome para Doença de Parkinson
em homenagem à descrição clássica de James Parkinson. Por outro lado, Charcot
definiu a presença dos sinais mais comuns da doença: tremor, bradicinesia, rigidez e
dificuldade do equilíbrio. Apresentando os critérios para o diagnóstico diferencial da
doença. Por fim, em 1877, Charcot prescreve a primeira terapêutica para a DP, a
hioscinamida, um percussor dos alcaloides da beladona com propriedades
anticolinérgicas (Teive, 1998).
Em 1888, Gowers publica o livro ‘’Manual of Diseases of the Nervous System’’ onde
descreve a sua experiencia com 80 pacientes com a Doença de Parkinson. Gowers nota
que existe uma predominância masculina na incidência da doença, com idades
compreendidas entre 50-60 anos e observou que cerca de 15% dos seus pacientes tem
uma forte história familiar, referindo pela primeira vez a vertente genética da Doença de
Parkinson (C. Goetz, Chmura, & Lanska, 2001; J.William Langston, 2002; Pearce,
1989).
Brissaud, em 1895, comenta ‘’a lesion of the locus niger could very well be the
anatomical basis of Parkinsons disease’’, referindo o envolvimento do mesencéfalo na
DP (C. Goetz et al., 2001; Pearce, 1989). Contudo foi Trétiakoff, em 1919, quem
confirmou a hipótese de Brissaud ao estudar a substância nigra do cérebro de 54
pacientes dos quais 9 sofriam da Doença de Parkinson. Trétiakoff notou que em todos
os casos com DP havia uma notória diminuição da substância negra mesencefálica
(Parent & Parent, 2010). Trétiakoff também encontrou, no cérebro dos pacientes com
DP, umas inclusões concêntricas no citoplasma dos neurónios da substância negra, aos
quais denominou de Corpos de Lewy (CL) em homenagem a Friedrich Lewy que
descreveu estas inclusões plasmáticas pela primeira vez em 1913 (Parent & Parent,
2010; Pearce, 1989). Por volta de 1953, Greenfield e Bosanquet forneceram a mais
completa análise patológica da DP e das lesões a nível cerebral (C. Goetz et al., 2001;
C. G. Goetz, 2011).
Em 1967, Hoehn e Yahr, descrevem a morbilidade e evolução clínica da doença,
desenvolvendo a escala de Hoehn e Yahr que indica o estado geral do paciente (C. G.
Goetz, 2011). A escala de HY, originalmente, dividia-se em 5 estágios : nos estágios I,
II e III considerava-se que o doente apresentava uma incapacidade de leve a moderada,
enquanto que nos estágios IV e V a incapacidade do doente era classificada como mais
grave (Goulart & Xavier, 2005).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
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O estudo farmacológico e bioquímico da DP começou na época de 1960’s com
Ehringer e Hornykiewicz a documentarem a perda de dopamina no tecido estriado do
cérebro em pacientes com Doença de Parkinson. Pouco tempo depois, Barbeau testa o
tratamento com Levodopa (L-dopa) per os e Birkmater e Hornykiewicz testam,
independentemente, o uso de L-Dopa por via intravenosa (C. G. Goetz, 2011).
Introdução
13!
1.1.2 Fisiopatologia
A Doença de Parkinson é caracterizada por uma diminuição progressiva dos
neurónios da substância nigra pars compacta com a presença de depósitos de proteínas
no citoplasma dos neurónios (CL). Aquando da morte do paciente, a SNpc apresenta
uma perda de cerca de 50-70% comparando com a mesma região em indivíduos
saudáveis (Davie, 2008; Rodrigues & Campos, 2006).
Na fase inicial da doença, estágio 1 e 2, ocorrem alterações a nível do bulbo olfactivo
e da medula oblonga, neste estágio inicial o paciente apresenta-se num estado pré-
sintomático. À medida que a doença progride, a SNpc e outras regiões do cérebro como
o mesencéfalo, o prosencéfalo basal e o neocortex são afectadas, atingindo-se os
estágios 3 e 4 da DP (Davie, 2008).
A perda de células dopaminérgicas conduz directamente a uma diminuição dos
níveis de dopamina na SNpc (Khatri & Chaudhry, 2009). A diminuição de dopamina
leva a uma activação reduzida dos seus receptores provocando uma redução da inibição
da via indirecta e uma diminuição da excitação da via directa. A inibição reduzida da
via indirecta provoca uma inibição excessiva do globus pallidus pars externa, a
desinibição dos gânglios da base e um aumento da excitação dos neurónios do globus
pallidus pars interna e da substância nigra pars compacta, ao passo que a diminuição
da activação da via directa causa uma diminuição da sua influência inibitória sobre o
globus pallidum pars interna e sobre a substância nigra pars compacta (Bartels &
Leenders, 2009; Obeso & Rodriguez-Oroz, 2000). Resultando numa actividade
excessiva do corpo estriado que provoca uma aferência contínua de sinais excitatórios
para o controlo motor córtico-espinhal, o que resulta num desequilíbrio entre o sistema
excitatório e inibitório comprometendo o controlo motor, conduzindo ao aparecimento
das características da DP (Bartels & Leenders, 2009).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
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Figura 1- Anatomia E Fisiologia Da DP. Esquema simplificado dos circuitos neuronais envolvendo o
núcleo da base, o tálamo (Th) e o córtex e as alterações sofridas por estas estruturas na DP. Apenas está
representada a via directa que em, condições normais, (esquerda) facilita os movimentos, contudo, na DP,
encontra-se atenuada (direita). A SNpc fornece os estímulos dopaminérgicos (Input Dopaminérgico) ao
putamên (Pu), o que leva á excitação da via directa. O Pu inibe (vermelho) o globo pálido interno (GPi)
que consequentemente inibe o Th. O Th envia estímulos excitatórios (verde) para o córtex motor. Na DP,
a degeneração da SNpc conduz a uma inibição dos estímulos tálamo-corticais. A via indirecta (não
representada) é inibida pelos estímulos dopaminérgicos e, em condições fisiológicas, reprime os
movimentos, contudo, a actividade desta via encontra-se aumentada na DP. (Adaptado de Shulman, De
Jager, & Feany, 2011)
Como já foi referido anteriormente, a presença de CL, inclusões citoplasmáticas
eosinofílicas com núcleos densos rodeados por filamentos radiados, é característico da
DP. Os CL são formados por diversas proteínas como a ubiquitina e a alfa-Sinucleína
(α-Syn) entre outras, estas podem estar homogeneamente distribuídas ou haver uma
concentração de ubiquitina no centro dos CL e de α-Syn na periferia o que é consistente
com a hipótese de formação de depósitos pela α-Syn (Tatsch, Nitrini, & Neto, 2002).
Os CL são depositados em diferentes partes dos cérebro consoante a progressão da
DP. No estágio inicial da DP as lesões aparecem no núcleo dorsal motor IX/X e na
zona reticular intermediaria, havendo uma extensão das lesões à medida que a doença se
desenvolve acabando por atingir, numa fase mais avançada da DP (estágios 4, 5 e 6) o
neocortex. O estágio 2 da DP acrescenta lesões a nível do núcleo reticular giantocelular
e do complexo coeruleus-subcoeruleus. As lesões na substância nigra pars compacta
relacionam-se com a DP no estágio 3 assim como outras lesões a nível do mesencéfalo.
No estágio 4 as lesões atingem o prosencéfalo, o mesocortex temporal e o alocórtex. O
Introdução
15!
neocortex só é afectado no estágio 5 juntamente com o neocortex pré-frontal. Por fim,
no estágio 6 da DP observam-se lesões a nível do neocortex e nas áreas pré-motoras
associadas as funções sensoriais (Leong, Cappai, Barnham, & Pham, 2009).
Apesar de o papel destas inclusões na patogénese da DP não estar totalmente
esclarecido, a descoberta da α-Syn como um dos compostos principais dos filamentos
radiados nos CL veio alterar o ponto de vista sobre a formação e o papel dos destes nos
processos neurodegenerativos. Levando à formulação de novas prespectivas
fisiopatologicas sobre a progressão da DP e a sua classificação como uma
Sinucleinopatia (Dexter & Jenner, 2013).
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1.1.3 Indutores e mecanismos da génese da Doença de Parkinson
1.1.3.1 Stress Oxidativo
O stress oxidativo resulta da eliminação insuficiente das espécies reactivas de
oxigénio (ROS) geradas por diversas reacções bioquímicas. Em condições fisiologicas
são eliminadas pelos sistemas antioxidantes intracelulares que podem estar afectados
em condições patogénicas ou com o envelhecimento natural (Gómez-Chavarín, Roldan-
Roldan, Morales-Espinosa, Pérez-Soto, & Torner-Aguilar, 2012).
Os neurónios dopaminérgicos estão especialmente expostos ao stress oxidativo
devido ao metabolismo da dopamina que origina diversas moléculas que actuam como
toxinas endógenas se não forem eliminadas correctamente. A dopamina possui duas
vias de oxidação : (1) Pode sofrer auto-oxidação ao reagir com o oxigénio a pH neutro e
originando espécies dopamina-quinona tóxicas, radicais superóxidos e peroxido de
oxigénio; ou (2) Ser metabolizada pela MAO em DOPAC (um metabolito não tóxico) e
em peroxido de oxigénio (Levy, Malagelada, & Greene, 2009) .
Apesar do superóxido não ser uma molécula altamente reactiva, pode ser convertida
em peroxido de oxigénio pela oxigénio dismutase ou em radicais peroxinitrito na
presença de óxido nítrico. O peroxido de oxigénio por sua vez pode ser convertido em
radicais hidroxilo tóxicos através da Reacção de Fenton que ocorre em presença de
elevados níveis de ferro, cujas concentrações são bastante elevadas na SNpc (Teive &
Menezes, 2003). As ROS provocam alterações funcionais a nível das proteínas, lípidos
e DNA (Levy et al., 2009). Os danos a nível dos lípidos, por sua vez, levam a um
aumento da permeabilidade da membrana a iões, tal como o cálcio que podem vir a
promover a exotoxicidade (Lotharius & Brundin, 2002).
Como a dopamina citoplasmática pode formar espécies reactivas de oxigénio muito
rapidamente, tem de ser sintetizada ou transportada do espaço extracelular para o
interior da célula e armazenada no interior das vesículas sinápticas (Jenner, 2003).
Assim, são várias as circunstâncias que vão levar a um aumento dos níveis de stress
oxidativo e consequentes danos celulares a nível do SNC : (a) O aumento dos níveis de
dopamina; (b) Deficiência em glutationa (GSH) que provoca a diminuição da
capacidade do cérebro para eliminar o peroxido de oxigénio; (c) Um aumento dos
depósitos de ferro; (d) Danos no DNA; (e) Peroxidação dos lípidos (C. Olanow &
Tatton, 1999).
Introdução
17!
Na DP todas as células da SNpc aparentam estar sob um elevado estado de stress
oxidativo (Gómez-Chavarín et al., 2012). De facto, diversos estudos post-mortem em
cérebros de indivíduos com DP revelaram elevados níveis de ferro, GSH diminuída e
danos oxidativos nos lípidos, proteínas e DNA (C. Olanow & Tatton, 1999)
Outra evidência de ocorrência de stress oxidativo na DP, surge aquando dos estudos
sobre o parkinsonismo induzido pelo MPTP, que através da redistribuição de dopamina
no citoplasma, promove o aumento do stress oxidativo (Di Monte, 2001; Lotharius &
Brundin, 2002). Também os pesticidas rotenona e paraquato, demonstraram alterar os
níveis de dopamina no citoplasma e consequente aumento do stress oxidativo (Gómez-
Chavarín et al., 2012). Estes factos sugerem que os factores ambientais podem, também,
estar envolvidos no aumento do stress oxidativo.
Contudo, a origem dos elevados níveis stress oxidativo a que o SNC esta exposto na
DP continua a ser bastante controversa. No entanto, é claro que a acumulação de ferro
no SNC leva a alterações na actividade dos canais de cálcio, altera a proteólise e
provoca alterações a nível da agregação da α-Syn. Todas estas ocorrências enfatizam a
natureza diversa das causas de morte celular na DP e também o contributo do stress
oxidativo nos mecanismos neurodegenerativos (Dexter & Jenner, 2013).
1.1.3.2 Disfunção Mitocondrial
A mitocôndria é um organelo citoplasmático essencial para diversos mecanismos
celulares incluindo a produção de ATP, regulação de ROS, homeostase do cálcio e o
controlo da apoptose (Fujita et al., 2013). Na sua organização estrutural, apresenta duas
membranas, interna e externa, envolvendo uma matriz. Na membrana mitocondrial
interna está localizada a cadeia transportadora de electrões (CTE), constituída por cinco
complexos I-V, onde ocorre a produção de energia através do fluxo de electrões e
consequente fosforilação oxidativa (fonte principal de energia das células eucarióticas)
(Nasseh & Tengan, 2001).
Devido ao processo de fosforilação, as mitocôndrias são a principal fonte celular de
radicais livres, pois este mecanismo ocorrente na CTE promove a formação de espécies
extremamente reactivas, nomeadamente os radicais superóxidos gerados no complexo I
(cI). A inibição deste complexo provoca a depleção de ATP e danifica todos os
mecanismos celulares dependentes de ATP, promovendo a formação de radicais livres e
consequentemente, o aumento do stress oxidativo (Júnior & Aguiar, 2007). Estas
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
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espécies reactivas de oxigénio, geradas pela CTE, concomitantemente com os danos nas
membranas celulares, são a causa mais frequente de mutações a nível do DNA
mitocondrial (mtDNA) e provocam também o aumento de proteínas misfolded,
contribuindo para danos a nível do Sistema Ubiquitina-Proteassoma (SUP) (Buneeva &
Medvedev, 2011; Dauer & Przedborski, 2003; Levy et al., 2009)
A disfunção mitocondrial é, assim, caracterizada por (a) Alterações na CTE
resultando num aumento das espécies reactivas de oxigénio e consequente aumento do
stress oxidativo (Hastings, 2009); (b) Produção insuficiente de ATP (Levy et al., 2009);
(c) Activação das caspases (proteínas essenciais na regulação da apoptose) (Levy et al.,
2009).
Na DP, diversas evidências sugerem uma disfunção no complexo I, havendo uma
redução da actividade deste complexo na SNpc (Levy et al., 2009). O recurso a modelos
utilizando DNA mitocondrial de indivíduos com PD esporádica demonstrou uma
reduzida actividade do complexo I, implicando uma procedência de alterações no
mtDNA, contudo, não foram demonstradas alterações consistentes no mtDNA (Dexter
& Jenner, 2013; Gu, Cooper, Taanman, & Schapira, 1998).
Uma outra evidência da disfunção mitocondrial na DP está relacionada com o
MPTP, pois após a administração, este composto vai interferir com a CTE inibindo o
complexo I com uma consequente diminuição dos níveis de ATP e aumento do stress
oxidativo (Dauer & Przedborski, 2003; Koller, Vetere-Overfield, & Gray, 1990). O
mecanismo deste composto será explicado no próximo capítulo. Um outro composto
tóxico relacionado com a disfunção mitocondrial é a rotenona, um pesticida que
também interfere com a CTE (Levy et al., 2009).
A manutenção da homeostase mitocondrial através da mitofagia envolve diversos
factores que controlam diversos processos abrangendo desde a fusão e fissão da
mitocôndria até à mobilidade. Estes processos aparentam estar fortemente relacionados
com as proteínas envolvidas nas formas esporádicas e familiares da DP (Fujita et al.,
2013). Diversas mutações relacionadas com a DP foram associadas com alterações da
função da mitocôndria. Estas mutações podem levar a uma alteração da localização das
proteínas na mitocôndria, anomalias estruturais e funcionais e modificações na CTE
(Dexter & Jenner, 2013).
Deste modo, são várias as proteínas associadas a DP familiar que estão relacionadas
com a mitocôndria, com destaque para a PINK1 e Parkina. A actividade quinase da
PINK1, tendo como alvos as proteínas Parkina, HTR2 e TRAP1, controla o turnover
Introdução
19!
mitocondrial e tem funções de protecção contra o stress oxidativo e, por outro lado, a
mitofagia é impulsionada pela translocação da Parkina do citosol para a mitocôndria
mediada pela PINK1 (Chan et al., 2011; Matsuda, Sato, & Shiba, 2010; Plun-Favreau,
Klupsch, & Moisoi, 2007; Pridgeon, Olzmann, Chin, & Li, 2007). Também a mitofagia
e o controlo transcricional da biogénese da mitocôndria estão dependentes da actividade
da ligase de ubiquitina E3 da Parkina. A Parkina é uma proteína que esta associada à
membrana mitocondrial externa e actua atrasando o swelling mitocondrial e
consequente libertação do citocromo c e activação da caspase 3, a perda desta função
em pacientes com mutações no gene Parkina parece contribuir para a degeneração dos
neurónios dopaminérgicos (Darios, Corti, & Lücking, 2003). Ratinhos knockout para a
Parkina e PINK1 demonstraram uma reduzida função respiratória mitocondrial
concomitantemente com uma morfologia não alterada da mitocôndria e sem sinais de
neurodegeneração, contudo, ambos os animais mutados expressaram elevados níveis de
stress oxidativo (Levy et al., 2009).
Os genes associados à DP familiar parecem estar relacionados, também, com a
produção de ROS pela mitocôndria. A deficiência em PINK1 altera a homeostase do
cálcio e os mecanismos de respiração mitocondrial (Gandhi et al., 2009; Yao et al.,
2011). Consequentemente, a diminuição dos níveis de cálcio e o aumento de ROS
podem alterar a permeabilidade da membrana exterior da mitocôndria conduzindo à
degeneração celular (Gandhi et al., 2009).
Estudos sugerem que as funções da proteína DJ-1 estão associadas ao complexo
PINK1-Parkina na manutenção da função mitocondrial na presença de stress oxidativo
(Thomas et al., 2011). A proteína DJ-1, no seu estado oxidado, parece ter um efeito
protector contra o stress oxidativo enquanto a PINK1 localiza-se na matriz mitocondrial
e desempenha funções de protecção contra a apoptose, efeito que se encontra reduzido
nas mutações associadas à DP (Kim et al., 2005; Petit et al., 2005; Silvestri et al., 2005).
Também a α-Sinucleína parece estar relacionada com a mitocôndria, num estudo
realizado em ratinhos transgénicos, o aumento da expressão de α-Syn comprometeu a
função mitocondrial, aumentado o stress oxidativo e a toxicidade do MPTP (Song,
Shults, Sisk, Rockenstein, & Masliah, 2004).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 20!
Figura 2 - Alterações Na Mitocôndria. As alterações a nível da mitocôndria são observadas em diversas
doenças neurodegenerativas. Inibidores do complexo I, como o MPTP e a rotenona, causam sintomas
semelhantes aos da DP. Para além disso, proteína envolvidas nas formas familiares da DP, como a
LRRK2, a α-Syn, a Parkina, a DJ-1 e a PINK-1 encontram-se associadas à membrana externa (ME) da
mitocôndria e estão envolvidas na produção de ROS. A HTRA, uma outra proteína que se encontra
mutada na DP familiar, localiza-se no espaço intramembranar (EIM) e pode estar envolvida no
processamento proteólico das proteínas mitocondriais. Mutações nos mecanismos de fissão e fusão
mitocondrial podem causar doenças neurodegenerativas e, de facto, as proteínas PINK-1 e Parkina
parecem estar envolvidas na fissão mitocondrial, para além do seu papel nas funções normais da
mitocôndria. (Adaptado de Knott, Perkins, Schwarzenbacher, & Bossy-Wetzel, 2008)
!!!!!!!!!
Introdução
21!
1.1.3.3 Disfunção do Sistema Ubiquitina-Proteassoma
Em células como os neurónios, os sistemas de degradação de proteínas danificadas
ou misfolded assumem um papel de elevada importância de forma a manter a
homeostase. A disfunção destes sistemas de controlo de qualidade das proteínas, como
o SUP, especialmente na sinapse podem levar a acumulação de proteínas, como a α-
Syn, que por sua vez interferem com as funções sinápticas, o que proporciona a
formação de agregados tóxicos ou a alterações perniciosas no metabolismo energético
(Fujita et al., 2013).
O SUP é essencial para a degradação de proteínas danificadas nas células
eucarióticas (Ross & Pickart, 2004). O mecanismo de degradação de proteínas pelo
SUP é um processo que envolve diversas reacções mediadas por enzimas e através de
moléculas de ubiquitina (Mcnaught, Olanow, Halliwell, Isacson, & Jenner, 2001). A
proteína danificada é identificada e sinalizada por moléculas de ubiquitina, que se ligam
de forma covalente à proteína, para posterior degradação (Betarbet, Sherer, &
Greenamyre, 2005).
Primariamente a ubiquitina é activada, por um mecanismo dependente de ATP, pela
E1 (enzima activadora da ubiquitina), seguidamente a proteína alvo liga-se à enzima E2
(enzimas conjugadoras de ubiquitina), sendo uma reacção catalisada pela enzima E3
(ligase de ubiquitina-proteína), formando um conjugado proteína-ubiquitina que é
posteriormente reconhecido e degradado pelo proteassoma S26 (Figura 3) (Mcnaught et
al., 2001; Pickart & Eddins, 2004).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 22!
!Figura 3 - Via da Ubiquitina-Proteassoma. Na sequência do processo pela enzima UCH, a ubiquitina é
conjugada com um substrato específico (vermelho) numa cadeia poliubiquitinada. A cadeia
poliubiquitinada direcciona o substrato para o proteassoma S26, constituído por um complexo proteolítico
20S e dois complexos reguladores 19S. A cadeia polipeptidica é desenrolada e mobilizada para dentro do
complexo 20S. O substrato é hidrolisado em pequenos péptidos enquanto a ubiquitina é reciclada. As
enzimas E1, E2 e E3 são respectivamente activadoras da ubiquitina, conjugadoras de ubiquitina e ligases
da ubiquitina. (Adaptado de Ross & Pickart, 2004)
A presença de diversas proteínas nos CL, incluindo a α-Syn, levou à formulação da
hipótese de que o catabolismo das proteínas danificadas ou mutadas poderia estar
alterado, provocando a agregação celular e a morte dos neurónios. O SUP passou, então,
a ser considerado como uma das causas prováveis da fisiopatologia da DP (Dexter &
Jenner, 2013; Onyango, 2008). O envolvimento do SUP na DP é, também, suportado
pela descoberta de mutações nas proteínas Parkina e UCH-L1, pois estas proteínas
funcionam, respectivamente, como ligases no complexo proteína-ubiquitina e possuem
funções de reciclagem da ubiquitina (Dexter & Jenner, 2013).
A primeira indicação do envolvimento do SUP na DP foi a detecção de ubiquitina e
subunidades proteassomais nos CL sugerindo uma disfunção do SUP (Beyer, Domingo-
Sàbat, & Ariza, 2009; Levy et al., 2009). A detecção de uma diminuição da actividade
do proteassoma na SNpc em indivíduos com DP suporta, também o envolvimento do
SUP na DP (Beyer et al., 2009). A actividade proteassomal também diminui com o
envelhecimento natural, especialmente na SNpc, o que pode contribuir para a
vulnerabilidade selectiva da SNpc (Levy et al., 2009).
Introdução
23!
A identificação da mutação no gene Parkina associada à DP suporta o envolvimento
do SUP na DP. A proteína Parkina é uma ligase E3 e as mutações nesta proteína,
relacionadas com a DP, provocam uma diminuição da actividade desta. Por outro lado,
a Parkina também foi identificada nos CL e os níveis de Parkina na forma nitrosilada
estão aumentados na SNpc na DP, o que leva a uma diminuição da actividade desta. In
vitro, foram identificados diversos substratos desta proteína, incluindo a Sinfilina-1 e a
α-Syn, cujas expressões em excesso provoca a morte dos neurónios dopaminérgicos.
Estes mesmos substratos encontram-se em elevadas concentrações na SNpc e/ou nos CL
nas autopsias de indivíduos com DP esporádica (Levy et al., 2009; Mcnaught et al.,
2001).
A olígomerização da α-Syn e a sobre-expressão desta parecem contribuir para a
disfunção do SUP (Onyango, 2008). A sobre-expressão de α-Syn em células PC12
provocou uma inibição da actividade proteassomal, possivelmente pela ligação dos
olígomeros da α-Syn ao próprio proteassoma (Stefanis, Larsen, Rideout, Sulzer, &
Greene, 2001). Por outro lado, a inibição do SUP contribui para a formação de
agregados e acumulação da α-Syn nas inclusões citoplasmáticas (Levy et al., 2009). O
estudo do proteassoma 26S, na DP, revelou alterações na actividade catalítica e na sua
composição na SNpc estando possivelmente associado ao comprometimento da
degradação da α-Syn (Dexter & Jenner, 2013).
A inibição da mitocôndria leva a uma diminuição dos níveis de ATP intracelulares
afectando a degradação proteassomal, um processo dependente de ATP sugerindo que a
interacção entre o SUP e a mitocôndria pode promover os processos neurodegenerativos
nos neurónios dopaminérgicos (Onyango, 2008).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 24!
!Figura 4 - Mecanismos Neurodegenerativos - Os factores de risco conhecidos da DP incluem os
factores ambientais (verde), factores genéticos (roxo) e factores endógenos (azul). A contribuição destes
factores levam a modificações oxidativas, disfunções da mitocôndria e alterações na degradação de
proteínas que, em conjunto, provocam uma série de eventos moleculares relacionados entre si que estão
subjacentes à neurodegeneração. As interacções entre estes mecanismos devem-se a diversos motivos: (1)
Perturbações na respiração mitocondrial gera espécies reactivas de oxigénio; (2) A sobre-expressão de
SOD têm um efeito protector relativamente a toxinas da mitocôndria; (3) A deficiência ou inibição da
enzima óxido nítrico sintetase (NOS) atenua a toxicidade do MPTP, do paraquato e da rotenona; (4) A
inibição dos sistemas de degradação leva a uma sensibilidade aumentada ao stress oxidativo; (5) A
degradação, ao estar comprometida, provoca uma acumulação de substratos aumentando a probabilidade
de modificações oxidativas; (6) A excessiva produção de espécies reactivas de oxigénio e nitrogénio
modifica as proteínas levando à sua inactivação, crosslinking e agregação; (7) A α-Syn modificada pela
dopamina oxidada impede a autofagia mediada por chaperonas (CMA); (8) Alterações oxidativas levam a
modificações na membrada das proteínas e do lisossoma; (9) O SUP e a CMA não estão aptos para
remover e reparar as proteínas danificadas; (10) As modificações das subunidades do proteassomal,
devido à oxidação, inibem o SUP; (11) A macroautofagia é o principal mecanismo de degradação da
mitocôndria danificada; (12) A inibição do proteassomal aumenta a formação de espécies reactivas na
mitocôndria o que compromete a actividade do complexo I e II. (Adaptado de Malkus, Tsika, &
Ischiropoulos, 2009)
Introdução
25!
1.1.4 Mecanismos Moleculares
Apesar dos esforços para descobrir a etiologia da DP, esta ainda permanece por
desvendar. Embora tenham sido relatados casos de DP relacionados com mutações
genéticas, a maioria das incidências é esporádica na natureza. Pensa-se que a Doença
de Parkinson Idiopática é originada através da associação entre diversos factores de
risco como os factores genéticos, ambientais e o envelhecimento natutal (Chinta et al.,
2013).
1.1.4.1 Factores Ambientais
Diversos estudos neuropatológicos e em modelos animais demonstram que as
neurotoxinas ambientais podem determinar um dano progressivo na SNpc muito antes
do aparecimentos dos sintomas parkinsonianos. A DP, assim como outras doenças
neurológicas relacionadas com a idade, pode ser determinada por exposição a toxinas
ambientais desde a gravidez até a vida adulta. No entanto, os estudos epidemiológicos
mais recentes têm-se direccionado para os factores de risco ambientais presentes na
vida adulta (Logroscino, 2005).
Uma das evidências mais marcantes, relativamente aos factores ambientais
envolvidos na DP, surgiu aquando da observação que o MPTP provocou o
aparecimento de sintomas similares aos característicos da DP, em indivíduos expostos
acidentalmente (J W Langston, Ballard, Tetrud, & Irwin, 1983). Diversos estudos
epidemiológicos têm sugerido que a exposição a pesticidas, e outras toxinas
ambientais, está associado ao desenvolvimento da DP. Através da capacidade destes
compostos de interferir com os processos mitocondriais, interromper o metabolismo
da dopamina e promover a formação de espécies reactivas de oxigénio podem iniciar
uma cascata de eventos pejorativos com capacidade de levar à neurodegeneração
observada na DP (Malkus et al., 2009; C. Olanow & Tatton, 1999)
MPTP
A descoberta, em 1983, que a administração intravenosa de MPTP leva ao
desenvolvimento de sintomas típicos da DP e a descoberta posterior que este induz
danos nas células dopaminérgicas da SNpc levou à suposição que a exposição a certos
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 26!
factores ambientais pode determinar um aumento do risco de vir a desenvolver a DP
(Lau & Breteler, 2006).
O 1-metil-4-fenil-1,2,3,6-tetrahidropiridina (MPTP) é um produto intermediário da
síntese de MPPP, um análogo da mepiridina (J. Langston, Ballard, Tetrud, & Irwin,
1983). Em 1983, esta toxina foi administrada (acidentalmente) por um grupo de
toxicodependentes (não relacionados entre si) que vieram a desenvolver,
irreversivelmente, sintomas similares aos da Doença de Parkinson, tais como:
bradicinesia, tremor, rigidez e instabilidade postural (C. Goetz et al., 2001; J.
Langston et al., 1983).
Esta pró-toxina (MPTP) é um composto lipossóluvel capaz de atravessar a barreira
hematoencefálica (BHE). Após atravessar a BHE, o MPTP é convertido em MPP+
num processo bifásico. Primariamente, nos neurónios serotoninérgicos e na glia, é
metabolizado pela iMAO-B originando o composto intermediário MPTP+, de
seguida, através de um mecanismo desconhecido forma-se o MPP+, o composto
activo, que por sua vez é posteriormente libertado no espaço extracelular (Przedborski
& Vila, 2001) .
Figura% 5% &% Representação% esquemática% do% metabolismo% do% MPTP.! Após! administração!
sistémica,!o!MPTP!atravessa!a!BHE.!Uma!vez!no!cérebro,!é!convertido!em!MPDP+!pela!MAOTB!e!
depois! em! MPP+! através! de! um! mecanismo,! para! já,! desconhecido.! Seguidamente,! o! MPP+! é!
libertado! no! espaço! extracelular! e! entra! nos! neurónios! dopaminérgicos! através! dos! DAT!
(Adaptado!de!Dauer!&!Przedborski,!2003)!!
Introdução
27!
O MPP+ entra para os neurónios dopaminérgicos através dos transportadores da
dopamina (DAT) para os quais possui elevada afinidade. Uma vez dentro destes, o
MPP+ pode seguir três vias: (1) Ligar-se aos transportadores vesiculares de
monoamina (VMAT), e acumula-se nas vesículas sinaptossomais; (2) Inserir-se na
matriz mitocondrial; ou (3) Permanecer no citosol e interagir com enzimas citosólicas
(Dauer & Przedborski, 2003; Przedborski & Vila, 2001).
!Figura 6 - Representação esquemática do metabolismo do MPP+. Uma vez dentro dos neurónios
dopaminérgicos, o MPP+ pode seguir 3 vias: (1) Inserir-se na matriz mitocondrial (tóxico); (2)
Permanecer no citosol e interagir com enzimas citosólicas (tóxico); (3) ligar-se aos VMAT, e acumula-
se nas vesículas sinaptossomais (protector). Uma vez na mitocôndria, o MPP+ bloqueia o cI da CTE.
(Adaptado de Dauer & Przedborski, 2003)
A acumulação do MPP+ dentro das vesículas parece exercer um efeito
neuroprotector, impedindo o efeito citotóxico, pois evita a interacção deste metabolito
com a matriz mitocondrial (Koller et al., 1990).
Uma vez inserido na matriz mitocondrial, o MPP+ vai interferir com a CTE,
inibindo o cI originado uma diminuição da fosforilação oxidativa. A inibição desta via
provoca uma diminuição dos níveis de ATP encefálicos o que provoca a morte celular
(Dauer & Przedborski, 2003). Outro efeito da inibição do cI será um aumento do
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 28!
stress oxidativo proveniente da formação de ROS, nomeadamente radicais
superóxido, o que também vai contribuir para a morte celular (Koller et al., 1990).
Paraquato e outros Pesticidas
Após a descoberta de uma possível relação entre o MPTP e a DP, foram realizados
vários estudos com o intuito de examinar a associação entre a exposição a factores
ambientais, tais como exposição a herbicidas e pesticidas, actividades agrícolas, vida
rural e o consumo de água provenientes de poços, com o risco acrescido de vir a
adquirir a DP (Lau & Breteler, 2006) .
Apesar da existência de divergências entre os resultados, possivelmente devido a
diferenças na metodologia aplicada e na amostra populacional, existe um padrão
geral. Este padrão sugere que o risco de vir a adquirir a DP encontra-se acrescido em
ambientes rurais, nomeadamente em agricultores, possivelmente devido à maior
exposição a herbicidas e pesticidas (Koller et al., 1990).
O herbicida paraquato é uma toxina com efeitos pejorativos nos neurónios. O
paraquato foi estudado em modelos animais, mais concretamente em ratinhos,
induzindo uma redução da actividade motora e morte celular, especialmente nos
neurónios dopaminérgicos da SNpc (McCormack et al., 2002). Adicionalmente, a
administração sistémica deste composto resulta num aumento da expressão da α-Syn
e consequente formação de agregados, similar às modificações provocadas após a
administração de MPTP (Manning-Bog et al., 2002; Vila et al., 2001). A sobre-
expressão da enzima superóxido dismutase (SOD), em ratinhos e em culturas
celulares, relevou um efeito protector em relação à toxicidade provocada pelo
paraquato, o que evidência o papel do stress oxidativo na neurodegeneração (Clair,
Oberley, & Ho, 1991; Dong et al., 2006; Elroy-stein, Bernstein, & Groner, 1986).
A rotenona é um insecticida inibidor do cI da mitocôndria. É utilizada em ratinhos
com o intuito de produzir o fenótipo da DP, incluindo a degeneração dos neurónios
dopaminérgicos, alterações motoras e a formação de inclusões fibrilares (Betarbet &
Sherer, 2000). Ao contrario do MPTP, a rotenona é altamente lipofílica e,
consequentemente, atravessa as membranas facilmente e entra nas células (Dauer &
Przedborski, 2003). Deste modo, a rotenona poderia ter a capacidade de inibir o cI
através do cérebro, ao atravessar a BHE. De facto, ratinhos sujeitos a uma
administração crónica de rotenona desenvolveram uma degeneração nigral selectiva
com a presença de α-Syn e inclusões similares aos CL, o que salienta a
Introdução
29!
susceptibilidade das células dopaminérgicas a alterações na mitocôndria (Betarbet &
Sherer, 2000).
Têm sido realizados diversos estudos, em diferentes áreas geográficas, na tentativa
de estabelecer uma ligação entre o uso de pesticidas e o risco acrescido de DP. No
entanto, a conclusão generalizada a que se chega é que apesar da DP poder estar
associado ao uso de pesticidas a longo termo, não existe uma associação comprovada
a nenhum componente em particular (Berry, La Vecchia, & Nicotera, 2010).
Tabaco e Café
O risco de vir a adquirir DP decresce cerca de 60% em fumadores e à volta de 30%
em consumidores de café. Considera-se que este efeito neuroprotector se deva à
nicotina e à cafeína respectivamente (Logroscino, 2005).
O tabaco é um dos factores de risco mais estudados e um dos poucos em que se
obteve resultados concretos. Diversos estudos demonstraram um risco inversamente
proporcional entre o consumo de tabaco e a incidência de DP. Assim, têm sido
propostos diversos mecanismos com o intuito de explicar o suposto efeito
neuroprotector do tabaco. As explicações mais plausíveis sugerem o envolvimento da
nicotina, devido às suas propriedades antioxidantes, a capacidade de estimular a
libertação de dopamina e a acção inibidora sobre a iMAO-B, que activa a
neurotoxicidade induzida pelo MPTP (Lau & Breteler, 2006).
Em relação ao consumo de café existem evidências que a cafeína exerce um efeito
protector no sistema dopaminérgicos. Um estudo realizado em 2001 demonstrou que
ratinhos tratados com cafeína antes da exposição ao MPTP sofreram uma perda
inferior de neurónios dopaminérgicos relativamente aos ratinhos sem tratamento
prévio com cafeína. Pensa-se que o efeito neuroprotector da cafeína deve-se à acção
inibitória desta sobre os receptores da adenosina-2 (Logroscino, 2005).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 30!
1.1.4.2 Factores Genéticos
A DP sempre foi considerada esporádica na natureza, contudo, nas últimas duas
décadas, foram realizados inúmeros estudos genéticos, em diferentes áreas
geográficas, que suportam a existência de uma substancial componente genética na
DP. O primeiro gene a ser relacionado com a DP foi o SNCA, foi identificado numa
família italiana que apresentava uma transmissão autossómica dominante. Deste
então, foram identificados cerca de 18 loci relacionados com a DP (Bekris, Mata, &
Zabetian, 2010).
Principais genes envolvidos na Doença de Parkinson
PARK-1 e PARK-4 : Alfa-Sinucleína
O locus PARK-1, juntamente com o locus PARK-4, contêm o gene SNCA,
localizado no cromossoma 4q21-q23, que codifica para a α-Syn (Bekris et al., 2010).
Até a data foram identificadas cinco mutações missenses : A53T, A30P, E46K, H50G
e G51A, assim como duplicações e triplicações do gene wild-type (WT) (Trinh &
Farrer, 2013). As mutações no gene SNCA são associadas à DP autossómica
dominante de início relativamente precoce e rápida progressão, sendo um fenótipo
mais agressivo e com elevada incidência de demência e danos cognitivos
(Xiromerisiou & Dardiotis, 2010).
A substituição A53T foi a primeira a ser identificada numa família com a forma
autossómica dominante da DP, apresentando um declínio cognitivo e demência. Mais
tarde foram identificadas as substituições A30P e E46K em duas famílias que
apresentavam demência com CL (Bekris et al., 2010). Recentemente foram
identificadas as mutações H50Q e G51A. A primeira foi identificada num caso
esporádico de DP de início precoce e rápida progressão com declínio cognitivo e
motor, enquanto a G51A foi identificada em 4 pacientes com DP de início precoce,
rápida progressão com sintomas piramidais envolvidos (Appel-Cresswell et al., 2013;
Lesage et al., 2013; Proukakis, Dudzik, & Brier, 2013).
Posteriormente, descobriu-se que as duplicações e as triplicações do locus do gene
SNCA podem causar PD autossómica dominante de início precoce. A idade de início
das manifestações da DP parece estar relacionado com o número de copias dos genes
Introdução
31!
(Ikeuchi, Kakita, & Shiga, 2008). No caso dos pacientes que possuem uma duplicação
neste locus, ostentando 3 copias deste gene, tendem a desenvolver DP por volta dos
50 anos, com um fenótipo mais típico, enquanto que os pacientes com triplicações,
produzindo assim 4 copias do gene, desenvolvem a DP mais cedo, por volta dos 30
anos, com tendência a ser acompanhada por demência e CL difusos (Ikeuchi et al.,
2008; Wood-Kaczmar, Gandhi, & Wood, 2006). Pode-se dizer, então, que a expressão
aumentada de α-Syn parece ser tóxica para os neurónios, havendo uma relação dose-
efeito demonstrada pelas diferenças consoante o tipo de mutação (duplicação ou
triplicação) (Wood-Kaczmar et al., 2006).
PARK 2 : Parkina
O Locus PARK 2 localiza-se no cromossoma 6q25.2-q27 e inclui o gene Parkina
que codifica para a proteína com o mesmo nome (Bekris et al., 2010; Corti et al.,
2011). Esta mutação foi originalmente identificada em famílias japonesas com
parkinsonismo juvenil e uma transmissão autossómica recessiva (Farrer, 2006).
A Parkina é uma enzima E3 que actua no processo de ubiquitinação como ligase
ubiquitina-proteina, as mutações desta proteína levam alterações no SUP conduzindo
a uma eliminação insuficiente do substracto e consequente agregação proteica (Corti
et al., 2011)
Clinicamente, este fenótipo manifesta-se muito precocemente, por volta dos 20
anos, mas também é frequente por volta dos 20-35 anos, sendo raro manifestar-se
após os 50 anos (Corti et al., 2011). A progressão da doença é geralmente lenta e
acompanhada de discinesia, distonia e alterações psiquiátricas (Bonifati, 2007).
PARK- 5: UCL-L1
Localizado no cromossoma 4p14, este locus contém o gene UCH-L1
(Hidrolase L1 Ubiquitina Carboxiterminal) (Wirdefeldt, Adami, Cole, Trichopoulos,
& Mandel, 2011). A UCL-L1 é uma enzima neuronal específica e uma das proteínas
mais abundantes no cérebro, esta proteína está envolvida no sistema SUP e foi
detectada em CL presentes nos neurónios dopaminérgicos da SNpc em doenças
neurodegenerativas (Belin & Westerlund, 2008; Bonifati, 2007; Lowe, McDermott,
Landon, Mayer, & Wilkinson, 1990).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 32!
Foi identificada uma mutação dominante da proteína UCH-L1 (193M) em dois
membros de uma família afectada pela DP hereditária típica com início por volta dos
50 anos (Belin & Westerlund, 2008; Leroy, Boyer, & Polymeropoulos, 1998). Por
outro lado, um polimorfismo na UCH-L1 (S18Y) aparenta ter um efeito protector,
sugerindo uma redução no risco de desenvolver DP esporádica (Zhang et al., 2000).
Liu et al. realizou um estudo em que propõe uma actividade de hidrólase e ligase, em
simultâneo, para a proteína UCH-L1 (Liu, Fallon, Lashuel, Liu, & Lansbury, 2002).
Deste modo, a sobre-expressão da mutação 193M da UCH-L1 provoca uma
acumulação de α-Syn, sendo sugerido, também, que esta acumulação deve-se à
ubiquitinação da α-Syn pela UCH-L1 dimerizada. Contudo, a variante polimórfica
S18Y da UCH-L1 reduz a actividade ligase sem afectar a actividade de hidrólase da
proteína, sendo uma possível explicação para o efeito protector deste polimorfismo
(F. J. S. Lee & Liu, 2008; Liu et al., 2002). No entanto, permanece desconhecida a
relação entre esta proteína e a neurodegeneração na DP familiar assim como o seu
papel na DP esporádica (F. J. S. Lee & Liu, 2008).
PARK-6 – PINK1
O Locus PARK-6 localiza-se no cromossoma 1p35-1p36 e possui o gene PINK1,
que expressa para proteína com o mesmo nome (Corti et al., 2011). Pensa-se que a
proteína-quinase PINK1 actua dentro da mitocôndria o que suporta a hipótese desta
estar relacionada com a disfunção mitocondrial e com o stress oxidativo na
patogénese da DP (Ross & Smith, 2007).
A mutação no gene PINK1 foi identificada pela primeira vez numa família italiana
e apresenta uma transmissão autossómica recessiva da DP, posteriormente foi também
mapeada em oito famílias de diferentes países europeus com uma transmissão
igualmente autossómica recessiva (Vila & Przedborski, 2004). Relativamente ao
fenótipo clínico, apresenta um início precoce em que os primeiros sintomas
manifestam-se por volta da quarta e quinta década de vida. As características clínicas
assemelham-se à DP de início tardio, com uma progressão lenta, boa resposta à L-
Dopa e, em alguns casos, demência e distúrbios psiquiátricos (Bekris, Mata, &
Zabetian, 2010).
Introdução
33!
PARK-7 : DJ-1
Este locus contém o gene DJ-1 e localiza-se no cromossoma 1p36 (Bekris et al.,
2010). A proteína DJ-1 é expressa em diferentes tecidos humanos incluindo no
cérebro, localiza-se no citoplasma, no núcleo e na mitocôndria das células (Ariga et
al., 2013; Vila & Przedborski, 2004). É uma proteína multifuncional assumindo
funções como chaperona, antioxidante, reguladora da transcrição, protease, regulação
da mitocôndria e actua, também, como um sensor de stress sendo a sua expressão
aumentada em situações de stress oxidativo. Devido às suas funções, acima descritas,
esta proteína desempenha uma função de protecção contra a morte celular induzida
pelo stress oxidativo (Ariga et al., 2013; Bekris et al., 2010; Farrer, 2006; Hardy,
Lewis, Revesz, Lees, & Paisan-Ruiz, 2009; Vila & Przedborski, 2004). Pensa-se que
a perda ou redução das funções desta proteína pode desencadear o início de doenças
relacionadas com o stress oxidativo, nomeadamente a DP (Ariga et al., 2013).
O gene DJ-1 foi primariamente identificado como um oncogene (Nagakubo et al.,
1997) e posteriormente Bonifati et al. mapeou duas mutações em dois pacientes com
DP, conduzindo à identificação do DJ-1 como um gene relacionado com a DP
familiar de transmissão autossómica recessiva (Bonifati et al., 2003)
As mutações no gene DJ-1 são responsáveis pela forma autossómica recessiva da
doença e são pouco comuns, sendo responsáveis por 1-2% dos casos de DP com
início precoce (Bonifati, 2007). Relativamente às características clínicas o
conhecimento é limitado, sabe-se que apresenta um início precoce (30-40 anos) e uma
progressão lenta, alguns pacientes manifestam quadros psiquiátricos (Bekris et al.,
2010; Corti et al., 2011).
PARK-8 : LRRK2
O locus PARK8 encontra-se no cromossoma 12p21 e contém o gene que expressa
a proteína LRRK2 tendo sido identificado pela primeira vez numa família japonesa e
apresenta uma transmissão autossómica dominante (Belin & Westerlund, 2008). A
LRRK2 é uma proteína com funções de quinase e GTPase e actua, também, em
múltiplos processos biológicos como: transmissão neuronal, arborização neuronal,
endocitose, autofagia e imunidade(Trinh & Farrer, 2013).
Até aos dias de hoje, as mutações dominantes missense na LRRK2 são a causa
genética mais comum de DP e, de acordo com os estudos disponíveis, são
responsáveis por cerca de 10 % dos casos de DP familiar autossómica dominante
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 34!
(Bonifati, 2007; Kett et al., 2012). Contudo, apesar de já terem sido reportadas
diversas variantes, apenas seis delas são consideradas patogénicas (R1441G, R1441C,
R1441H, Y1699C, G2019S e I2020T) (Bekris et al., 2010). Um aspecto interessante
relativamente a este gene, é o facto da mutação Gly2019Ser apresentar uma
frequência elevada não só em casos de DP familiar como também em casos de DP
esporádicos, em diversas populações, sendo a mutação mais comum (Bekris et al.,
2010; Bonifati, 2007; Hardy et al., 2009).
O fenótipo clínico apresenta elevada analogia com a DP idiopática, o início dos
sintomas ocorre por volta dos 60 anos, contudo, já foram reportados casos de início
precoce e de início tardio, abrangendo idades entre os 20 e os 90 anos (Gasser, 2009;
Ross & Smith, 2007). Os portadores das mutações no gene LRRK2 aparentam ter
uma DP mais benigna visto que é de progressão lenta e apresenta uma boa resposta ao
tratamento com L-Dopa e uma frequência diminuta de demência e outras
complicações psiquiátricas (Bekris et al., 2010; Gasser, 2009; Ross & Smith, 2007).
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
Introdução
35!
Tabela 1 – Resumo dos Genes Envolvidos na DP ( Adaptado de Bekris et al., 2010; Corti et al., 2011; Farrer, 2006; Gasser, 2009; Trinh & Farrer, 2013; Vila & Przedborski, 2004; Wirdefeldt et al., 2011)
Locus Cromossoma Gene Herança Fenotipo
PARK-1 PARK-4
4q21-q23 SNCA
Dominante
Início Relativamente precoce Progressão rápida Boa resposta a L-dopa Disfunção cognitiva precoce
PARK-2 6q25.2-q27 Parkina
Recessiva
Início Precoce Juvenil Progressão lenta Distonia e Discinesia
PARK-3 2p13 --
Dominante
Início 50 anos Boa resposta a L-dopa Disfunção cognitiva
PARK-5 4p14 UCHL-1 Dominante
Início 50 anos Tremor inicial antecede a bradicinesia Boa resposta a L-dopa
PARK-6 1p35-p36 PINK1
Recessiva
Início precoce Progressão Lenta Boa resposta a L-dopa Início precoce de discinesias induzidas por fármacos
PARK-7 1p36 DJ-1 Recessiva
Início precoce 30 anos Progressão Lenta Boa resposta a L-dopa Pode ocorrer alterações psiquiátricas
PARK-8 12p12 LRRK2
Dominante
Início 40-50 anos Boa resposta a L-dopa Demência ocasional
PARK-9 1p36
ATP13A2
Recessiva
Início Precoce Progressão rápida Sintomas Piramidais Demência
PARK-10 1p32 -- Dominante PARK-11 2q37.1 GIGYF2 Dominante PARK-12 Xq21-q25 -- -- PARK-13 2p13 OMI/HtrA2 Dominante Início Tardio
PARK-14 22q13.1
PLA2G6
Recessiva Início Precoce Distonia Sintomas piramidais
PARK-15 22q12-q13 FBX07 Recessiva
Início Precoce Sintomas Piramidais
PARK-16 1q32 -- --
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 36!
2. Diagnóstico e Farmacoterapia na Doença de Parkinson
2.1 Quadro Clínico e Diagnóstico da DP
Clinicamente, a DP é definida pela presença de sinais motores cardinais: tremor,
rigidez, bradicinesia e instabilidade postural. Contudo, a ocorrência de sintomas não
motores como insuficiência autónoma, danos cognitivos, depressão, deficiências
olfactivas, psicose e distúrbios do sono são bastante comuns durante o decurso da DP
(Jankovic, 2006; Samii, Jg, & Br, 2004).
O início dos sintomas normalmente é unilateral e dissimulado, havendo uma
progressão lenta mas conservando-se o carácter unilateral. Os primeiros sinais são
vagos, pode haver uma sensação de dor, dormência, fraqueza, dores musculares e
rigidez. Pode ocorrer, como sinal inicial, um tremor num membro, geralmente quando
o doente está em repouso que aumenta com as emoções e desaparece durante o sono
(Guimarães & Alegria, 2004).
O diagnóstico clínico é tipicamente baseado na presença dos sintomas motores
cardinais, a ausência de sintomas atípicos sugestivos de um diagnóstico alternativo e a
resposta ao tratamento com L-Dopa. Os critérios clínicos de diagnóstico mais usados
baseiam-se nos apresentados pela UK PD Society Brain Bank (Tabela 2). Uma das
complicações no diagnóstico da DP é a distinção entre outras síndromes
parkinsonianas, como as Atrofias Multissistémicas e a Paralesia Supranuclear
Progressiva, nos estágios iniciais da doença (Brooks, 2010; Samii et al., 2004).
Diagnóstico e Farmacoterapia na Doença de Parkinson
37!
Tabela 2 - Critérios de Diagnóstico da DP (Adaptado de UK PD Society Brain Bank Clinical Diagnostic Criteria (Hughes, Daniel, Kilford, & Lees, 1992) )
Fase 1: Diagnóstico de sindroma parkinsónica:
¬ Bradicinesia ¬ Mais pelo menos 1 dos seguintes:
• Rigidez muscular • Tremor de repouso a 4-6Hz • Instabilidade postural
Fase 2: Critérios de exclusão de DPI:
• História de AVC’s repetidos com progressão em escada das manifestações parkinsónicas
• História de traumatismos cranianos repetidos • História de encefalite • Crises oculogíricas • Tratamento neuroléptico no início das manifestações • Remissão sustentada • Persistência de manifestações unilaterais após 3 anos de evolução • Paralisia supranuclear do olhar • Sinais cerebelosos • Desenvolvimento precoce de sintomas autonómicos • Desenvolvimento precoce de demência • Sinal de Babinski • Presença de tumor cerebral ou de HPN • Resposta negativa a doses elevadas de L-Dopa (excluída a má absorção) • Exposição ao MPTP
Fase 3: Critérios adicionais que apoiam o diagnóstico de DPI:
• Início unilateral • Tremor de repouso presente • Carácter progressivo • Persistência da assimetria afectando mais o lado de início • Resposta excelente (70 a 100%) à L-Dopa • Movimentos coreicos induzidos pela L-Dopa • Resposta à L-Dopa durante pelo menos 5 anos • Evolução clínica durante mais de 10 anos
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 38!
2.2 Terapêutica Farmacológica na Doença de Parkinson
A terapêutica para a DP é exclusivamente sintomática tendo como principal
objectivo melhorar os sintomas motores e não-motores com o intuito de providenciar
uma melhor qualidade de vida (Brichta, Greengard, & Flajolet, 2013; Ferreira &
Ferreira, 2010; Kulisevsky et al., 2013) .
A escolha da terapêutica incide em objectivos como preservação da função e
capacidade de realizar actividades rotineiras da vida diária, minimização dos efeitos
adversos e contrariar os sintomas não motores como a depressão, distúrbios do sono,
fadiga e alterações cognitivas. Após o diagnóstico da DP, devem ser consideradas as
intervenções farmacológicas e não farmacológicas em simultâneo (J. Chen & Swope,
2007).
Percussores da Dopamina : Levodopa (+ Inibidor da Descarboxilase)
A L-Dopa é o pró-fármaco da dopamina e é considerado a terapêutica mais eficaz
no tratamento sintomático da DP. Recorre-se á utilização do pró-fármaco L-Dopa
visto que a dopamina não atravessa a BHE, ao passo que a L-Dopa atravessa e é
metabolizada no seu interior em dopamina exercendo o efeito terapêutico desejado.
Contudo, ao ser administrada per os, a L-Dopa vai sofrer descarboxilação em
dopamina pela dopa-descarboxílase, a nível periférico, provocando efeitos adversos
não desejáveis e, consequentemente, a biodisponibilidade de L-dopa no local de acção
vai ser muito inferior à necessária para se obter os efeitos terapêuticos pretendidos
(Rodrigues & Campos, 2006).
A principal via de metabolização da L-Dopa, a nível periférico, é através da dopa-
descarboxilase e, em menor escala, pela catecol-o-metiltransferase (Evans & Sung,
2013). Assim, de forma a evitar a metabolização periférica da L-Dopa recorre-se ao
uso de associações com um inibidor da descarboxílase dos aminoácidos como a
Carbidopa ou a Benserazida. Consequentemente, há um aumento da concentração
plasmática da L-Dopa e do tempo de meia-vida concomitante com uma redução os
efeitos adversos periféricos e um aumento da biodisponibilidade de L-Dopa a nível
central pois os inibidores da descarboxilase não atravessam a BHE. A Carbidopa e a
Benserazida impedem a metabolização periférica da L-Dopa por inibição da dopa-
descarboxilase (J. Chen & Swope, 2007; Khatri & Chaudhry, 2009).
Diagnóstico e Farmacoterapia na Doença de Parkinson
39!
Uma vez no SNC, após atravessar a BHE, a L-Dopa é carboxilada em dopamina
pela dopa-descabolixilase e acumula-se nas fendas pré-sinápticas dos neurónios
dopaminérgicos. A L-Dopa é particularmente eficaz no controlo dos sintomas
parkinsoniamos como a bradicinesia, alterações no discurso, tremores e rigidez. No
entanto, a eficácia clínica diminui a longo-prazo o com uso contínuo desta terapêutica
(Khatri & Chaudhry, 2009).
O uso prolongado de L-Dopa pode conduzir ao desenvolvimento de flutuações
motoras (fenómeno de fim de dose) como discinesia e o efeito ‘’on/off’’.
Relativamente à discinesia, o risco aparenta ser acrescido em pacientes com
associações de L-Dopa + Carbidopa. A discinesia tende a desaparecer com a
diminuição da dose, contudo, os sintomas parkinsonianos reaparecem (Rodrigues &
Campos, 2006). No efeito ‘’On/Off’’, os pacientes oscilam entre um estado ligado, em
que a terapêutica é eficaz, e um estado desligado em que não ocorre qualquer efeito
terapêutico e há um reaparecimento dos sintomas da DP (Clarke, 2004). Tem sido
sugerido que com a evolução da doença e a perda progressiva dos neurónios
dopaminérgicos da SNpc, há uma capacidade decrescida de sintetizar dopamina o que
leva a uma perda da eficácia terapêutica da L-Dopa (Rodrigues & Campos, 2006).
Inibidores da COMT
Os fármacos incluídos neste grupo terapêutico são inibidores específicos e
reversíveis da catecol-O-Metiltransferase (COMT), uma enzima que metaboliza a L-
Dopa tanto a nível periférico como central. Desta forma, em concentrações
terapêuticas, impedem a metabolização periférica da L-Dopa em 3-0-Metildopa
aumentando a biodisponibilidade a nível central e, consequentemente, prolongam o
tempo de permanência da dopamina nas fendas sinápticas. Observa-se um aumento da
AUC (área sob a curva) da L-Dopa sem haver um aumento da concentração máxima
plasmática desta (Clarke, 2004; Picon & Beltrame, 2002).
Neste grupo terapêutico estão incluídas duas moléculas: o Entacapone e o
Tolcapone. Porém, devido à ocorrência de hepatotoxicidade com consequências fatais
após a terapêutica com Tolcapone, este foi retirado do mercado Europeu (Clarke,
2004).
A Entacapona, no mercado português, tanto é comercializada em associações
triplas de L-Dopa + Carbidopa + Entacapona como em formulações apenas com a
substância activa Entacapona (Prontuário Terapêutico, 2013). Devido aos seus
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 40!
resultados positivos aquando do aparecimento de flutuações motoras relacionadas
com a terapêutica prolongada com L-Dopa, visto que reduzem o efeito ‘’on/off’’ por
uma diminuição do tempo que o doente permanece no estado off e um aumento do
tempo no estado on, esta associação aparenta ser ideal na terapêutica após o
aparecimentos dos fenómenos de fim de dose (J. Chen & Swope, 2007; Clarke, 2004;
Rodrigues & Campos, 2006).
Agonistas dos receptores da Dopamina
Este grupo farmacológico inclui vários fármacos, dos quais os mais comuns
são:Bromocriptina, Pergolida, Pramipexol, Ropinirol, Mesilato de di-
hidroergocriptina e Cabergolina (Prontuário Terapêutico, 2013). Encontram-se
divididos em derivados ergolínicos (Bromocriptina, Pergolida, Mesilato de di-
hidroergocriptina e Carbegolida) e não-ergolínicos (Ropinirol e Pramipexol) (J. J.
Chen & Swope, 2007; Khatri & Chaudhry, 2009; Prontuário Terapêutico, 2013)
Os Agonistas da Dopamina são uma alternativa terapêutica importante na
farmacoterapia da DP pois, embora apresentem uma eficácia terapêutica inferior à L-
Dopa e estejam associados a uma elevada incidência de efeito adversos, a ocorrência
de flutuações motoras, como a discinesia e o efeito ‘’on/off’’, é menor (Baker et al.,
2009; Hickey & Stacy, 2011).
Estes fármacos possuem diferentes afinidades para os vários receptores da
dopamina o que se pode traduzir em diferentes perfis farmacológicos obtendo-se,
assim, diferentes características antiparkinsonianas e diferentes perfis de segurança
consoante o fármaco. Também os ergolínicos possuem um perfil de segurança inferior
aos não-ergolínicos, no entanto, são ambos efectivos em monoterapia ou como
adjuntos da terapêutica com L-Dopa, em pacientes com flutuações motoras,
diminuindo o tempo off e permitindo reduzir as doses administradas de L-Dopa (no
caso da terapêutica em associação com L-dopa) (Bonuccelli, Del Dotto, & Rascol,
2009; J. Chen & Swope, 2007).
Os fármacos Bromocriptida e Pergolida caíram em desuso por diversas razões: a
Bromocriptida aumenta o risco de fibrose pulmonar e possui uma eficácia inferior
quando comparada com outros agonistas da dopamina. A Pergolida foi retirada do
mercado nos EUA, pela FDA, devido ao risco de desenvolvimento de valvulopatias
cardíacas (J. Chen & Swope, 2007; Khatri & Chaudhry, 2009).
!
Diagnóstico e Farmacoterapia na Doença de Parkinson
41!
Tabela 3 – Fármacos Agonistas dos Receptores de Dopamina (Adaptado de Prontuário Terapêutico, 2013)
Fármaco Características N
ão –
Erg
olín
icos
Pramipexol ( Mirapexin®, Oprymea®)
Maior afinidade para os receptores D3 Pode ser usada como adjuvante da L-Dopa ou em monoterapia Efeito atenuante nas flutuações motoras Efeito neuroprotector Estágios Iniciais e Tardios da DP
Ropinirol (Adartrel® , Dopil®)
Afinidade para os receptores D2 e D3 Pode ser usado como adjuvante da L-Dopa ou em monoterapia Estágios Iniciais e Tardios da DP
Piribedil (Rivastal®) Adjuvante da L-Dopa
Ergo
línic
os
Mesilato de Di-Hidroergocriptina (Striatal®)
Usado em monoterapia Estágios Iniciais da DP
Bromocriptina ( Parlodel® )
Elevada afinidade para os receptores D2 e antagonista parcial dos receptores D1 Pode ser usada como adjuvante da L-Dopa ou em monoterapia Estágios Iniciais e Tardios da DP
Inibidores da I-MAOB
O papel fisiológico da i-MAOB envolve a catalisação do metabolismo de diversos
neurotransmissores, nomeadamente a dopamina. Assim, a principal razão para
recorrer a um inibidor da i-MAO, como terapêutica na DP, baseia-se no facto de
ocorrer um aumento da dopamina a nível do estriado levando a uma melhoria da
actividade dopaminérgica e consequente melhoria dos sintomas motores na DP. Outra
razão será o suposto efeito neuroprotector exercido por este grupo farmacológico,
baseado em evidências que estes fármacos demonstraram actividade antioxidante e
anti-apoptótica em modelos experimentais (J. J. Chen & Swope, 2005; J. Chen &
Swope, 2007; Rodrigues & Campos, 2006).
Incluem-se dois fármacos, indicados para o tratamento da DP, neste grupo
farmacológico : Selegilina e Rasagilina (Prontuário Terapêutico,2013).
A Selegilina é um inibidor irreversível da I-MAO B e, apesar de possuir uma
maior afinidade para a i-MAO B, a sua administração deve ser efectuada em doses
baixas de forma a evitar a inibição da i-MAO A e, por conseguinte, evitar a
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 42!
ocorrência de efeitos adversos (Evans & Sung, 2013). Emprega-se, em monoterapia,
em estágios iniciais da DP e providencia uma melhoria a nível da função motora. Em
estágios mais avançados da DP é usada como adjuvante da L-Dopa e pode
proporcionar um aumento do tempo on em pacientes que apresentam o efeito
‘’on/off’’, contudo, os dados são inconsistentes (J. Chen & Swope, 2007).
A Rasagilina é um inibidor irreversível da I-MAO-B de segunda geração e, tal
como a Selegilina, é efectiva no tratamento da DP inicial, tanto como adjuvante da
L-Dopa como em monoterapia, para controlo das flutuações motoras em estágios
mais avançados da DP. Estudos demonstraram que pacientes que começaram a
terapêutica precocemente obtiveram um menor declínio funcional do que pacientes
cuja terapêutica foi retardada, o que demonstra que um início prematuro da
terapêutica com Rasagilina pode estar associado a melhores resultados a longo prazo
no que diz respeito ao controlo dos sintomas motores (J. J. Chen & Swope, 2005; J.
Chen & Swope, 2007)
Antagonistas dos Receptores Muscarínicos (Anti-colinérgicos)
Os Antagonistas dos Receptores Muscarínicos foram extensamente utilizados antes
da era da L-Dopa no tratamento da DP. Inclui três fármacos: Benzatropina,
Biperideno e Tri-hexifenidilo. Apesar dos níveis de acetilcolina não se alterarem na
DP, a diminuição de dopamina nos estriado leva a uma hiperactividade das células
muscarínicas (Y. Smith, Wichmann, Factor, & DeLong, 2012). Pensa-se, então, que
os antagonistas dos receptores muscarínicos, apesar do seu mecanismo de acção não
estar totalmente esclarecido, compensam a influência dopaminérgica (Clarke, 2004;
Rodrigues & Campos, 2006; Y. Smith et al., 2012)
Os efeitos terapêuticos deste grupo farmacológico são notavelmente inferiores aos
da L-Dopa, contudo, parecem ser efectivos no controlo do tremor e rigidez. Na
prática, o uso destes fármacos é bastante limitado pois não só estão associados a
diversos efeitos adversos, como perda de memória, confusão, alucinações,
xerostomia, como também são mal tolerados pela população idosa. Assim, são
preferencialmente usados no tratamento inicial de pacientes jovens em que predomina
o tremor (Khatri & Chaudhry, 2009; Y. Smith et al., 2012).
Diagnóstico e Farmacoterapia na Doença de Parkinson
43!
Antivíricos – Amantidina
A Amantidina é um antivírico utilizado no tratamento de infecções provocadas
pelo vírus Influenza A. O mecanismo de acção da Amantidina ainda não está
esclarecido mas pensa-se que a sua actividade antiparkinsoniana esteja relacionada
com a inibição da recaptação da dopamina concomitantemente com um aumento da
libertação de dopamina. O tratamento com Amantidina apresenta uma diminuição de
sintomas como a bradicinesia, rigidez e tremor. É usado no tratamento da DP inicial e
como adjuvante da L-Dopa com o intuito de minimizar a discinesia. Contudo, possui
um efeito de curta duração pois a sua eficácia diminui ao longo do tempo (J. Chen &
Swope, 2007; Clarke, 2004; Ferreira & Ferreira, 2010; Khatri & Chaudhry, 2009;
Rodrigues & Campos, 2006; Tsai & Yuan, 2012).
Apomorfina
A Apomorfina é um agonista de curta duração da dopamina usado no tratamento
da DP. Comparado com a L-Dopa tem um rápido início de acção sendo, por
conseguinte, indicado para estados avançados da DP em que predomine o estado off
pois vai alargar o tempo em que o paciente permanece em estado on. A via de
administração mais comum é a subcutânea por perfusão contínua ou por injecção
intermitente em bólus. Os efeitos adversos preeminentes incluem reacções cutâneas e
efeitos neuropsiquiátricos, sendo mais comuns na administração por perfusão
contínua (Clarke, 2004; Khatri & Chaudhry, 2009).
Coenzima Q-10
A Coenzima Q-10 (CoQ10) é um componente da CTE que participa na respiração
aeróbica celular e na produção de ATP. As propriedades antioxidantes desta indicam
que a CoQ10 pode vir a ter uma função importante a nível da farmacoterapia na DP
visto que, a actividade do cI encontra-se reduzida na SNpc dos pacientes com DP.
Como já foi referido anteriormente, esta actividade diminuída leva a uma acumulação
de ROS provocando danos celulares (Santos, Antunes, Santos, & Bianchi, 2009).
Estas observações originaram estudos com o objectivo de verificar se a
administração de CoQ10 poderia atrasar o desenvolvimento da DP. De facto, um
estudo, realizado em 2002, demonstrou que a administração de uma dose diária de
CoQ10 durante seis meses está associado a uma diminuição em 44% do declínio
funcional em pacientes com DP (Shults et al., 2002).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 44!
3. Mecanismos Moleculares da Doença de Parkinson
Envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinfilina -1
3.1 Alfa-Sinucleína
3.1.1 Estrutura e Localização
A α-Sinucleína foi isolada pela primeira vez através das vesículas colinérgicas do
órgão eléctrico da espécie Torpedo californica, vulgarmente conhecida como raia
eléctrica (Maroteaux, Campanelli, & Scheller, 1988). É uma pequena proteína
constituída por 140 aminoácidos cujo peso molecular ronda os 14 kDa. Está presente
em elevadas concentrações nos terminais pré-sinápticos mas também se encontra na
mitocôndria e nos núcleos das células neuronais do cérebro. A α-Sinucleína é uma
proteína citoplasmática, contudo, estudos realizados recentemente comprovaram a
existência de α-Sinucleína extracelular. (Bellucci, Navarria, Zaltieri, Missale, &
Spano, 2012; Breydo, Wu, & Uversky, 2012; Hashimoto & Masliah, 1999; Pacheco,
Aguayo, & Opazo, 2012; Perfeito & Rego, 2011).
Esta proteína pertence á família das Sinucleínas, que inclui três isoformas
diferentes, descritas como produtos do splicing alternativo. Existe, portanto, a α-Syn,
a β-Sinucleína e a γ-Sinucleína. Estas últimas são, respectivamente, constituídas por
126 e 112 aminoácidos e derivam da deleção do exão 3 e 5 (Bellucci, Navarria, et al.,
2012).
Esta família de proteínas é caracterizada por permanecer num estado nativo
unfolded e por uma ausência de estrutura secundaria típica. Têm elevada plasticidade
conformacional, podendo adquirir diversas conformações estruturais que dependem
fortemente do ambiente fisiológico em que se encontram (Dunker, Silman, Uversky,
& Sussman, 2008; V. N. Uversky, 2007).
A sua estrutura pode ser dividida em três regiões com diferentes características
estruturais :
(1) a região N-terminal inclui as posições de três mutações familiares da DP e é
caracterizada por seis sequências repetidas imperfeitas de 11 resíduos com um motivo
KTKEGV, sabe-se que forma hélices alfa anfipáticas, similares aos domínios de
ligação aos lípidos das apolipoproteinas, o que sugere que uma das funções biológicas
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
45!
da α-Syn pode estar relacionada com ligações à membrana lipídica. Esta região
adopta uma conformação em hélice alfa e possui a capacidade de ligação a
fosfolipidos (Davidson, Jonas, Clayton, & George, 1998; Leong et al., 2009).
(2) a região central (domínio NAC), que inclui os resíduos 61-95, é hidrofóbica
com característica amiloidogénicas e possui as sequências de aminoácidos
necessárias para adquirir uma conformação em folha-beta (Culvenor et al., 1999;
Leong et al., 2009).
(3) a região C-terminal, é rica em resíduos ácidos e prolinas, possui elevada carga
negativa e permanece num estado unfolded (Bellucci, Navarria, et al., 2012; Leong et
al., 2009).
!Figura 7 - Representação esquemática da estrutura da α-Syn. (Adaptado de
http://www3.mpibpc.mpg.de/groups/jovin/index.php/ResearchSubjects/Alpha-synuclein (2012))
Em certas condições patológicas, a α-Syn pode sofrer alterações na sua estrutura
conformacional com uma consequente agregação e formação de depósitos. Como é o
caso da DP em que ocorre a formação de inclusões intracelulares e neurodegeneração
(Beyer, 2006).
3.1.2 Funções da alfa- Sinucleína
Apesar das funções da α-Syn não estarem totalmente esclarecidas, foram propostas
diversas funções prováveis, incluindo o transporte e libertação vesicular, ligação a
ácidos gordos e regulação fisiológica de certas enzimas, transportadores e
neurotransmissores vesiculares, assim como funções neuroprotectoras (Breydo et al.,
2012). Também diversas linhas de evidência sugerem que esta proteína desempenha
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 46!
um papel importante a nível dos terminais pré-sinápticos relacionados com
processos membranares (Bellucci, Navarria, et al., 2012; George, 2002).
De facto, o envolvimento desta proteína na regulação da apoptose neuronal e
consequente protecção dos neurónios de diversos agentes estimuladores da apoptose
foi comprovada (Da Costa, Ancolio, & Checler, 2000). Um estudo realizado em
ratinhos knockout para todas as Sinucleínas (alfa, beta e gama) revelou uma disfunção
dependente da idade, sugerindo uma contribuição importante destas proteínas a nível
do funcionamento do sistema nervoso a longo prazo, sugerindo que estas proteínas
são importantes para o funcionamento do sistema nervoso a longo prazo (Greten-
Harrison et al., 2010).
A primeira evidência de uma possível função pré-sináptica da α-Syn surgiu
aquando da sua descoberta, como já referido anteriormente, em vesículas colinérgicas
da espécie Torpedo californica (Maroteaux et al., 1988). Em posteriores
investigações, identificou-se esta proteína em placas de amilóide na Doença de
Alzheimer, com elevados níveis de NAC, e análises subsequentes à região NAC da α-
Sinucleína veio comprovar a localização pré-sináptica desta proteína (Iwai, Masliah,
Yoshimoto, & Ge, 1995; Uéda et al., 1993).
A descoberta de expressão de mRNA da α-Syn em regiões do cérebro de pássaros
jovens Mandarins relacionadas com o controlo do canto, onde ocorria um decréscimo
dos níveis desta proteína durante a fase de aquisição do canto, em comparação com
outras regiões do cérebro não envolvidas no canto sugere, também, o envolvimento da
α-Syn na plasticidade sináptica (Clayton & George, 1998).
A supressão do gene da α-Syn em ratinhos levou a um aumento dos níveis de
dopamina no nigrostrial em resposta a estímulos eléctricos, indicando que a α-Syn
está implicada no controlo da actividade sináptica e que actua como um modulador da
transmissão da dopamina. Contudo, a ausência desta proteína não é letal nem afecta a
morfologia do cérebro dos ratinhos, sugerindo um papel não essencial da α-Syn no
desenvolvimento neuronal e/ou a existência de vias compensatórias (Abeliovich et al.,
2000; Cabin et al., 2002).
A α-Syn mostrou regular a produção de dopamina em culturas celulares através da
sua interacção com a tirosina hidroxilase (TH), esta enzima actua como factor
limitante na conversão de tirosina a L-DOPA na via de síntese de dopamina. Assim,
uma expressão excessiva de α-Syn nas células reduz a actividade do promotor da TH,
reduzindo os níveis do mRNA da proteína e consequentemente da proteína em si. Por
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
47!
outro lado, a α-Syn também se liga à TH, impedindo a sua fosforilação e inibindo a
sua activação através do aumento da actividade da proteína fostatase A2. Consistente
com o papel da α-Syn na regulação da biossíntese da dopamina em culturas celulares,
a redução da actividade da TH foi observada em diversos modelos de ratinhos com
sobre-expressão de α-Syn WT (Venda, Cragg, Buchman, & Wade-Martins, 2010). Foi
também demonstrado, que a α-Syn interage com a descarboxilase dos aminoácidos L-
aromáticos (AADC), uma enzima que catalisa a conversão de L-dopa em dopamina.
A sobre-expressão da α-Syn reduz a actividade da enzima AADC através da
diminuição da fosforilação da enzima (Ozansoy & Başak, 2013; Venda et al., 2010;
Yu et al., 2004)
Nos terminais pré-sinápticos, a α-Syn monomérica existe em equilíbrio entre a sua
forma livre e a sua forma ligada, sendo a fracção ligada a membranas cerca de 15%
(H.-J. Lee, Choi, & Lee, 2002). Esta forte associação com as estruturas vesiculares
levou à formulação da hipótese de que a α-Syn possa regular a libertação e/ou
turnover vesicular e exercer outras funções sinápticas no SNC (Clayton & George,
1998; Davidson et al., 1998; Uéda et al., 1993)..
A interacção da α-Syn com as membranas foi provada recentemente por um estudo
que demonstrou que esta proteína possui a capacidade de inibir a fosfolipase D2, uma
proteína localizada nas membranas plasmáticas e que está envolvida no transporte
membranar, nomeadamente na exocitose, e na produção de ácido fosfastídico,
sugerindo o envolvimento da α-Sinucleína no transporte membranar através de
vesículas (Bellucci, Navarria, et al., 2012; Bendor, Logan, & Edwards, 2013). Para
além disso, os lípidos podem facilitar a incorporação da α-Syn nas membranas assim
como a elongação das fibrilas de α-Sinucleína o que indica que esta proteína pode
estar envolvida na biogénese das membranas sinápticas (Gai et al., 2000). Diversas
outras evidências suportam a hipótese da interacção da α-Syn com as membranas. De
facto, um estudo já mencionado anteriormente, realizado por Abeliovich et al.,
demonstra que a supressão do gene da α-Syn em ratinhos provoca um aumento dos
níveis de dopamina em resposta a estímulos eléctricos, reforça a hipótese de que a α-
Syn está envolvida no controlo da actividade sináptica e que actua como modulador
da transmissão dopaminérgica (Abeliovich et al., 2000). Para além disso, a depleção
de α-Syn, in vitro, resulta numa diminuição das pools distais das vesículas pré-
sinápticas em neurónios do hipocampo (Murphy, Rueter, Trojanowski, & Lee, 2000).
Outro estudo realizado em ratinhos knockout para α-Syn demonstrou uma redução das
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 48!
pools das vesículas sinápticas, implicando que a α-Syn endógena possa regular a
mobilização das vesículas nos terminais nervosos (Cabin et al., 2002)
A α-Syn tem, também, a capacidade de interagir com diversas proteínas sinápticas,
em particular foi provado que esta proteína pode interagir e modular as proteínas da
família Rab, moduladoras essenciais do transporte membranar, exocitose e da
libertação de vesículas sinápticas nas células neuronais (Chua & Tang, 2011; Dalfó,
Barrachina, Rosa, Ambrosio, & Ferrer, 2004; Fukuda, 2008; Gitler et al., 2008). Para
além disso, a α-Sinucleína pode ter a capacidade de modular o transporte vesicular
através da interacção com a proteína receptora 1 da Rab prenilada (H. J. Lee, Kang,
Lee, & Im, 2011). Desta forma, a α-Syn aparenta ter um papel modulador tanto na
mobilização das vesículas sinápticas como no transporte membranar (Bellucci,
Navarria, et al., 2012). Esta hipótese foi confirmada por um estudo em que ratinhos
knockout para α-Syn apresentaram níveis diminuídos do transportador de dopamina
(DAT) assim como uma diminuição no reuptake de dopamina no estrato dorsal em
paralelo com um aumento concomitante de libertação basal de dopamina
(Chadchankar, Ihalainen, Tanila, & Yavich, 2011). É de salientar que a expressão
superficial de DAT depende das proteína SNARE, essenciais para a fusão de
membranas e a exocitose das vesículas sinápticas e cuja função é regulada pela α-Syn
(Burré et al., 2010; R. Chen, Furman, & Gnegy, 2010)
A hipótese da α-Syn desempenhar funções de chaperona foi considerada devido à
sua capacidade de interagir com uma larga variedade de ligandos e proteínas celulares
e à sua estrutura bioquímica. Foi demonstrado que a α-Sinucleína possui elevada
homologia com o chaperona 14-3-3, tanto a nível estrutural como funcional
(Ostrerova et al., 1999). Sabe-se que estas proteínas chaperona controlam a
proliferação celular em mamíferos, regulam a exocitose e a actividade da proteína
quinase C. Levando à hipótese de que a α-Sinucleína possa interagir com os terminais
sinápticos de inúmeras proteínas que regulam a neurotransmissão da dopamina e,
também, actuar como uma proteína chaperona, tendo uma função de protecção celular
(Souza, Giasson, Lee, & Ischiropoulos, 2000; V. N. Uversky, 2007).
Em suma, o papel fisiológico da α-Syn permanece ainda pouco claro. Sabe-se que
é expressa no cérebro e noutros tecidos tal como células hematopoéticas (Miller et al.,
2004). Esta proteína, como referido anteriormente, possui a capacidade de ligação a
lípidos e nos neurónios está associada às vesículas pré-sinápticas e à membrana
plasmática (Jo, McLaurin, Yip, St George-Hyslop, & Fraser, 2000; Withers, George,
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
49!
Banker, & Clayton, 1997). A associação da α-Syn com as vesículas é modulada pela
actividade sináptica, em que a proteína sofre uma dissociação das vesículas após
estimulação eléctrica dos neurónios (Bellani et al., 2010). Pensa-se que a α-Syn
possui uma função não essencial na sinapse pois ratinhos knockout demonstraram
anomalias na neurotransmissão (Martín, González-García, Milán, Fariñas, & Ceña,
2004).
3.1.3 Envolvimento na doença de Parkinson
O termo sinucleinopatias é empregue para definir um grupo de doenças
neurodegenerativas nas quais se observa uma acumulação de agregados de α-Syn com
um efeito patológico. Nestas doenças a α-Syn forma agregados e depósitos em certas
populações de neurónios e células da glia (Galvin, Lee, & Trojanowski, 2001;
Goedert, 1999).
A α-Syn é uma proteína pré-sináptica relacionada geneticamente e
neuropatologicamente com a DP. Esta proteína pode contribuir para a fisiopatologia
da DP de diversas formas, mas supõe-se que os olígomeros solúveis e as protofibrilas
são as principais espécies tóxicas que provocam alterações na homeostase celular e a
consequente morte neuronal. Além disso, a expressão desta proteína pode exercer,
também, efeitos pejorativos nas células vizinhas, inclusive induzir a formação de
agregados, o que possivelmente contribui para a propagação da doença (Leonidas
Stefanis, 2012).
A identificação, por Uéda et al. em 1993, de elevadas concentrações do fragmento
NAC da proteína α-Syn em placas amilóides características da doença de Alzheimer,
assim como, a descoberta que esta proteína é um dos componentes maioritários nos
CL na DP, formando depósitos de fibrilas amilóides dentro destes, o reconhecimento
de cinco mutações a nível do gene SNCA em casos de DP em famílias europeias e o
facto desta proteína formar depósitos e agregações a nível dos neurónios
dopaminérgicos, levou à suspeita de que esta proteína poderia ter um papel importante
na fisiopatologia das doenças neurodegenerativas, nomeadamente na DP. (Recchia et
al., 2004; Uéda et al., 1993). Actualmente, existe uma elevada quantidade de
evidências experimentais que sustentam o papel da α-Syn na fisiopatologia da DP
(Bisaglia, Mammi, & Bubacco, 2009).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 50!
Enquanto que as funções fisiológicas da α-Syn continuam a não ser totalmente
claras, o seu papel patológico, provocado por diversas alterações, é mais evidente
(Bisaglia et al., 2009).
A α-Syn, in vitro, agrega-se em fibrilas amilóides similares, morfologicamente e
funcionalmente, às fibrilas amilóides extraídas de CL in vivo, que estão associados a
diversas doenças neurodegenerativas, nomeadamente a DP (Waxman & Giasson,
2009). Considerando que a morte neuronal é uma das características mais vinculativas
da DP, combinado com o evidente papel da α-Syn na fisiopatologia na DP é deduzível
que a α-Syn possa interferir neste processo de morte celular (Cookson, 2009)
Esta acumulação anormal de α-Syn ocorre em estágios precoces do
desenvolvimento da doença e parece afectar diversas zonas do cérebro consoante a
progressão da doença. A acumulação mais generalizada de α-Syn parece estar
subjacente, pelo menos em parte, às deficiências cognitivas e comportamentais na DP
com demência. Os mecanismos subjacentes a estas funções anormais da α-Syn e o
impacto destas na DP ainda não esta totalmente esclarecido, contudo têm sido
sugeridas diversas possibilidades, as quais se encontram descritas nos parágrafos
subsequentes (Vekrellis, Xilouri, Emmanouilidou, Rideout, & Stefanis, 2011).
A formação destas fibrilas envolve uma agregação inicial de α-Syn em pequenos
olígomeros e protofibrilas que sofrem uma posterior elongação originando em fibrilas
maturas (K. a Conway, Harper, & Lansbury, 1998) e pensa-se que é um processo
dependente da nucleação (Leong et al., 2009). A agregação da α-Syn envolve uma
mudança da conformação inicial do monómero desta proteína numa conformação
parcialmente enrolada sendo submetida a diversas auto-associações desfavorecedoras
de forma a formar um núcleo altamente instável durante a fase lag (Waxman &
Giasson, 2009). A formação do núcleo é seguida de uma fase de crescimento, a
elongação, em que este núcleo rapidamente se transforma em fibrilas pela adição de
monómeros (Leong et al., 2009). Supõe-se que estas protofibrilas constituam as
espécies perniciosas da α-Syn, provocando a morte celular através da sua toxicidade
(Beyer et al., 2009).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
51!
Figura 8 - Representação Esquemática do Processo de Agregação da α-Syn (Adaptado de Marques
& Outeiro,2012)
A forma monomérica da α-Syn pode, também, sofrer várias alterações,
subjacentes a modificações pós-traducionais e mutações genéticas, que aparentam
estar relacionadas com a formação de espécies patogénicas de α-Syn (Bisaglia et al.,
2009).
A descoberta das mutações a nível do gene SNCA relacionadas com a DP foi
critica na pesquisa da etiologia da DP. Contudo, os mecanismos moleculares através
dos quais estas mutações provocam a DP ainda não estão elucidados na totalidade
(Bisaglia et al., 2009).
Análises detalhadas através do recurso a uma combinação de técnicas de baixa
resolução revelaram que as mutações A30P, E46K e A53T não afectam a estrutura
global da α-Syn, que permanece no seu estado nativo ‘’unfolded’’(V. Uversky &
Eliezer, 2009).
Contudo estudos mais detalhados, revelaram que todas as três mutações alteram a
cinética de agregação da α-Syn. As mutações A53T e E46K aumentam a taxa de
agregação (mas não necessariamente a taxa de fibrilação) ao passo que a mutação
A30P diminui (Choi et al., 2004; K. a Conway et al., 1998; K. A. Conway et al.,
2000). Em comparação com a α-Syn WT, as mutação A53T e A30P promovem a
acumulação de olígomeros prefibrilares enquanto a E46K tem um efeito oposto (K. A.
Conway et al., 2000). Análises à mutação E46K demonstraram que esta leva a
mudanças na conformação da proteína monomérica e forma fibrilas insolúveis in vitro
mais rapidamente que a proteína WT, também a capacidade das protofibrilas, nesta
mutação e na WT, de permeabilizar as vesículas lipídicas foram demonstradas, in
vitro, neste estudo (Fredenburg et al., 2007).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 52!
A tendência da estrutura secundaria da α-Syn WT permanecer num estado
desarranjado é alterada por duas mutações. A A30P atenua a propensão da região N-
terminal para adoptar conformações helicoidais enquanto que, a mutação A53T possui
uma tendência para formar uma estrutura secundaria regular em torno do local da
mutação (V. Uversky & Eliezer, 2009).
Relativamente à interacção com lípidos, a mutação A53T parece ter um efeito
moderado no impedimento da ligação às membranas enquanto que a mutação A30P
diminui extensivamente a interacção da α-Syn com os lípidos in vitro e in vivo. Já a
mutação E46K aumenta a capacidade de ligação, desta proteína, a lipossomas
carregados negativamente (Choi et al., 2004).
Embora os estudos sobre as mutações genéticas na α-Syn levem a uma maior
compreensão sobre as funções e os mecanismos patológicos desta proteína, estas só
contribuem para uma pequena percentagem dos casos de DP. Na realidade, mais de
90% dos casos de DP são esporádicos e, portanto, caracterizados pela presença de
agregados de α-Syn (Spillantini, Crowther, Jakes, Hasegawa, & Goedert, 1998).
Por esse motivo, o interesse direccionou-se para as alterações que convertem a
α-Syn WT numa espécie patogénica. Já foi demonstrado que a α-Syn WT forma
agregados idênticos aos encontrados em cérebros de pacientes com DP, contudo, a
sua formação ocorre a uma taxa inferior à das espécies mutadas de α-Syn (Serpell,
Berriman, Jakes, Goedert, & Crowther, 2000).
Foram propostas, então, diversas modificações pós-traducionais capazes de
alterar a função da α-Syn e, assim, induzir a formação de agregados de fibrilas. Estão
descritas diversas modificações pós-traducionais que envolvem diferentes processos
resultando, todas elas, em alterações do tamanho, carga, estrutura e conformação das
proteínas, levando a uma alterações das actividades enzimáticas, afinidade de ligação
ou hidrofobicidade. Em suma, conduzem a uma alteração no funcionamento das
proteínas (Beyer, 2006).
A fosforilação é provavelmente a modificação pós-traducional mais
importante. A α-Syn pode sofrer fosforilação a nível do resíduos de serina 129 e 87 e
nos resíduos 125, 133 e 136 localizados na região C-terminal. (Beyer, 2006). Porém, é
a nível do resíduo de serina 129 que a α-Sinucleína se encontra extensivamente
fosforilada em tecidos cerebrais de pacientes com DP e outras doença
neurodegenerativas (Fujiwara et al., 2002).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
53!
Apesar da ideia inicial, comprovada por estudos em moscas transgénicas, que a
fosforilação da α-Syn no resíduo de serina 129 leva a um aumento de olígomeros
solúveis desta proteína e da neurotoxicidade, estudos subsequentes obtiveram
resultados contraditórios (Leonidas Stefanis, 2012).
Lee et al. realizou um estudo que demonstra que o aumento da desfosforilação do
resíduo 129 da α-Syn através da proteína fosfatase 2A (PP2A) provocava uma
diminuição da fosforilação da serina 129 e da agregação da α-Syn no cérebro de
ratinhos. Isto é, a PP2A é uma proteína que desfoforiliza o resíduo 129 e a actividade
desta proteína é aumentada aquando da metilação desta. Assim, neste estudo foi
demonstrado que ao aumentar a actividade da PP2A através da metilação, esta vai
aumentar a desfosforilação do residuo serina 129 da α-Sinucleína o que leva a uma
diminuição dos níveis de α-Syn fosforilada e a agregação desta no cérebro de ratinhos
sugerindo um papel prejudicial da fosforilação no processo da doença (K.-W. Lee et
al., 2011).
Contudo, investigadores da Ecole Polytechnique Fédérale de Lausanne, em 2013,
ao realizar um estudo em ratos sobre a fosforilação demonstraram que esta pode ter
efeitos positivos. Neste estudo foi injectado no cérebro de ratos neurónios que se
pensa que podem desencadear a doença através de uma expressão excessiva de α-Syn
e a enzima responsável pela fosforilação da α- Syn (PLK2). Como resultado,
observou-se que os ratos sujeitos a estes dois parâmetros – expressão excessiva de α-
Syn e fosforilação – sofreram uma perda em cerca de 70% inferior de neurónios
comparativamente ao grupo de ratos em que apenas estava sujeito a uma expressão
excessiva de α-Syn, consequentemente estes ratinhos desenvolveram menos lesões e
ostentaram menos sintomas parkinsonianos (Ecole Polytechnique Fédérale de
Lausanne, 2013)
O resíduo de serina 87 é outro local de fosforilação da α-Syn, que também se
encontra associado aos CL na sua forma fosforilada, contudo, a significância a nível
patológico ainda não esta esclarecida (Leonidas Stefanis, 2012).
Assim, o papel patológico da fosforilação permanece pouco claro, pois se por um
lado parece acrescer o risco de formação de agregados por outro, segundo descobertas
recentes, pode desempenhar um papel a nível da neuroprotecção.
Tanto a nitração como a oxidação da Α-Syn foram propostas como responsáveis
pela formação de olígomeros (Beyer, 2006). A α-Syn na sua forma nitrada, também
foi detectada nos CL e aparenta promover a formação de agregados de fibrilas
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 54!
(Leonidas Stefanis, 2012). A nitração da α-Syn ocorre nos resíduos de tirosina,
particularmente nos resíduos 125 e 39. A nitração do resíduo 125 leva a uma
dimerização da α-Syn, ao passo que a nitração do resíduo 39 reduz a capacidade de
ligação as vesículas lipídicas, aumentando a capacidade de polimerização (Beyer,
2006). Hodara et al, demonstrou que a α-Syn nitrada não é processada de modo eficaz
pelas protéases intracelulares conduzindo à acumulação desta proteína e a um
aumento da taxa de formação de fibrilas (Hodara et al., 2004). Neste mesmo estudo,
foi demonstrado que as forma monoméricas e diméricas nitradas de α-Syn promovem
a formação de fibrilas, enquanto que, a forma oligomérica nitrada desta proteína
estabiliza como olígomeros estáveis, sugerindo que a nitração tem efeitos complexos
a nível da agregação da α-Syn (Hodara et al., 2004; Leonidas Stefanis, 2012). Numa
analise colectiva, a nitração da α-Sinucleína aparenta reduzir a ligação desta proteína
às vesículas lipídicas, prolongar a meia-vida intracelular e conduzir a formação de
inclusões de α-Syn (Hodara et al., 2004).
Relativamente aos efeitos da oxidação na α-Syn, o stress oxidativo também parece
ter um papel relevante na formação de agregados desta proteína e, talvez, na formação
de olígomeros intermediários tóxicos (Cookson, 2009). Comprovando esta hipótese,
um estudo realizado por Takahashi et al. demonstrou que a α-Syn exposta a FeCl2 têm
maior propensão à formação de olígomeros e espécies de elevado peso molecular,
levando, também, a um aumento da actividade da proteína quinase CK2 (M.
Takahashi et al., 2007). Um outro estudo, revelou que a expressão excessiva de α-Syn
pode induzir uma agregação dependente do ferro (Recchia et al., 2004).
Assim, as modificações pós-traducionais e o stress oxidativo, apesar de serem
mecanismos diferentes, aparentam estar inter-relacionados aquando da sua
contribuição para a agregação da α-Syn (Perfeito & Rego, 2011).
Como foi referido anteriormente, diversos mecanismos induzem a agregação, a
formação de fibrilas e a formação de depósitos da α-Syn, o que leva à questão sobre
qual efeito destas alterações na neurodegeneração.
Toxicidade da alfa-Sinucleína
Diversos modelos foram realizados com o intuito de comprovar a toxicidade da α-
Syn in vivo. Em culturas celulares, tanto em fase estacionária como em fase de
crescimento, o aumento da expressão de α-Sinucleína limitou o crescimento celular.
A toxicidade desta proteína também foi demonstrada na Drosophila, onde foi
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
55!
reportado uma perda de neurónios, contudo, neste modelo os resultados são
controversos e os efeitos obtidos foram modestos (L. Chen & Feany, 2005). Foi
realizado outro estudo em minhocas C.elegans com o intuito de comprovar a
toxicidade da α-Syn nos neurónios in vivo. Todos estes estudos demonstraram o efeito
nocivo da α-Sinucleína em organismos que esta proteína não está presente em
condições fisiológicas (Breyde et al., 2012)
Os níveis de α-Syn no cérebro depende de um equilíbrio entre as taxas de síntese,
agregação e eliminação. Um desequilíbrio entre estes mecanismos, causado pela
disfunção de uma destas vias, pode resultar em níveis anormais desta proteína que
pode favorecer a formação e/ou acumulação de espécies fibrilares ou oligoméricas, as
quais podem ser tóxicas (Lashuel, Overk, Oueslati, & Masliah, 2013).
Os mecanismos propostos para descrever a toxicidade da α-Syn são agrupados em
três classes : (a) Deformação mecânicas dos compartimentos/mecanismos celulares;
(b) Aumento de funções com efeitos tóxicos; (c) ou perda de funções com efeitos
tóxicos. Não sendo estes mecanismos necessariamente exclusivos, podem actuar de
modo sinérgico (M. C. Bennett, 2005).
O modelo mais aceite para descrever a toxicidade da α-Syn incide sobre a
permeabilização das membranas das células pelos agregados amilóides. Os
olígomeros de α-Syn podem ligar-se às membranas lipídicas e romper a bicamada
lipídica (Auluck, Caraveo, & Lindquist, 2010; B. van Rooijen, 2010; B. D. van
Rooijen, Claessens, & Subramaniam, 2010). Certas formas oligoméricas de α-Syn
mostraram a capacidade de penetrar nas membranas e formar poros (Giehm, Svergun,
Otzen, & Vestergaard, 2011; Volles & Lansbury, 2003). Também foi proposto a
permeabilização da membrana sem a formação de poros (Kayed et al., 2004).
Por outro lado, a disfunção da degradação da α-Syn devido à inibição do
proteassoma pelas espécies agregadas e a produção de ROS, também foi proposto
como um mecanismo possível para a neurotoxicidade dos agregados de α-Syn (M. C.
Bennett, 2005; Brown, 2010). É possível que múltiplas espécies tóxicas de α-
Sinucleína agregada estejam presentes in vivo e que recorram a diferentes
mecanismos de toxicidade. Para além disso, diversos estudos indicam que a
toxicidade da α-Syn pode estar associada à perda de funções (M. C. Bennett, 2005).
Diversas linhas de evidência sugerem que os olígomeros de α-Syn apresentam a
espécie tóxica (V. N. Uversky, 2007). A forma oligoméricas da α-Syn deposita-se no
cérebro de pacientes que apresentam uma triplicação no gene da α-Syn (Miller et al.,
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 56!
2004). Por outro lado, a forma mutante A30P acelera fortemente a oligomerização da
α-Syn o que retarda significativamente a formação de fibrilas maduras (K. A. Conway
et al., 2000; J. Li, Vn, & Al, 2001, 2002). Diversos factos suportam a hipótese da
toxicidade dos olígomeros : (i) em modelos celulares, a toxicidade é geralmente
observada sem que haja agregação da α-Syn, indicando que são as espécies solúveis
que mediam a toxicidade (Xu et al., 2002); (ii) In vitro, a agregação da α-Syn e a
formação de depósitos de fracções insolúveis só é detectada após a morte celular
(Gosavi, Lee, Lee, Patel, & Lee, 2002); (iii) Ratinhos transgénicos que expressam a α-
Syn WT humana desenvolveram inclusões intraneuronais não-fibrilares em diversas
áreas do cérebro, incluindo na SNpc (Masliah et al., 2000); (iv) Ratinhos transgénicos
a expressar a α-Syn WT e a A53T exibiram neurodegeneração fora do SN sem
apresentar inclusões fibrilares (van der Putten et al., 2000); (v) A expressão de α-Syn
no SN de ratos levou a uma toxicidade dopaminérgica selectiva com inclusões não-
fibrilares (Lo Bianco, Schneider, Ridet, Déglon, & Aebischer, 2002); (vi) As
inclusões de α-Syn, em alguns modelos animais, não contêm fibrilas e, para além
disso, as inclusões fibrilares na mosca podem ocorrer sem que haja neurodegeneração
(Auluck & Bonini, 2002; Auluck, Chan, Trojanowski, Lee, & Bonini, 2002); (vii) A
perda de neurónios dopaminérgicos foi mais elevada em ratinhos transgénicos a
expressar olígomeros formados pelas mutações E53K e E57K em comparação com os
ratinhos a expressar fibrilas pela mutação A53T (Winner & Jappelli, 2011).
Com base nestas e outras observações, tem sido sugerido que a formação dos CL
tem um efeito protector na neurodegeneração indicando fortemente que a morte dos
neurónios deve-se à formação de espécies protofibrilares (V. N. Uversky, 2007)
Desta forma, a base molecular da DP aparenta estar fortemente associada à
formação de agregados de α-Syn, esta proteína pode adoptar inúmeras conformações
diferentes e diversos estados de agregação dependendo de vários factores e condições.
Qualquer um dos estados de agregação pode ser tóxico, contudo, acredita-se que a
maior neurotoxicidade deve-se aos olígomeros (Breydo et al., 2012).
É importante ter noção que, apesar da DP ser caracterizada pela acumulação de
depósitos contendo α-Syn, esta doença é multifactorial e cuja patogenia não pode ser
explicada apenas com base na agregação da α-Syn. De facto, a natureza da DP é
bastante complexa e pode ser provocada por diversos factores (M. C. Bennett, 2005).
Contudo, muitos dos factores que promovem a doença estão, directamente ou
indirectamente, relacionados com alterações da α-Syn, assim a analise detalhada das
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
57!
funções alterações e agregação desta proteína podem fornecer uma base importante
para um futuro desenvolvimento de terapêuticas eficazes (Breydo et al., 2012).
Figura 9 – Proposta de Modelo da Toxicidade da α-Syn - Nas condições fisiológicas normais, a α-
Syn encontra-se num estado nativo unfolded. No entanto, em condições patológicas a α-Syn converte-
se em espécies patogénicas misfolding (dímeros e olígomeros) com tendência a agregar e formar
protofibrilas. Estas estruturas parecem estar relacionadas com a formação de inclusões de α-Syn
semelhantes aos CL e neuritos de Lewy. As alterações genéticas podem acelerar este processo. Os
sistemas celulares que previnem, revertem ou eliminam as proteínas misfolding (chaperonas, SUP,
fagossoma, lisossoma) encontram-se sobrecarregados por estas espécies oligoméricas de α-Syn
(indicado a tracejado). Dados recentes sugerem que a progressão da DP pode estar relacionada com a
transmissão célula a célula das espécies patológicas de α-Syn. Pensa-se que a transmissão de α-Syn
está associada a diversas consequências tóxicas inter-relacionadas. Permanece por esclarecer quais as
espécies de α-Syn que são tóxicas para os neurónios. (Adaptado de Irwin, Lee, & Trojanowski, 2013)
Propagação da alfa-Sinucleína
Nas condições fisiológicas, a α-Syn tem sido considerada uma proteína sináptica
exclusivamente intracelular que se associa às vesículas sinápticas (Iwai et al., 1995).
Todavia, estudos recentes sugerem que os olígomeros da α-Syn podem ser eliminados
dos neurónios através de mecanismos de secreção invulgares. A disseminação da α-
Syn pode envolver diversos mecanismos tais como endocitose, transmissão
transsináptica, penetração directa, através de receptores da membrana ou através
exossomas. Estes agregados de α-Syn extracelular podem ser transferidos de um
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 58!
neurónio para o outro assim como de um neurónio para uma célula da glia (Danzer et
al., 2011; Emmanouilidou et al., 2010; Jao, Hegde, Chen, Haworth, & Langen, 2008;
Tsigelny et al., 2012).
A propagação da α-Syn entre neurónios sugere que esta proteína tem propriedades
similares às proteínas dos priões, as PrPsc (isoforma anormal da proteína do prião). As
PrPsc provocam o enrolamento incorrecto da proteína do prião nativa e consequente
agregação. Estes agregados disseminam-se no cérebro promovendo a
neurodegeneração (Irwin et al., 2013).
Estudos realizados recentemente revelaram que, na autopsia de pacientes com DP
que receberam implantes de tecido cerebral embrionário, os neurónios transplantados
desenvolveram agregados similares aos CL uma década após o transplante,
evidenciando a transmissão da α-Syn (Stefanova et al., 2009). Estas evidências foram
confirmadas por um outro estudo, realizado em ratinhos transgénicos, que sugere que
a ocorrência de transmissão da α-Syn das células neuronais do hospedeiro para as
células neuronais percussoras transplantadas (Desplats et al., 2009). Este mesmo
estudo demonstrou que a transmissão da α-Syn ocorre sem a necessidade de contacto
directo entre as células, insinuando o envolvimento de vias específicas de secreção,
exocitose ou endocitose (Desplats et al., 2009). Para além disso, a α-Syn foi detectada
no líquido cefalorraquidiano, no plasma, na saliva e no parênquima cerebral o que
suporta o envolvimento dos processos de secreção (Devic et al., 2011; El-Agnaf et al.,
2003; Emmanouilidou et al., 2011; Tokuda et al., 2006). Além do mais, a distribuição
dos CL descrita por Braak, pode ser interpretada como mais uma evidência da
disseminação da α-Syn (Bellucci, Zaltieri, et al., 2012; Braak, Ghebremedhin, Rüb,
Bratzke, & Del Tredici, 2004). Contudo são necessários mais estudos in vivo com o
intuito de comprovar esta hipótese.
Também as proteínas misfolding podem favorecer a propagação da α-Syn através
do aumento da associação desta proteína às vesículas (Jang et al., 2010). Foi
demonstrado que a α-Syn WT e a forma mutada A53T ao serem libertadas pelos
neurónios podem provocar uma resposta inflamatória em linhas celulares da microglia
o que leva a sugerir que a α-Syn segregada pode contribuir fortemente para a
neuroinflamação subjacente à DP, que por sua vez pode originar danos neuronais e
sinápticos (Alvarez-Erviti, Couch, Richardson, Cooper, & Wood, 2011).
A propagação pode provocar a agregação da α-Syn nas células receptoras,
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
59!
contribuindo, deste modo, para o início da disfunção sináptica na DP assim como, a
disseminação da patologia pode estar na origem dos mecanismos tóxicos nas células
receptoras (Bellucci, Zaltieri, et al., 2012). Foi provado recentemente, que as fibrilas
exogéneas de α-Syn têm a capacidade de induzir patologias associadas aos CL,
provocando uma diminuição selectiva das proteínas sinápticas, uma disfunção
progressiva da excitabilidade neuronal e a morte dos neurónios (Volpicelli, Luk, &
Patel, 2011).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 60!
3.2 Sinfilina-1
3.2.1 Estrutura e Localização
O interesse na Sinfilina-1 surgiu aquando da sua identificação por Engelender et
al. como uma proteína com capacidade de interagir com a α-Syn in vivo (Engelender
et al., 1999). A interacção entre ambas as proteínas foi confirmada por diversos
estudos subsequentes in vivo e in vitro (Kawamata, Mclean, Sharma, & Hyman, 2001;
Wakabayashi, Engelender, Yoshimoto, Ross, & Takahashi, 2000).
Um estudo realizado por Engelender et al. demonstrou que a Sinfilina-1 interage
com a α-Syn e promove a formação de inclusões citoplasmáticas eosinofílicas
semelhantes aos CL presentes na DP (Engelender et al., 1999). Posteriormente,
Wakabayashi et al. identificou a Sinfilina-1 como componente dos CL em indivíduos
com DP sugerindo, assim, que a Sinfilina-1 pode desempenhar um papel na formação
dos CL e na fisiopatologia da DP através da interacção com a α-Syn (Wakabayashi et
al., 2000).
A Sinfilina-1 é uma proteína codificada pelo gene SNCAIP (SNCA Interacting
Protein) localizado no cromossoma 5q23.1-23.3 (Simone Engelender et al., 2000). É
constituída por 919 aminoácidos e possui uma massa molecular variável de 115-140
kDA até 80-90 kDA (Bandopadhyay et al., 2001; Krüger, 2004), contudo, pode ser
encontrada com massas moleculares inferiores, 50 kDA e 65 kDA, em extractos
cerebrais, sugerindo a ocorrência de mecanismos como splicing alternativo ou
modificações pós-traducionais (Krüger, 2004).
Esta proteína é constituída por diversos domínios proteicos incluindo seis
repetições arkyrin-like, o domínio coiled-coil, o domínio de ligação ATP/GTP
(Bandopadhyay et al., 2001; Beyer, 2006) e uma região altamente conservada de
função desconhecida (aminoácidos 612-689) (T. Takahashi et al., 2006). A cadeia de
aminoácidos da Sinfilina-1 aparenta um elevado estado de conservação. Num estudo
realizado por O’Farrell et al. esta proteína apresentou uma homologia de 86% na
cadeia de aminoácidos relativamente à expressa nos ratinhos, esta homologia aumenta
na região central da proteína que contém as repetições ankyrin-like e o domínio coiled
coil atingindo os 96,5%, sugerindo que estas sequências desempenham um papel
essencial na função da Sinfilina-1 (O’Farrell, Pickford, Vink, McGowan, & Cookson,
2002). Os domínios coiled coil e ankyrin-like estão presentes em diversas proteínas
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
61!
com diferentes funções, contudo, ambos estão relacionados com a interacção proteica
(V. Bennett & Chen, 2001; Burkhard, Stetefeld, & Strelkov, 2001). Desta forma, é
provável que a função da Sinfilina-1 esteja relacionada com a interacção entre
proteínas e a interacção com a α-Syn que, por sua vez, pode estar interligada com a
presença destes domínios (O’Farrell et al., 2002).
A Sinfilina-1 é expressa em diversos tecidos, atingindo níveis mais elevados no
cérebro, coração e placenta (Engelender et al., 1999; Satoh & Kuroda, 2002;
Wakabayashi et al., 2000). Em tecidos não patológicos cerebrais, a Sinfilina-1
apresenta um padrão de distribuição semelhante à α-Syn, sendo expressa com
preponderância a nível dos neurónios, nomeadamente os neurónios Purkinje, nigrais e
piramidais, localizando-se no citoplasma, ocorrendo uma migração gradual para os
terminais pré-sinápticos durante o desenvolvimento (Krüger, 2004; Ribeiro, Carneiro,
Ross, Menezes, & Engelender, 2002; T. Takahashi et al., 2006). Estudos in vitro
comprovaram que a Sinfilina-1 co-imunoprecipita com as vesículas sinápticas,
sugerindo que existe uma associação entre ambas in vivo (Ribeiro et al., 2002).
!
Figura 10 – Visão Esquemática da Sinfilina-1 – Com destaque para os locais de interacção com
diversas proteínas e o elevado estado de conservação entre a Sinfilina-1 humana e a do rato (Adaptado
de Krüger, 2004)
!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 62!
3.2.2 Funções da Sinfilina-1
Assim como ocorre com a α-Syn, as funções da Sinfilina-1 permanecem pouco
claras. Foi demonstrado, in vitro, que a Sinfilina-1 é fosforilada pela glicogénio
sintetase quinase-3-beta (GSK3B) sugerindo que a Sinfilina-1 pode estar envolvida
nos mecanismos de transdução do sinal e/ou degradação proteica, visto que a
fosforilação está envolvida em diversos mecanismos fisiológicos, incluindo os
referidos anteriormente (Tanji et al., 2003).
Deste modo, especulou-se que a fosforilação da Sinfilina-1 poderia desencadear a
ubiquitinação e degradação desta proteína (Tanji et al., 2003). A identificação da
Sinfilina-1 como substrato da Parkina ubiquitina ligase E3 levou a que se estabelece-
se a possibilidade da Sinfilina-1 estar envolvida na função proteassomal (Chung et al.,
2001; Krüger, 2004). Para além disso, foi descoberto que a Sinfilina-1 também é
ubiquitinada e degradada por outras ligases E3: Dorfina, SIAH-1 e SIAH-2. Que por
sua vez estão todas presentes nos CL em cérebros de pacientes com DP estando,
portanto, relacionadas com os mecanismos neurodegenerativos (Ito et al., 2003; Liani
et al., 2004; Nagano et al., 2003).
A relação da Sinfilina-1 com o proteassoma foi comprovada aquando da
descoberta da interacção da Sinfilina-1 com a proteína S6 ATPase, que actua como
uma subunidade reguladora do proteassoma 19S com funções de degradação de
proteínas ubiquinadas, esta interacção reforça a possibilidade da Sinfilina-1 exercer
um papel fisiológico como moduladora do SUP (Krüger, 2004; F. Marx et al., 2007).
Como foi referido anteriormente, os níveis de Sinfilina-1, durante o
desenvolvimento, estão elevados nos terminais pré-sinápticos, havendo uma co-
imunoprecipitação da Sinfilina-1 com as vesículas sinápticas. Deste modo, foi
proposta a possibilidade da Sinfilina-1 exercer funções sinápticas em associação com
a α-Syn, do mesmo modo, o facto da Sinfilina-1 aparentar uma forte interacção com
as vesículas sinápticas sugere que esta possa interferir com o processo de libertação
da dopamina, contudo, o papel exacto da Sinfilina-1 na libertação da dopamina
permanece pouco claro (Büttner et al., 2010; Krüger, 2004; Nagano et al., 2003;
Ribeiro et al., 2002).
A Sinfilina-1 localiza-se preferencialmente em torno de gotículas lipídicas e a sua
sobre-expressão conduz a formação de inclusões membranares (Takahashi et al.,
2006). Posteriormente, foi confirmada a sua localização preferencial em torno de
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
63!
gotículas lipídicas num estudo em que se constatou que a Sinfilina-1 forma inclusões
em células de levedura que aparecem, inicialmente, em focos distintos em
endomembranas e gotículas lipídicas (Büttner et al., 2010). Desta forma, foi
confirmada a localização desta proteína em torno de gotículas lipídicas o que
comprova também a associação da Sinfilina-1 às vesículas sinápticas no cérebro. Foi
corroborado, neste mesmo estudo, que a Sinfilina-1 interage com as jangadas
lipídicas, tanto em dímero como em monómero, sendo que o dímero, no caso de ser
uma proteína mutante, pode voltar a ser reduzido (Büttner et al., 2010).
3.2.3 Envolvimento na doença de Parkinson
A hipótese da Sinfilina-1 estar envolvida na fisiopatologia da DP surgiu após a
descoberta da interacção desta proteína com α-Syn. Comprovou-se que a
co-expressão da Sinfilina-1 e da α-Syn, em culturas celulares, leva à formação de
agregados citoplasmáticos semelhantes aos CL (Engelender et al., 1999). Assim como
acontece com a α-Syn, diversos estudos revelaram que a Sinfilina-1 é uma das
proteínas constituintes dos CL em indivíduos com DP e encontra-se em corpos de
inclusão presentes em diversas doenças pertencentes ao grupo das sinucleinopatias
(Bandopadhyay et al., 2005; Murray et al., 2003; Wakabayashi et al., 2002, 2000).
Por outro lado, a descoberta de uma mutação pontual (R621C) no gene da
Sinfilina-1, em dois pacientes germânicos com DP esporádica, veio comprovar o
envolvimento desta proteína na DP (Marx et al., 2003). Para além disso, a Sinfilina-1
é um substrato da Parkina, uma proteína ubiquitina ligase E3, responsável pelas
manifestações autossómicas recessivas de parkinsonismo juvenil e a co-expressão de
ambas as proteínas leva ao aparecimento de inclusões intracelulares ubiquitinadas
semelhantes aos CL (Chung et al., 2001).
Como já foi mencionado anteriormente, existem diversas evidências de disfunções
do SUP na DP. Para além da função proteassomal se encontrar reduzida na SNpc na
DP esporádica, também foram detectadas mutações relacionadas com a DP familiar,
envolvendo proteínas relacionadas com o SUP como a Parkina e a UCL-L1 (Szargel,
Rott, & Engelender, 2008). Apesar da Sinfilina-1 não estar localizada no SUP, possui
a capacidade de interacção com diversas proteínas relacionadas como o SUP (Beyer
et al., 2009) para além de que é ubiquitinada e degradada por este mesmo sistema
(Szargel et al., 2008). A Sinfilina-1 interage com duas subunidades reguladoras do
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 64!
SUP, S6 ATPase e a NUB1 (Beyer et al., 2009). A interacção com a S6 ATPase não
só diminui a actividade proteassomal, como também a co-expressão destas proteínas,
em simultâneo, leva ao aumento da formação de inclusões intracitoplasmáticas. Tanto
a Sinfilina-1 como a S6 ATPase encontram-se presentes nos CL (Marx et al., 2007).
A proteína NUB1 diminui os níveis de Sinfilina-1 em estado estacionário, o que pode
ser indicativo que esta proteína pode estar envolvida na sinalização da Sinfilina-1 para
posterior degradação pelo proteassoma, porém, o mecanismo exacto pelo qual a
NUB1 acelera o processo de degradação da Sinfilina-1 e a identificação das ubiquinas
ligases E3 envolvidas neste mecanismo permanece por investigar (R Szargel et al.,
2008; Tanji et al., 2006).
A Sinfilina-1 interage e é ubiquitinada por diversas ubiquitinas Ligases E3:
Parkina, Dorfina, SIAH-1 e SIAH-2 (Chung et al., 2001; Ito et al., 2003; Liani et al.,
2004; Nagano et al., 2003). Relativamente à sua interacção com a Parkina, sabe-se
que a co-expressão de ambas leva à formação de inclusões intracelulares
ubiquitinadas que se assemelham aos CL, contudo, a Parkina não leva à degradação
da Sinfilina-1 (Chung et al., 2001; Ross & Pickart, 2004; R Szargel et al., 2008)
Quanto à SIAH-1 e SIAH-2, ambas promovem a degradação da Sinfilina-1 (Liani
et al., 2004). Contudo, a incapacidade do proteassoma de degradar a Sinfilina-1
ubiquitinada pela SIAH promove a formação de inclusões de Sinfilina-1. Tendo em
conta que a ubiquitinação da Sinfilina-1 é essencial para a formação de inclusões, a
forma mutada da Sinfilina-1, inábil de ser ubiquinada pela SIAH, não se agrega em
corpos de inclusão (Liani et al., 2004). Este conjunto de informação, juntamente com
o facto que a Sinfilina-1 isolada dos CL encontrar-se monoubiquitinada, sugerem que
a ubiquinação pode representar um evento primário na formação de inclusões na DP
(Szargel et al., 2008).
A fosforilação é uma modificação pós-traducional com capacidade de modular a
ubiquitinação de diversas proteínas (Hershko & Ciechanover, 1998). Como já foi
mencionado anteriormente, a α-Syn presente nos CL encontra-se não só fosforilada
como também monoubiquitinada sugerindo, não só um envolvimento de ambos os
mecanismos na DP, como também uma possível co-relação entre ambos (Anderson et
al., 2006; M. Hasegawa et al., 2002)
Diversas quinases fosforilam a Sinfinlina-1 in vivo e alteram a sua tendência a
agregar. A caseína quinase II fosforiliza a Sinfilina-1 diminuindo a interacção desta
com a α-Syn e a formação de inclusões. Contudo a ubiquitinação da Sinfilina-1 não
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
65!
sofre alterações (Avraham, Szargel, Eyal, Rott, & Engelender, 2005; G. Lee et al.,
2004). O que implica que a formação de inclusões de Sinfilina-1 possa depender de
outros factores para além da ubiquitinação, como a fosforilação e a interacção com a
α-Syn (Szargel et al., 2008).
Existem diversas evidências indicativas que certas proteínas quinases, como a
GSK3B e a Cdk5, modulam a neurodegeneração de neurónios dopaminérgicos em
modelos farmacológicos da DP (G. Chen et al., 2004; P. D. Smith et al., 2003). Foi
demonstrado que a Sinfilina-1 endógena é fosforilada pela GSK3B levando a uma
diminuição da ubiquitinação da Sinfilina-1 e da formação de inclusões. Ao passo que,
ao inibir a fosforilação da Sinfilina-1 pela GSK3B, ocorre um aumento significativo
de formação de inclusões de Sinfilina-1 (Avraham et al., 2005). Estes resultados
reforçam a hipótese de a ubiquitinação da Sinfilina-1 ser importante para a agregação
desta proteína, contudo, de um modo dependente da fosforilação (Szargel et al.,
2008).
In vivo, a Parkina é fosforilada pela proteína Cdk5, levando a uma diminuição da
autoubiquitinação e da capacidade de ubiquitinar a Sinfilina-1 (Avraham, Rott, Liani,
Szargel, & Engelender, 2007). Por outro lado, a forma mutante da Parkina, S131A, é
mais efectiva na ubiquitinação da Sinfilina-1 e promove uma maior formação de
corpos de inclusão. Confirma-se, deste modo, o envolvimento da Parkina na formação
de inclusões de Sinfilina-1 (Avraham et al., 2005; R Szargel et al., 2008).
Pode-se concluir que a ubiquitinação da Sinfilina-1 é modulada por diversas
proteínas quinases, podendo contribuir fortemente para a formação dos CL na DP (R
Szargel et al., 2008)
Inúmeros estudos evidenciam a ocorrência de elevados níveis de stress oxidativo
na DP, podendo contribuir de forma significativa para a neurodegeneração ocorrente
na DP (Dexter & Jenner, 2013; A. Xie, Yu, & Xu, 2010). Foi realizado um estudo
para observar a influência da Sinfilina-1 na expressão da SOD. A SOD é uma enzima
antioxidante de elevada importância, estudos in vitro e in vivo demonstraram os
efeitos neuroprotectores da SOD e, para além disso, a expressão reduzida de SOD
pode estar envolvida na patogénese da DP (Boll, Alcaraz-Zubeldia, Montes, & Rios,
2008; A. Xie et al., 2010). Os resultados obtidos demonstraram uma elevada
expressão de Sinfilina-1 na SNpc e uma significativa diminuição da expressão de
SOD, o que corrobora estudos realizados previamente (Krygowska-Wajs et al., 2008;
A. Xie et al., 2010). Estes resultados são indicativos que a Sinfilina-1 pode influenciar
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 66!
a patogénese da DP através da diminuição dos níveis de SOD que, consequentemente,
leva a um aumento de ROS e dos níveis de stress oxidativo (A. Xie et al., 2010).
Um estudo realizado por Li et al., demonstrou que a superexpressão da Sinfilina-1
diminuiu o tempo de duplicação celular e aumentou o desenvolvimento de neuritos e,
também, diminuiu significativamente a morte celular induzida pela rotenona. Estes
resultados, indicam que a Sinfilina-1 apresenta efeitos neurotrófico, in vitro, e que
pode desempenhar um papel protector na fisiopatologia da DP (X. Li et al., 2010).
Sinfilina R621C
A mutação no gene da Sinfilina-1 foi identificada pela primeira vez em dois
pacientes germânicos com DP esporádica e, aparentemente, não relacionados. Foi
decifrada uma transição de Citosina para uma Tirosina na posição 1861 na sequência
codificante, levando a uma substituição de uma Arginina por uma Cisteina na posição
621 da cadeia de aminoácidos (Marx et al., 2003).
Ao ser analisada, a mutação R621C revelou diminuir a viabilidade das células em
comparação com a Sinfilina-1 WT, apresentando uma maior susceptibilidade a
estímulos apoptóticos e ao stress oxidativo (X. Li et al., 2010; F. P. Marx et al., 2003).
Num estudo realizado por Krenz et al. em ratinhos, ambas as formas mutadas e WT
levaram à formação de inclusões e à degeneração de neurónios dopaminérgicos na
SNpc , contudo, a Sinfilina R621C induziu uma maior formação de agregados do que
a WT em ratinhos transgénicos A30P α-Syn, o que é consistente com o facto da
mutação R621C ser um factor de susceptibilidade para a DP (Krenz, Falkenburger,
Gerhardt, Drinkut, & Schulz, 2009).
Sinfilina-1A
A Sinfilina-1A é uma isoforma da Sinfilina-1 resultante do splicing alternativo,
esta variante tem um codão inicial diferente da Sinfilina-1, não apresentando os
primeiros 394 aminoácidos do codão inicial da Sinfilina-1 e contém 28 aminoácidos
adicionais na região N-terminal e 51 aminoácidos adicionais na região C-terminal
(Szargel et al., 2008).
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Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
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Figura 11 - Representação Esquemática da Sinfilina-1 e da Sinfilina-1A (Adaptado de R Szargel et
al., 2008)
A Sinfilina-1A apresenta elevada toxicidade celular e encontra-se presente nos CL
na DP. Esta proteína mostra uma propensão para agregar espontaneamente nas células
dopaminérgicas humanas, e tem a capacidade de agregação sem que haja inibição da
actividade proteassomal, ao passo que a Sinfilina-1 apenas forma agregados quando
há inibição do sistema proteassomal (Eyal & Engelender, 2006; Eyal et al., 2006).
Esta proteína interage tanto com a Sinfilina-1 como com a α-Syn, tendo a
capacidade de recrutar ambas as proteínas para dentro de corpos de inclusão (Szargel
et al., 2008). A capacidade da Sinfilina-1A de recrutar a α-Syn e a acumular dentro de
inclusões sugere um função neuroprotectora dos corpos de inclusão contra a
toxicidade da Sinflina-1A (Szargel et al., 2008). A percentagem exacta de Sinfilina-
1A nos CL não é conhecida, contudo, o facto de interagir tanto com a Sinfilina-1
como com a α-Syn sugere que esta proteína possa estar envolvida na formação dos
CL (Eyal & Engelender, 2006; Szargel et al., 2008). Para além disso, devido à sua
neurotoxicidade intrínseca, mudanças na força de interacção entre a Sinfilina-1A e a
α-Syn podem não só influenciar a formação de CL como também a morte de
neurónios dopaminérgicos (Beyer et al., 2009; Eyal et al., 2006).
A Sinfilina-1A actua, também, como reguladora da SIAH, diminuindo a actividade
da ubiquitina ligase E3 SIAH. Esta proteína também diminui a monoubiquitinação da
α-Syn promovida pela SIAH assim como a formação de inclusões de α-Syn. Por outro
lado, a SIAH ubiquitina a Sinfilina-1A e aumenta a formação de inclusões mas não
promove a sua degradação. Estes dados sugerem que a Sinfilina-1A tem a capacidade
de regular a actividade da SIAH, com implicações na regulação da
monoubiquitinação e agregação da α-Syn (Szargel et al., 2009).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 68!
3.3 Interacção da alfa-Sinucleína com a Sinfilina-1
Como mencionado anteriormente, a α-Syn interage, in vivo, com a Sinfilina-1
(Engelender et al., 1999). Já foi relatado que diversas porções da Sinfilina-1
interagem com a α-Syn, contudo, o local exacto em que as proteínas interagem entre
si e efeito que esta interacção desempenha na formação dos CL permanece
controverso (Xie et al., 2010). Se por um lado existem estudos onde é referido que a
interacção entre ambas as proteínas apenas envolve a região N-terminal da α-Syn e a
região central da Sinfilina-1 (Engelender et al., 1999; Neystat, Rzhetskaya,
Kholodilov, & Burke, 2002). Por outro lado, estudos realizados através de métodos
diferentes referem que a região C-terminal da α-Syn e a região N ou C-terminal da
Sinfilina-1 estão envolvidas na interacção entre as proteínas (Kawamata et al., 2001;
Ribeiro et al., 2002).
No entanto, o modelo mais aceite actualmente foi proposto por Xie et al.. Este
modelo sugere que a interacção entre ambas a proteínas ocorre através do domínio
central coiled-coil da Sinfilina-1 e a região N-terminal da α-Syn (Xie et al., 2010)
Este modelo, representado na figura 11, propõe que a Sinfilina-1 forma um dímero
anti-paralelo através do domínio central coiled coil, apresentando duas interfaces
opostas do mesmo domínio coiled coil para a ligação à α-Syn. Deste modo, duas
moléculas de α-Syn ligam-se através da região N-terminal às hélices coiled coil da
Sinfilina-1 (Xie et al., 2010). A região N-terminal da α-Syn, parece ser beneficiada ao
ligar-se aos domínios coiled coil, tornando-se mais compacta e estruturada. Esta
Figura 12 - Representação Esquemática da Interacção entre a α-Syn e a Sinfilina-1 (Adaptado de
Xie et al., 2010)
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
69!
interacção pode permitir à Sinfilina-1 um recrutamento eficaz da α-Syn e, deste modo,
estimular a acumulação desta proteína nas células (Xie et al., 2010)
A interacção entre ambas as proteínas pode ter um impacto elevado na agregação e
formação de inclusões celulares. A sobre-expressão de Sinfilina-1 leva à formação de
inclusões citoplasmáticas, ao passo que a sobre-expressão da α-Syn WT, por si só,
não é suficiente para a formação destas inclusões (Hasegawa et al., 2004; Ito et al.,
2003; O’Farrell et al., 2002; Xie et al., 2010)
Um estudo realizado pro Hernández-Vargas et al., demonstrou que quando a
Sinfilina-1 e a α-Syn são expressas de modo independente em neurónios
dopaminérgicos, é observado um aumento de toxicidade destas proteínas. Contudo, a
co-expressão de ambas reverte os fenótipos, estes dados sugerem que um
desequilíbrio na concentração de ambas as proteínas é altamente prejudicial para os
neurónios dopaminérgicos (Hernández-Vargas et al., 2011).
Em resumo, a interacção específica entre ambas as proteínas promove
significativamente a formação e acumulação de inclusões citoplasmáticas, que muito
provavelmente incluem α-Syn na sua composição. A investigação da interacção entre
a Sinfilina-1 e a α-Syn permite adquirir um maior conhecimento sobre o mecanismo
de formação destas inclusões nas células e a sobre o seu impacto na DP e outras
doenças neurodegenerativas (Xie et al., 2010).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 70!
3.4 Agregação proteica e a formação de corpos de inclusão : Toxicidade
ou Neuroprotecção?
Em diversas doenças neurodegenerativas, incluindo a DP, ocorrem interacções
proteicas não comuns no SNC e em todas estas doenças, estão presentes depósitos de
agregados proteicos no cérebro dos pacientes. A agregação proteica pode dever-se a
diversos factores, como mutações, ou pode não estar relacionado com mecanismos
genéticos e ser desencadeado por factores ambientais ou pelo envelhecimento (Ross
& Margolis, 2005).
Apesar dos corpos de inclusão serem características patológicas das doenças
neurodegenerativas, existe uma elevada controvérsia em relação ao papel que a
agregação proteica desempenha no desenvolvimento da doença. As conformações
anormais das proteínas e a agregação são características comuns destas doenças, e
existem diversas linhas de evidência que relacionam a agregação com a toxicidade
celular (Ross & Poirier, 2005). Contudo, ainda não foram identificados os factores
que promovem a formação dos CL nem a sua função na fisiopatologia da DP, não
sendo claro se promovem ou inibem a toxicidade celular (Beyer et al., 2009).
Se por um lado os corpos de inclusão aparentam ser prejudiciais para as células na
medida em que o número de CL está relacionado com a severidade dos sintomas
clínicos na demência com CL (Tanaka et al., 2004) por outro lado, podem estar
relacionados com mecanismos protectores através do sequestro de espécies tóxicas,
considerando que os neurónios com CL em cérebros afectados aparentam estar mais
saudáveis que os neurónios vizinhos (Tompkins & Hill, 1997). Para além disso,
estudos post-mortem em idosos assintomáticos apresentaram muitas vezes CL
(Tanaka et al., 2004). Adicionalmente, apesar das doenças que envolvem a presença
de CL apresentarem uma vasta perda dos neurónios dopaminérgicos, uma elevada
percentagem de neurónios sobreviventes possuem inclusões intracelulares sob a forma
de CL, indicando que estas inclusões tem um efeito protector para a célula em relação
as proteínas misfolded ou disfuncionais (Beyer et al., 2009). Apesar da realização de
diversas pesquisas, a presença de corpos de inclusão relaciona-se fracamente com
outros marcadores de neurodegeneração. Incluindo na DP, em que existe uma baixa
correlação entre a presença dos CL e a neurodegeneração na SNpc (Tompkins & Hill,
1997).
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
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Como já foi mencionado anteriormente, a Sinfilina-1A possui a capacidade de se
agregar numa larga percentagem de células sem que haja inibição proteassomal,
apresentando uma elevada toxicidade celular (Eyal et al., 2006). A sobre-expressão da
Sinfilina-1A provoca uma diminuição dos processos neuronais e aumenta a morte
celular. Para além disso a Sinfilina-1A forma agregados e acumula-se, contudo, a
formação de corpos de inclusão só ocorre quando existe inibição proteassomal, o que
sugere que a acumulação de proteínas ubiquitinadas é necessária para a agregação da
Sinflina-1A em corpos de inclusão. Para além disso, os neurónios que contém corpos
de inclusão de Sinfilina-1A exibem uma redução da morte celular e uma diminuição
dos processos neuronais, indicando que a formação deste corpos de inclusão tem um
efeito protector contra a toxicidade da Sinfilina-1A (Eyal & Engelender, 2006).
Considerando que as inclusões de Sinfilina-1A recrutam a Sinfilina-1, a formação
das inclusões semelhantes aos CL pode envolver a interacção de ambas as proteínas,
possivelmente mediada pelos domínios arkyrin-like de ambas (Eyal et al., 2006). Para
além disso, o facto da Sinflina-1A também interagir com a α-Syn, e ter a capacidade
de a recrutar para dentro dos corpos de inclusão nos neurónios, indica que o modelo
de agregação da Sinflina-1A pode ser relevante no estudo da DP (Eyal & Engelender,
2006).
A Sinfilina-1 aumenta fortemente a toxicidade da α-Syn em culturas celulares
(Szargel et al., 2008). É de interesse realçar que células que apresentam corpos de
inclusão de Sinfilina-1 e α-Syn são relativamente poupadas, implicando que as
inclusões tem um papel citoprotectivo (Tanaka et al., 2004). Concordantes com esta
hipótese, diversos estudos sugerem que as inclusões de α-Syn, formadas por uma
sobre-expressão de Sinfilina-1, representam agregossomas que podem ser eliminados
da célula por autofagia, sendo assim considerados citoprotectivos (Büttner et al.,
2010; Ralph et al., 2005; W. W. Smith et al., 2010; Zaarur, Meriin, Gabai, &
Sherman, 2008).
Por outro lado, as inclusões formadas principalmente por α-Syn monoubiquitinada
são tóxicas para a célula, o que pode estar relacionado com a natureza amorfa dos
agregados de α-Syn monoubiquitinada (Rott et al., 2008). De facto, acredita-se que as
formas olígomericas ou protofibrilares são as espécies tóxicas de α-Syn (Caughey &
Lansbury, 2003). Nos CL os agregados proteicos amorfos localizam-se no centro
enquanto que as fibrilas se encontram na periferia, o que sugere fortemente que os CL
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
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podem apresentar toxicidade para as células nos seus estágios iniciais de formação
(Baba et al., 1998; Simone Engelender, 2008).
É interessante a possibilidade de, apesar das inclusões que contém principalmente
α-Syn monoubiquitinada serem tóxicas para a célula, a co-agragação com outras
proteínas relacionadas com a DP, como as isoformas da Sinfilina-1A, poderem
contrariar esta toxicidade. Deste modo, é possível que os CL tenham a capacidade de
promover tanto a neurotoxicidade como ter um efeito protector, consoante a sua fase
de maturação (Simone Engelender, 2008)
!Figura 13 - Representação Esquemática da Formação de Corpos de Inclusão em Modelos
Celulares da DP. (Adaptado de Engelender, 2008)
Desta forma, as inclusões citoplasmáticas podem estar relacionadas com um
processo activo de protecção contra as proteínas misfolding ao isola-las. Podendo a
sua formação não resultar apenas da acumulação de proteínas misfolding, e dever-se a
uma medida defensiva de forma a remover espécies tóxicas (Dauer & Przedborski,
2003; Ross & Pickart, 2004; R Szargel et al., 2008)
Devido à tendência de agregação das proteínas e as consequências referidas
anteriormente, as células exibem diversos mecanismos protectores contra as proteínas
misfolding. A primeira linha de defesa é efetuada pelos chaperonas moleculares.
Outro mecanismo envolve, como já mencionado diversas vezes anteriormente, a
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson
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degradação pelo proteassoma (Berke & Paulson, 2003; Ross & Pickart, 2004). O facto
de haver diversas mutações, na DP familiar, em proteínas que se encontram
fortemente relacionadas com o SUP, sublinha a relevância deste na DP (Rogers,
Paine, Bedford, & Layfield, 2010; Ross & Poirier, 2005). Por fim, existe o
mecanismo de defesa que envolve a autofagia, no qual diversas proteínas
citoplasmáticas são degradadas por via do lisossoma. A autofagia mediada por
chaperonas pode ser activada pelo stress oxidativo e está envolvida na degradação da
α-Syn (Cuervo, Stefanis, Fredenburg, Lansbury, & Sulzer, 2004).
Por fim, existe uma ultima linha de defesa, em que a célula pode sequestrar
agregados através do transporte mediado pelos microtúbulos e recolhe-los num único
local citoplasmático perto do centríolo (Johnston, Ward, & Kopito, 1998; Ross &
Poirier, 2005). Este processo leva à formação de corpos de inclusão que apresentam
elevada similaridade com os CL (Iwata et al., 2005; Johnston et al., 1998; C. W.
Olanow, Perl, Demartino, & Mcnaught, 2004). Para além disso, os CL contém y-
tubilina e pericentrina, marcadores do centrossoma, enzimas activadoras da
ubiquitina, activadores do proteassoma, assim como, marcadores da autofagia
apresentando, também, elementos do citoesqueleto. Considerando a sua composição,
os CL representam muito provavelmente o produto final de um processo celular
activo (Ross & Poirier, 2005).
Relativamente aos mecanismos de toxicidade, já foram propostas diversas
hipóteses como a inibição do proteassoma pelas proteínas misfolding.
Interessantemente, forma mutante da α-Syn provoca a inibição do proteassoma. Este
facto é de especial interesse, pois uma exposição sistemática a inibidores do
proteassoma provocou uma síndrome com características semelhantes à DP em ratos,
acompanhado de perda de neurónios dopaminérgicos na SNpc, diminuição dos
terminais de dopamina no estriado e uma disfunção progressiva do movimento com
resposta à terapêutica com agonistas da dopamina (McNaught, Perl, Brownell, &
Olanow, 2004). Uma outra possibilidade recai sobre alterações na autofagia
provocada por proteínas alteradas, como é o caso da forma mutante da α-Syn que
prejudica a autofagia mediada por chaperonas (Massey, Kiffin, & Cuervo, 2004). Por
outro lado, uma hipótese mais generalista para a relação entre a toxicidade e a
agregação incide sobre a possibilidade de que a toxidade possa depender de
interacções ou recrutamento de outros componentes celulares durante o processo de
agregação podendo desta forma, nenhuma espécie ser tóxica por si própria mas que o
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
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seu ganho de toxicidade se deva ao processo activo de agregação e a interacções com
outras proteínas (Ross & Poirier, 2005).
Assim, analisando as evidências, surge a forte indicação que a formação de corpos
de inclusão pode ser uma resposta protectora da célula contra proteínas misfolding.
Ross et al., sugerem que o processo de agregação por si próprio está provavelmente
relacionado com a toxicidade e que podem existir mecanismos de toxicidade comuns
entre as doenças que apresentam agregação de proteínas e corpos de inclusão (Ross &
Poirier, 2005).
Considerações Finais
75!
4. Considerações Finais
Neste trabalho foram discutido os aspectos gerais da DP, com enfâse nos
mecanismos moleculares envolvendo a α-Syn e a Sinflina-1. A DP afecta 1% da
população com idades superiores a 60 anos, contudo, permanece incurável e a
terapêutica disponível é apenas sintomática não evitando a neurodegeneração nem a
progressão da DP. É, deste modo, crucial aprofundar os conhecimentos sobre a
patogénese da doença e os mecanismos envolvidos de forma a permitir o
desenvolvimento de uma terapêutica capaz de impedir ou abrandar o processo de
neurodegeneração na DP.
A descoberta de mutações no gene SNCA associados à DP familiar levaram à
realização de numerosos estudos com o intuito de esclarecer as funções da α-Syn,
assim como o seu envolvimento na DP. Contudo, estes ainda permanecem por
elucidar. O conhecimento detalhado das funções da α-Syn e o seu papel na DP é de
extrema importância pois pode conduzir a novas estratégias terapêuticas. Estudos
sugerem que o processo de agregação da α-Syn está associado à toxicidade desta.
Contudo, diversas evidências apontam as formas oligoméricas desta proteína como a
espécie tóxica, porém ainda não foi comprovado. Perceber qual a espécie tóxica
envolvida na formação de fibras é de grande importância para possibilitar o
desenvolvimento de estratégias de intervenção e, desta forma, interferir com o
processo de agregação e reduzir a toxicidade desta proteína. Por outro lado, outra
linha de intervenção pode estar relacionada com o envolvimento da alfa-Sinucleína
extracelular na progressão da DP, o desenvolvimento de uma estratégia terapêutica
com capacidade de interferir com este processo poderia abrandar ou até mesmo parar
a disseminação da DP.
Também as funções exactas da Sinfilina-1 e o seu envolvimento concreto na
fisiopatologia da DP permanecem pouco claras. É de elevado interesse aprofundar os
conhecimentos sobre esta proteína devido ao seu envolvimento no SUP e nas funções
sinápticas. Também a identificação da mutação R621C no gene da Sinfilina-1, em
casos de DP familiar, evidência a relevância desta proteína na DP. Esta proteína não
só esta presente nos CL, como também interage com α-Syn e está envolvida nos
processos de agregação. Isto suporta o facto desta proteína estar implicada na
neurodegeneração. Parece ser necessário a comunidade científica realizar mais
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 76!
estudos nesta área de forma a encontrar um novo alvo terapêutico e desenvolver
novas estratégias terapêuticas.
Conclui-se que é de extrema importância a realização de mais estudos sobre ambas
as proteínas e também sobre a sua interacção, assim como aprofundar o conhecimento
sobre o papel exacto que ambas desempenham na DP, assim como qual o mecanismo
exacto pelo qual estas proteínas provocam toxicidade celular de forma a intervir no
processo de degeneração característico da DP.
Referências Bibliográficas
77!
5. Referências Bibliográficas
Abeliovich,!A.,!Schmitz,!Y.,!Fariñas,!I.,!ChoiTLundberg,!D.,!Ho,!W.!H.,!Castillo,!P.!E.,!…! Rosenthal,! A.! (2000).! Mice! lacking! alphaTsynuclein! display! functional!deficits!in!the!nigrostriatal!dopamine!system.!Neuron,!25(1),!239–52.!!
AlvarezTErviti,!L.,!Couch,!Y.,!Richardson,!J.,!Cooper,!J.!M.,!&!Wood,!M.!J.!a.!(2011).!AlphaTsynuclein!release!by!neurons!activates!the!inflammatory!response!in!a!microglial!cell!line.!Neuroscience1Research,!69(4),!337–42.!!
Anderson,!J.!P.,!Walker,!D.!E.,!Goldstein,!J.!M.,!de!Laat,!R.,!Banducci,!K.,!Caccavello,!R.! J.,! …! Chilcote,! T.! J.! (2006).! Phosphorylation! of! SerT129! is! the! dominant!pathological!modification!of!alphaTsynuclein! in! familial! and!sporadic!Lewy!body!disease.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!281(40),!29739–52.!!
AppelTCresswell,!S.,!VilarinoTGuell,!C.,!Encarnacion,!M.,!Sherman,!H.,!Yu,! I.,!Shah,!B.,! …! Farrer,! M.! J.! (2013).! AlphaTsynuclein! p.H50Q,! a! novel! pathogenic!mutation!for!Parkinson’s!disease.!Movement1Disorders :1Official1Journal1of1the1Movement1Disorder1Society,!28(6),!811–3.!!
Ariga,!H.,!TakahashiTNiki,!K.,!Kato,! I.,!Maita,!H.,!Niki,!T.,!&! IguchiTAriga,! S.!M.!M.!(2013).! Neuroprotective! function! of! DJT1! in! Parkinson’s! disease.!Oxidative1Medicine1and1Cellular1Longevity,!2013.!!
Auluck,!P.!K.,!&!Bonini,!N.!M.! (2002).! Pharmacological! prevention!of!Parkinson!disease!in!Drosophila.!Nature1Medicine,!8(11),!1185–6.!!
Auluck,! P.! K.,! Caraveo,! G.,! &! Lindquist,! S.! (2010).! αTSynuclein:! membrane!interactions! and! toxicity! in! Parkinson’s! disease.!Annual1Review1of1Cell1 and1Developmental1Biology,!26,!211–33.!!
Auluck,!P.!K.,!Chan,!H.!Y.!E.,!Trojanowski,!J.!Q.,!Lee,!V.!M.!Y.,!&!Bonini,!N.!M.!(2002).!Chaperone! suppression! of! alphaTsynuclein! toxicity! in! a! Drosophila! model!for!Parkinson’s!disease.!Science1(New1York,1N.Y.),!295(5556),!865–8.!!
Avraham,! E.,! Rott,! R.,! Liani,! E.,! Szargel,! R.,! &! Engelender,! S.! (2007).!Phosphorylation! of! Parkin! by! the! cyclinTdependent! kinase! 5! at! the! linker!region!modulates!its!ubiquitinTligase!activity!and!aggregation.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!282(17),!12842–50.!!
Avraham,! E.,! Szargel,! R.,! Eyal,! A.,! Rott,! R.,! &! Engelender,! S.! (2005).! Glycogen!synthase! kinase! 3beta! modulates! synphilinT1! ubiquitylation! and! cellular!inclusion! formation! by! SIAH:! implications! for! proteasomal! function! and!Lewy!body!formation.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!280(52),!42877–86.!
Baba,!M.,!Nakajo,!S.,!Tu,!P.,!Lee,!V.!M.,!Trojanowski,! J.!Q.,!&! Iwatsubo,!T.! (1998).!Aggregation!of!aTSynuclein!in!Lewy!Bodies!of!Sporadic!Parkinson’s!Disease!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 78!
and!Dementia!with!Lewy!Bodie.!American1Journal1of1Pathology,!152(4),!879–884.!
Baker,!W.!L.,!Silver,!D.,!White,!C.!M.,!Kluger,!J.,!Aberle,!J.,!Patel,!A.!a,!&!Coleman,!C.!I.!(2009).!Dopamine!agonists!in!the!treatment!of!early!Parkinson’s!disease:!a!metaTanalysis.!Parkinsonism1&1Related1Disorders,!15(4),!287–94.!!
Bandopadhyay,!R.,!de!Silva,!R.,!Khan,!N.,!Graham,!E.,!Vaughan,!J.,!Engelender,!S.,!…!Lees,! A.! (2001).! No! pathogenic! mutations! in! the! synphilinT1! gene! in!Parkinson’s!disease.!Neuroscience1Letters,!307(2),!125–127.!!
Bandopadhyay,!R.,!Kingsbury,!A.!E.,!Muqit,!M.!M.,!Harvey,!K.,!Reid,!A.!R.,!Kilford,!L.,!…! Lees,! A.! J.! (2005).! SynphilinT1! and! parkin! show! overlapping! expression!patterns! in!human!brain!and!form!aggresomes!in!response!to!proteasomal!inhibition.!Neurobiology1of1Disease,!20(2),!401–11.!!
Bartels,! A.! L.,!&! Leenders,! K.! L.! (2009).! Parkinson’s! disease:! the! syndrome,! the!pathogenesis!and!pathophysiology.!Cortex,!45(8),!915–21.!!
Bekris,! L.! M.,! Mata,! I.! F.,! &! Zabetian,! C.! P.! (2010).! The! genetics! of! Parkinson!disease.!Journal1of1Geriatric1Psychiatry1and1Neurology,!23(4),!228–42.!!
Belin,!A.!C.,!&!Westerlund,!M.!(2008).!Parkinson’s!disease:!a!genetic!perspective.!The1FEBS1Journal,!275(7),!1377–83.!!
Bellani,! S.,! Sousa,! V.! L.,! Ronzitti,! G.,! Valtorta,! F.,! Meldolesi,! J.,! &! Chieregatti,! E.!(2010).! The! regulation! of! synaptic! function! by! alphaTsynuclein.!Communicative1&1Integrative1Biology,!3(2),!106–9.!!
Bellucci,!A.,!Navarria,!L.,!Zaltieri,!M.,!Missale,!C.,!&!Spano,!P.!(2012).!αTSynuclein!synaptic! pathology! and! its! implications! in! the! development! of! novel!therapeutic! approaches! to! cure! Parkinson’s! disease.!Brain1Research,!1432,!95–113.!!
Bellucci,!A.,!Zaltieri,!M.,!Navarria,!L.,!Grigoletto,!J.,!Missale,!C.,!&!Spano,!P.!(2012).!From! αTsynuclein! to! synaptic! dysfunctions:! new! insights! into! the!pathophysiology!of!Parkinson’s!disease.!Brain1Research,!1476(11),!183–202.!!
Bendor,! J.!T.,!Logan,!T.!P.,!&!Edwards,!R.!H.!(2013).!The!function!of!αTsynuclein.!Neuron,!79(6),!1044–66.!!
Bennett,!M.!C.!(2005).!The!role!of!alphaTsynuclein!in!neurodegenerative!diseases.!Pharmacology1&1Therapeutics,!105(3),!311–31.!!
Bennett,! V.,! &! Chen,! L.! (2001).! Ankyrins! and! cellular! targeting! of! diverse!membrane! proteins! to! physiological! sites.! Current1 Opinion1 in1 Cell1 Biology,!13(1),!61–7.!!
Referências Bibliográficas
79!
Berke,! S.! J.! S.,! &! Paulson,! H.! L.! (2003).! Protein! aggregation! and! the! ubiquitin!proteasome! pathway:! gaining! the! UPPer! hand! on! neurodegeneration.!Current1Opinion1in1Genetics1&1Development,!13(3),!253–261.!!
Berry,!C.,!La!Vecchia,!C.,!&!Nicotera,!P.!(2010).!Paraquat!and!Parkinson’s!disease.!Cell1Death1and1Differentiation,!17(7),!1115–25.!!
Betarbet,! R.,! &! Sherer,! T.! (2000).! Chronic! systemic! pesticide! exposure!reproduces! features! of! Parkinson’s! disease.! Nature1 …,! 3(12beta),! 1301–1306.!!
Betarbet,! R.,! Sherer,! T.! B.,! &! Greenamyre,! J.! T.! (2005).! UbiquitinTproteasome!system!and!Parkinson’s!diseases.!Experimental1Neurology,!1911Suppl1,!S17–!
Beyer,!K.! (2006).!AlphaTsynuclein! structure,! posttranslational!modification! and!alternative! splicing! as! aggregation! enhancers.! Acta1 Neuropathologica,!112(3),!237–51.!!
Beyer,! K.,! DomingoTSàbat,!M.,! &!Ariza,! A.! (2009).!Molecular! pathology! of! Lewy!body!diseases.!International1Journal1of1Molecular1Sciences,!10(3),!724–45.!!
Bisaglia,!M.,!Mammi,!S.,!&!Bubacco,!L.!(2009).!Structural!insights!on!physiological!functions!and!pathological!effects!of!alphaTsynuclein.!FASEB1Journal :1Official1Publication1of1the1Federation1of1American1Societies1for1Experimental1Biology,!23(2),!329–40.!!
Boll,! M.TC.,! AlcarazTZubeldia,! M.,! Montes,! S.,! &! Rios,! C.! (2008).! Free! copper,!ferroxidase!and!SOD1!activities,!lipid!peroxidation!and!NO(x)!content!in!the!CSF.! A! different! marker! profile! in! four! neurodegenerative! diseases.!Neurochemical1Research,!33(9),!1717–23.!!
Bonifati,!V.! (2007).!Genetics!of!parkinsonism.!Parkinsonism1&1Related1Disorders,!131Suppl13,!S233–41.!doi:10.1016/S1353T8020(08)70008T7!
Bonifati,!V.,!Rizzu,!P.,!van!Baren,!M.! J.,!Schaap,!O.,!Breedveld,!G.! J.,!Krieger,!E.,!…!Heutink,! P.! (2003).!Mutations! in! the!DJT1! gene! associated!with! autosomal!recessive! earlyTonset! parkinsonism.! Science1 (New1 York,1 N.Y.),! 299(5604),!256–9.!!
Bonuccelli,! U.,! Del! Dotto,! P.,! &! Rascol,! O.! (2009).! Role! of! dopamine! receptor!agonists! in! the! treatment! of! early! Parkinson’s! disease.! Parkinsonism1 &1Related1Disorders,!151Suppl14,!S44–53.!!
Braak,!H.,!Ghebremedhin,!E.,!Rüb,!U.,!Bratzke,!H.,!&!Del!Tredici,!K.!(2004).!Stages!in!the!development!of!Parkinson’s!diseaseTrelated!pathology.!Cell1and1Tissue1Research,!318(1),!121–34.!
Breydo,! L.,!Wu,! J.!W.,! &! Uversky,! V.! N.! (2012).! ΑlphaTsynuclein!misfolding! and!Parkinson’s!disease.!Biochimica1et1Biophysica1Acta,!1822(2),!261–85.!!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 80!
Brichta,!L.,!Greengard,!P.,!&!Flajolet,!M.!(2013).!Advances!in!the!pharmacological!treatment! of! Parkinson’s! disease:! targeting! neurotransmitter! systems.!Trends1in1Neurosciences,!36(9),!543–54.!!
Brooks,!D.!J.!(2010).!Imaging!approaches!to!Parkinson!disease.!Journal1of1Nuclear1Medicine :1Official1Publication,1Society1of1Nuclear1Medicine,!51(4),!596–609.!!
Brown,!D.!R.!(2010).!Oligomeric!alphaTsynuclein!and! its!role! in!neuronal!death.!IUBMB1Life,!62(5),!334–9.!!
Buneeva,! O.! a.,! &! Medvedev,! a.! E.! (2011).! Mitochondrial! dysfunction! in!Parkinson’s!disease.!Biochemistry1(Moscow)1Supplement1Series1B:1Biomedical1Chemistry,!5(4),!313–336.!
Burkhard,!P.,!Stetefeld,!J.,!&!Strelkov,!S.!V.!(2001).!Coiled!coils:!a!highly!versatile!protein!folding!motif.!Trends1in1Cell1Biology,!11(2),!82–8.!!
Burré,! J.,!Sharma,!M.,!Tsetsenis,!T.,!Buchman,!V.,!Etherton,!M.!R.,!&!Südhof,!T.!C.!(2010).!AlphaTsynuclein!promotes!SNARETcomplex!assembly!in!vivo!and!in!vitro.!Science1(New1York,1N.Y.),!329(5999),!1663–7.!!
Büttner,! S.,! Delay,! C.,! Franssens,! V.,! Bammens,! T.,! Ruli,! D.,! Zaunschirm,! S.,! …!Winderickx,! J.! (2010).! SynphilinT1! enhances! αTsynuclein! aggregation! in!yeast! and!contributes! to! cellular! stress!and!cell!death! in!a!Sir2Tdependent!manner.!PloS1One,!5(10),!e13700.!!
Cabin,!D.!E.,!Shimazu,!K.,!Murphy,!D.,!Cole,!N.!B.,!Gottschalk,!W.,!Mcilwain,!K.!L.,!…!Nussbaum,! R.! L.! (2002).! Synaptic! Vesicle! Depletion! Correlates! with!Attenuated!Synaptic!Responses!to!Prolonged!Repetitive!Stimulation!in!Mice!Lacking!AlphaTSynuclein.!The1Journal1of1Neuroscience,!22(20),!8797–8807.!
Caughey,! B.,! &! Lansbury,! P.! T.! (2003).! Protofibrils,! pores,! fibrils,! and!neurodegeneration:!separating!the!responsible!protein!aggregates!from!the!innocent!bystanders.!Annual1Review1of1Neuroscience,!26,!267–98.!!
Chadchankar,!H.,!Ihalainen,!J.,!Tanila,!H.,!&!Yavich,!L.!(2011).!Decreased!reuptake!of! dopamine! in! the! dorsal! striatum! in! the! absence! of! αTsynuclein.! Brain1Research,!1382,!37–44.!!
Chan,!N.!C.,!Salazar,!A.!M.,!Pham,!A.!H.,!Sweredoski,!M.!J.,!Kolawa,!N.!J.,!Graham,!R.!L.! J.,! …! Chan,! D.! C.! (2011).! Broad! activation! of! the! ubiquitinTproteasome!system!by!Parkin!is!critical!for!mitophagy.!Human1Molecular1Genetics,!20(9),!1726–37.!!
Chen,!G.,!Bower,!K.,!Ma,!C.,!Fang,!S.,!Thiele,!C.,!&!Luo,!J.!(2004).!Glycogen!synthase!kinase! 3β! (GSK3β)!mediates! 6ThydroxydopamineTinduced! neuronal! death.!The1FASEB1Journal,!18,!1162–1164.!!
Referências Bibliográficas
81!
Chen,! J.! J.,!&! Swope,!D.!M.! (2005).! Clinical! pharmacology! of! rasagiline:! a! novel,!secondTgeneration!propargylamine! for! the! treatment!of!Parkinson!disease.!Journal1of1Clinical1Pharmacology,!45(8),!878–94.!!
Chen,! J.,! &! Swope,! D.! (2007).! Pharmacotherapy! for! Parkinson’s! disease.!Pharmacotherapy:1The1Journal1of1Human1…,!27(12),!161S–173S.!!
Chen,! L.,! &! Feany,! M.! B.! (2005).! AlphaTsynuclein! phosphorylation! controls!neurotoxicity! and! inclusion! formation! in! a!Drosophila!model! of! Parkinson!disease.!Nature1Neuroscience,!8(5),!657–63.!!
Chen,!R.,!Furman,!C.,!&!Gnegy,!M.!(2010).!Dopamine!transporter!trafficking:!rapid!response!on!demand.!Future1Neurology,!5(1),!1–18.!!
Chinta,!S.! J.,!Lieu,!C.!a,!Demaria,!M.,!Laberge,!R.TM.,!Campisi,! J.,!&!Andersen,! J.!K.!(2013).! Environmental! stress,! ageing! and! glial! cell! senescence:! a! novel!mechanistic!link!to!Parkinson’s!disease?!Journal1of1Internal1Medicine,!273(5),!429–36.!!
Choi,!W.,!Zibaee,!S.,!Jakes,!R.,!Serpell,!L.!C.,!Davletov,!B.,!Crowther,!R.!A.,!&!Goedert,!M.! (2004).! Mutation! E46K! increases! phospholipid! binding! and! assembly!into!filaments!of!human!alphaTsynuclein.!FEBS1Letters,!576(3),!363–8.!!
Chua,! C.! E.! L.,! &! Tang,! B.! L.! (2011).! Rabs,! SNAREs! and! αTsynucleinTmembrane!trafficking! defects! in! synucleinopathies.! Brain1 Research1 Reviews,! 67(1T2),!268–81.!!
Chung,!K.!K.,!Zhang,!Y.,!Lim,!K.!L.,!Tanaka,!Y.,!Huang,!H.,!Gao,!J.,!…!Dawson,!T.!M.!(2001).! Parkin! ubiquitinates! the! alphaTsynucleinTinteracting! protein,!synphilinT1:! implications! for! LewyTbody! formation! in! Parkinson! disease.!Nature1Medicine,!7(10),!1144–50.!!
Clair,! D.! St.,! Oberley,! T.! D.,! &! Ho,! Y.! (1991).! Qverproduction! of! human! MnTsuperoxide!dismutaw!modulates!toxicity!in!mammalian!cells.!FEBS,!293(1),!199–203.!
Clarke,!C.!(2004).!Neuroprotection!and!pharmacotherapy!for!motor!symptoms!in!Parkinson’s!disease.!The1Lancet1Neurology,!3(August),!466–474.!
Clayton,! D.! F.,! &! George,! J.! M.! (1998).! The! synucleins:! a! family! of! proteins!involved! in! synaptic! function,! plasticity,! neurodegeneration! and! disease.!Trends1in1Neurosciences,!21(6),!249–54.!!
Conway,!K.! a,!Harper,! J.!D.,!&!Lansbury,! P.! T.! (1998).!Accelerated! in! vitro! fibril!formation! by! a! mutant! alphaTsynuclein! linked! to! earlyTonset! Parkinson!disease.!Nature1Medicine,!4(11),!1318–20.!!
Conway,!K.!A.,!Lee,!S.,!Rochet,! J.,!Ding,!T.!T.,!Williamson,!R.!E.,!&!Lansbury,!P.!T.!(2000).! Acceleration! of! oligomerization! ,! not! fibrillization! ,! is! a! shared!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 82!
property!of!both!alphaTsynuclein!mutations!linked!to!earlyTonset!Parkinson!’! s! disease :! Implications! for! pathogenesis! and! therapy.!PNAS,!97(2),! 571–576.!
Cookson,! M.! R.! (2009).! alphaTSynuclein! and! neuronal! cell! death.! Molecular1Neurodegeneration,!4,!9.!!
Corti,!O.,! Lesage,! S.,!&!Brice,!A.! (2011).!What!genetics! tells!us!about! the! causes!and!mechanisms!of!Parkinson’s!disease.!Physiological1Reviews,!91(4),!1161–218.!!
Cuervo,! A.,! Stefanis,! L.,! Fredenburg,! R.,! Lansbury,! P.! T.,! &! Sulzer,! D.! (2004).!Impaired! Degradation! of! Mutant! αTSynuclein! by! ChaperoneTMediated!Autophagy.!Science,!305(5688),!1292–1295.!
Culvenor,!J.!G.,!Mclean,!C.!A.,!Cutt,!S.,!Campbell,!B.!C.!V,!Maher,!F.,!Jakala,!P.,!…!Li,!Q.TX.! (1999).!NonTAbeta! component! of! Alzheimer’s! disease! amyloid! (NAC)!revisited.!NAC!and!alphaTsynuclein!are!not!associated!with!Abeta!amyloid.!American1Journal1of1Pathology,!155(4),!1173–1181.!
Da!Costa,!C.!A.,!Ancolio,!K.,!&!Checler,! F.! (2000).!WildTtype!but!not!Parkinson’s!diseaseTrelated! alaT53! TT>! Thr! mutant! alphaTsynuclein! protects! neuronal!cells! from! apoptotic! stimuli.! The1 Journal1 of1 Biological1 Chemistry,! 275(31),!24065–9.!!
Dalfó,!E.,!Barrachina,!M.,!Rosa,! J.!L.,!Ambrosio,!S.,!&!Ferrer,! I.! (2004).!Abnormal!alphaTsynuclein!interactions!with!rab3a!and!rabphilin!in!diffuse!Lewy!body!disease.!Neurobiology1of1Disease,!16(1),!92–7.!!
Danzer,!K.!M.,!Ruf,!W.!P.,!Putcha,!P.,!Joyner,!D.,!Hashimoto,!T.,!Glabe,!C.,!…!McLean,!P.!J.!(2011).!HeatTshock!protein!70!modulates!toxic!extracellular!αTsynuclein!oligomers!and!rescues!transTsynaptic!toxicity.!FASEB1Journal,!25(1),!326–36.!!
Darios,!F.,!Corti,!O.,!&!Lücking,!C.!(2003).!Parkin!prevents!mitochondrial!swelling!and! cytochrome! c! release! in! mitochondriaTdependent! cell! death.! Human1Molecular1…,!12(5),!517–526.!
Dauer,! W.,! &! Przedborski,! S.! (2003).! Parkinson’s! Disease :! Mechanisms! and!Models.!Neuron,!39,!889–909.!
Davidson,!W.! S.,! Jonas,! a,! Clayton,!D.! F.,! &!George,! J.!M.! (1998).! Stabilization! of!alphaTsynuclein!secondary!structure!upon!binding!to!synthetic!membranes.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!273(16),!9443–9.!!
Davie,!C.!a.! (2008).!A!review!of!Parkinson’s!disease.!British1Medical1Bulletin,!86,!109–27.!!
Referências Bibliográficas
83!
Desplats,!P.,!Lee,!H.TJ.,!Bae,!E.TJ.,!Patrick,!C.,!Rockenstein,!E.,!Crews,!L.,!…!Lee,!S.TJ.!(2009).! Inclusion! formation! and! neuronal! cell! death! through! neuronTtoTneuron!transmission!of!alphaTsynuclein.!PNAS,!106(31),!13010–5.!!
Devic,!I.,!Hwang,!H.,!Edgar,!J.!S.,!Izutsu,!K.,!Presland,!R.,!Pan,!C.,!…!Zhang,!J.!(2011).!Salivary!αTsynuclein!and!DJT1:!potential!biomarkers!for!Parkinson’s!disease.!Brain :1A1Journal1of1Neurology,!134(Pt!7),!e178.!!
Dexter,!D.!T.,!&!Jenner,!P.!(2013).!Parkinson!disease:!from!pathology!to!molecular!disease!mechanisms.!Free1Radical1Biology1&1Medicine,!62,!132–44.!!
Di!Monte,!D.!a.!(2001).!The!role!of!environmental!agents!in!Parkinson’s!disease.!Clinical1Neuroscience1Research,!1(6),!419–426.!!
Dong,!A.,!Shen,!J.,!Krause,!M.,!Akiyama,!H.,!Hackett,!S.!F.,!Lai,!H.,!&!Campochiaro,!P.!(2006).! Superoxide! dismutase! 1! protects! retinal! cells! from! oxidative!damage.!Cellular1Physiology,!208(3),!516–526.!!
Dunker,! a! K.,! Silman,! I.,! Uversky,! V.! N.,! &! Sussman,! J.! L.! (2008).! Function! and!structure! of! inherently! disordered! proteins.! Current1 Opinion1 in1 Structural1Biology,!18(6),!756–64.!
Ecole! Polytechnique! Fédérale! de! Lausanne.! (2013,! August! 26).! Not! guility:!Parkinson! and! protein! phosphorylation.! ScienceDaily.! Retrieved! from!www.sciencedaily.com/releases/2013/08/130826182919.htm!
ElTAgnaf,!O.!M.,!Salem,!S.,!Paleologou,!K.,!Cooper,!L.,!Fullwood,!N.!J.,!Gibson,!M.!J.,!…! Allsop,! D.! (2003).! α! TSynuclein! implicated! in! Parkinson’s! disease! is!present! in! extracellular! biological! fluids,! including! human! plasma.! The1FASEB1Journal,!17,!1945–1947.!
ElroyTstein,!O.,!Bernstein,!Y.,!&!Groner,!Y.!(1986).!Overproduction!of!human!Cu!/!ZnTsuperoxide!dismutase! in! enhancement!of! lipid!peroxidation.!The1EMBO1Journal,!5(3),!615–622.!
Emmanouilidou,! E.,! Elenis,! D.,! Papasilekas,! T.,! Stranjalis,! G.,! Gerozissis,! K.,!Ioannou,!P.!C.,!&!Vekrellis,!K.!(2011).!Assessment!of!αTsynuclein!secretion!in!mouse!and!human!brain!parenchyma.!PloS1One,!6(7),!e22225.!!
Emmanouilidou,!E.,!Melachroinou,!K.,!Roumeliotis,!T.,!Garbis,! S.!D.,!Ntzouni,!M.,!Margaritis,! L.! H.,! …! Vekrellis,! K.! (2010).! CellTproduced! alphaTsynuclein! is!secreted! in! a! calciumTdependent! manner! by! exosomes! and! impacts!neuronal!survival.!The1Journal1of1Neuroscience,!30(20),!6838–51.!!
Engelender,! S.! (2008).! Ubiquitination! of! alphaTsynuclein! and! autophagy! in!Parkinson!’!s!disease.!Autophagy,!4(3),!372–374.!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 84!
Engelender,!S.,!Kaminsky,!Z.,!Guo,!X.,!Sharp,!a!H.,!Amaravi,!R.!K.,!Kleiderlein,!J.!J.,!…!Ross,!C.!a.!(1999).!SynphilinT1!associates!with!alphaTsynuclein!and!promotes!the!formation!of!cytosolic!inclusions.!Nature1Genetics,!22(1),!110–4.!!
Engelender,!S.,!Wanner,!T.,!Kleiderlein,!J.!J.,!Wakabayashi,!K.,!Tsuji,!S.,!Takahashi,!H.,! …! Ross,! C.! A.! (2000).! Organization! of! the! human! synphilinT1! gene! ,! a!candidate!for!Parkinson!’!s!disease.!Mammalian1Genome,!11,!763–766.!!
Epfl,! T.,! Oueslati,! A.,! &! Lashuel,! H.! (2013).! Not! Guility :! Parkinson! and! Protein!Phosphorylation.!
Evans,! A.! H.,! &! Sung,! S.! (2013).! Therapeutic! Progress! in! Parkinson! ’! s! Disease.!CPD,!3,!29–31.!
Eyal,!A.,!&!Engelender,!S.!(2006).!Synphilin!Isoforms!and!the!Search!for!a!Cellular!Model! of! Lewy!Body! Formation! in! Parkinson! ’! s!Disease.!Cell1Cycle,! 5(18),!2082–2086.!!
Eyal,! A.,! Szargel,! R.,! Avraham,! E.,! Liani,! E.,! Haskin,! J.,! Rott,! R.,! &! Engelender,! S.!(2006).! SynphilinT1A:! an! aggregationTprone! isoform! of! synphilinT1! that!causes! neuronal! death! and! is! present! in! aggregates! from! alphaTsynucleinopathy!patients.!Proceedings1of1the1National1Academy1of1Sciences1of1the1United1States1of1America,!103(15),!5917–22.!!
Farrer,!M.! J.! (2006).! Genetics! of! Parkinson! disease:! paradigm! shifts! and! future!prospects.!Nature1Reviews.1Genetics,!7(4),!306–18.!!
Fearnley,!J.,!&!Lees,!A.!(1991).!Ageing!and!Parkinson!’!s!disease :!substantia!nigra!regional!selectivity.!Brain,!114(5),!2283–301.!!
Ferreira,! F.,! &! Ferreira,! F.! (2010).! Doença! de! Parkinson:! Aspectos!Fisiopatológicos!e!Terapêuticos.!Saúde1E1…,!3(2),!221–228.!!
Fredenburg,!R.!a,!Rospigliosi,!C.,!Meray,!R.!K.,!Kessler,!J.!C.,!Lashuel,!H.!a,!Eliezer,!D.,! &! Lansbury,! P.! T.! (2007).! The! impact! of! the! E46K! mutation! on! the!properties! of! alphaTsynuclein! in! its! monomeric! and! oligomeric! states.!Biochemistry,!46(24),!7107–18.!!
Fujita,! K.! a,! Ostaszewski,! M.,! Matsuoka,! Y.,! Ghosh,! S.,! Glaab,! E.,! Trefois,! C.,! …!Balling,! R.! (2013).! Integrating! Pathways! of! Parkinson’s! Disease! in! a!Molecular!Interaction!Map.!Molecular1Neurobiology.!!
Fujiwara,!H.,!Hasegawa,!M.,!Dohmae,!N.,!Kawashima,!A.,!Masliah,!E.,!Goldberg,!M.!S.,! …! Iwatsubo,! T.! (2002).! AlphaTSynuclein! is! phosphorylated! in!synucleinopathy!lesions.!Nature1Cell1Biology,!4(2),!160–4.!!
Fukuda,!M.!(2008).!Regulation!of!secretory!vesicle!traffic!by!Rab!small!GTPases.!Cellular1and1Molecular1Life1Sciences :1CMLS,!65(18),!2801–13.!!
Referências Bibliográficas
85!
Gai,! W.! P.,! Yuan,! H.! X.,! Li,! X.! Q.,! Power,! J.! T.,! Blumbergs,! P.! C.,! &! Jensen,! P.! H.!(2000).!In!situ!and!in!vitro!study!of!colocalization!and!segregation!of!alphaTsynuclein,! ubiquitin,! and! lipids! in! Lewy! bodies.! Experimental1 Neurology,!166(2),!324–33.!!
Galvin,! J.,! Lee,! V.,! &! Trojanowski,! J.! (2001).! Synucleinopathies :! Clinical! and!Pathological!Implications.!Arch.1Neurol.,!58,!186–190.!
Gandhi,! S.,!WoodTKaczmar,!A.,!Yao,!Z.,! PlunTFavreau,!H.,!Deas,!E.,!Klupsch,!K.,!…!Abramov,! A.! Y.! (2009).! PINK1Tassociated! Parkinson’s! disease! is! caused! by!neuronal!vulnerability! to! calciumTinduced! cell!death.!Molecular1Cell,!33(5),!627–38.!!
Gasser,! T.! (2009).! Mendelian! forms! of! Parkinson’s! disease.! Biochimica1 et1Biophysica1Acta,!1792(7),!587–96.!
George,!J.!(2002).!The!synucleins.!Genome1Biol,!3(1),!1–6.!!
Giehm,!L.,! Svergun,!D.! I.,!Otzen,!D.!E.,!&!Vestergaard,!B.! (2011).! LowTresolution!structure! of! a! vesicle! disrupting! αTsynuclein! oligomer! that!accumulates! during! fibrillation.! Proceedings1 of1 the1 National1 Academy1 of1Sciences1of1the1United1States1of1America,!108(8),!3246–51.!!
Gitler,! A.! D.,! Bevis,! B.! J.,! Shorter,! J.,! Strathearn,! K.! E.,! Hamamichi,! S.,! Su,! L.! J.,!…!Lindquist,! S.! (2008).! The! Parkinson! ’! s! disease! protein! alpha! Tsynuclein!disrupts!cellular!Rab!homeostasis.!PNAS,!105(1),!145–150.!
Goedert,! M.! (1999).! Filamentous! nerve! cell! inclusions! in! neurodegenerative!diseases:! tauopathies! and! alphaTsynucleinopathies.! Philosophical1Transactions1 of1 the1 Royal1 Society1 of1 London.1 Series1 B,1 Biological1 Sciences,!354(1386),!1101–18.!!
Goetz,! C.,! Chmura,! T.,! &! Lanska,! D.! (2001).! The! history! of! Parkinson’s! disease:!Part! 2! of! the! MDSTsponsored! History! of! Movement! Disorders! exhibit,!Barcelona,!June,!2000.!Movement1Disorders,!16(1),!156–161.!!
Goetz,!C.!G.!(2011).!The!history!of!Parkinson’s!disease:!early!clinical!descriptions!and! neurological! therapies.! Cold1 Spring1 Harbor1 Perspectives1 in1 Medicine,!1(1),!a008862.!
GómezTChavarín,!M.,! RoldanTRoldan,! G.,! MoralesTEspinosa,! R.,! PérezTSoto,! G.,! &!TornerTAguilar,! C.! (2012).!Mecanismos! fisiopatológicos! involucrados! en! la!enfermedad!de!Parkinson.!Arch1Neurocien,!17(1),!25–33.!
Gosavi,!N.,! Lee,!H.TJ.,! Lee,! J.! S.,! Patel,! S.,!&! Lee,! S.TJ.! (2002).! Golgi! fragmentation!occurs!in!the!cells!with!prefibrillar!alphaTsynuclein!aggregates!and!precedes!the! formation! of! fibrillar! inclusion.! The1 Journal1 of1 Biological1 Chemistry,!277(50),!48984–92.!!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 86!
Goulart,! F.,! &! Xavier,! L.! (2005).! Uso! de! escalas! para! avaliação! da! doença! de!Parkinson!em!fisioterapia.!Fisioterapia1E1Pesquisa,!11(1),!49–56.!
GretenTHarrison,!B.,!Polydoro,!M.,!MorimotoTTomita,!M.,!Diao,!L.,!Williams,!A.!M.,!Nie,!E.!H.,!…!Chandra,!S.!S.!(2010).!αβγTSynuclein!triple!knockout!mice!reveal!ageTdependent! neuronal! dysfunction.!Proceedings1of1 the1National1Academy1of1Sciences1of1the1United1States1of1America,!107(45),!19573–8.!!
Gu,!M.,!Cooper,!J.!M.,!Taanman,!J.!W.,!&!Schapira,!a!H.!(1998).!Mitochondrial!DNA!transmission! of! the!mitochondrial! defect! in! Parkinson’s! disease.!Annals1of1Neurology,!44(2),!177–86.!
Guimarães,! J.,! &! Alegria,! P.! (2004).! O! Parkinsonismo.!Medicina1 Interna,! 11(2),!109–114.!
Hardy,!J.,!Lewis,!P.,!Revesz,!T.,!Lees,!A.,!&!PaisanTRuiz,!C.!(2009).!The!genetics!of!Parkinson’s! syndromes:! a! critical! review.! Current1 Opinion1 in1 Genetics1 &1Development,!19(3),!254–65.!!
Hasegawa,!M.,!Fujiwara,!H.,!Nonaka,!T.,!Wakabayashi,!K.,!Takahashi,!H.,!Lee,!V.!M.TY.,!…! Iwatsubo,!T.! (2002).!Phosphorylated!alphaTsynuclein! is!ubiquitinated!in! alphaTsynucleinopathy! lesions.! The1 Journal1 of1 Biological1 Chemistry,!277(50),!49071–6.!
Hasegawa,! T.,! Matsuzaki,! M.,! Takeda,! A.,! Kikuchi,! A.,! Akita,! H.,! Perry,! G.,! …!Itoyama,! Y.! (2004).! Accelerated! alphaTsynuclein! aggregation! after!differentiation! of! SHTSY5Y! neuroblastoma! cells.! Brain1 Research,! 1013(1),!51–9.!!
Hashimoto,!M.,!&!Masliah,!E.!(1999).!AlphaTsynuclein!in!Lewy!Body!Disease!and!Alzheimer’s!Disease.!Brain1Pathology,!9(4),!707–720.!!
Hastings,! T.! (2009).! The! role! of! dopamine! oxidation! in! mitochondrial!dysfunction:! implications! for! Parkinson’s! disease.! Journal1 of1 Bioenergetics1and1Biomembranes,!41(6),!469–72.!!
HernándezTVargas,!R.,!FonsecaTOrnelas,!L.,!LópezTGonzález,!I.,!RiesgoTEscovar,!J.,!Zurita,! M.,! &! Reynaud,! E.! (2011).! Synphilin! suppresses! αTsynuclein!neurotoxicity!in!a!Parkinson’s!disease!Drosophila!model.!Genesis1(New1York,1N.Y. :12000),!49(5),!392–402.!!
Hershko,! a,! &! Ciechanover,! a.! (1998).! The! ubiquitin! system.! Annual1 Review1 of1Biochemistry,!67,!425–79.!!
Hickey,!P.,!&!Stacy,!M.!(2011).!Available!and!emerging!treatments!for!Parkinson’s!disease:!a!review.!Drug1Design,1Development1and1Therapy,!5,!241–54.!!
Hodara,!R.,!Norris,!E.!H.,!Giasson,!B.!I.,!MishizenTEberz,!A.! J.,!Lynch,!D.!R.,!Lee,!V.!M.TY.,! &! Ischiropoulos,! H.! (2004).! Functional! consequences! of! alphaT
Referências Bibliográficas
87!
synuclein! tyrosine! nitration:! diminished! binding! to! lipid! vesicles! and!increased! fibril! formation.! The1 Journal1 of1 Biological1 Chemistry,! 279(46),!47746–53.!!
Hughes,!A.,!Daniel,!S.,!Kilford,!L.,!&!Lees,!A.!(1992).!Accuracy!of!clinical!diagnosis!of!idiopathic!Parkinson’s!disease.!A!clinicoTpathological!study!of!100!cases.!JNNP,!(55),!181–184.!
Ikeuchi,!T.,!Kakita,!A.,!&!Shiga,!A.!(2008).!Patients!homozygous!and!heterozygous!for!SNCA!duplication!in!a!family!with!parkinsonism!and!dementia.!Archives1of1…,!65(4),!514–519.!!
Irwin,! D.! J.,! Lee,! V.! M.,! &! Trojanowski,! J.! Q.! (2013).! Parkinson! ’! s! disease!dementia :!convergence!of!alphaTsynuclein!,!tau!and!amyloid!T!β!pathologies.!Nature1Reviews1Neuroscience,!14,!626–636.!
Ito,!T.,!Niwa,!J.TI.,!Hishikawa,!N.,!Ishigaki,!S.,!Doyu,!M.,!&!Sobue,!G.!(2003).!Dorfin!localizes! to! Lewy! bodies! and! ubiquitylates! synphilinT1.! The1 Journal1 of1Biological1Chemistry,!278(31),!29106–14.!!
Iwai,! A.,! Masliah,! E.,! Yoshimoto,! M.,! &! Ge,! N.! (1995).! The! precursor! protein! of!nonTAβ!component!of!Alzheimer’s!disease!amyloid!is!a!presynaptic!protein!of!the!central!nervous!system.!Neuron,!14,!467–475.!!
Iwata,! A.,! Christianson,! J.! C.,! Bucci,!M.,! Ellerby,! L.!M.,!Nukina,!N.,! Forno,! L.! S.,!&!Kopito,! R.! R.! (2005).! Increased! susceptibility! of! cytoplasmic! over! nuclear!polyglutamine! aggregates! to! autophagic! degradation.! PNAS,! 102(37),!13135–13140.!
Jang,! A.,! Lee,! H.TJ.,! Suk,! J.TE.,! Jung,! J.TW.,! Kim,! K.TP.,! &! Lee,! S.TJ.! (2010).! NonTclassical! exocytosis! of! alphaTsynuclein! is! sensitive! to! folding! states! and!promoted!under!stress!conditions.!Journal1of1Neurochemistry,!113(5),!1263–74.!!
Jankovic,!J.!(2006).!An!update!on!the!treatment!of!Parkinson!’!s!disease.!Mt1Sinai1J1Med,!73(4),!682–9.!
Jao,!C.!C.,!Hegde,!B.!G.,!Chen,! J.,!Haworth,! I.!S.,!&!Langen,!R.! (2008).!Structure!of!membraneTbound! alphaTsynuclein! from! siteTdirected! spin! labeling! and.!PNAS,!105(50),!1–6.!
Jenner,!P.!(2003).!Oxidative!Stress!in!Parkinson!’!s!Disease.!Annals1of1Neurology,!53(3),!26–38.!!
Jo,!E.,!McLaurin,!J.,!Yip,!C.!M.,!St!GeorgeTHyslop,!P.,!&!Fraser,!P.!E.!(2000).!alphaTSynuclein! membrane! interactions! and! lipid! specificity.! The1 Journal1 of1Biological1Chemistry,!275(44),!34328–34.!!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 88!
Johnston,! J.! A.,! Ward,! C.! L.,! &! Kopito,! R.! R.! (1998).! Aggresomes:! A! Cellular!Response! to! Misfolded! Proteins.! The1 Jounal1 of1 Cell1 Biology,! 143(7),! 1883–1898.!
Júnior,! C.,! &! Aguiar,! P.! de! C.! (2007).! Mitocôndria! e! doença! de! Parkinson:!contribuições! da! genética! no! conhecimento! do! processo! patogênico.!Healthmetrix.com.br,!5(2),!177–181.!!
Kawamata,! H.,! Mclean,! P.! J.,! Sharma,! N.,! &! Hyman,! B.! T.! (2001).! Interaction! of!alphaTsynuclein! and! synphilinT1:! effect! of! Parkinson! ’! s! diseaseTassociated!mutations.!Journal1of1Neurochemistry,!77,!929–934.!
Kayed,!R.,!Sokolov,!Y.,!Edmonds,!B.,!McIntire,!T.!M.,!Milton,!S.!C.,!Hall,!J.!E.,!&!Glabe,!C.!G.! (2004).!Permeabilization!of! lipid!bilayers! is!a!common!conformationTdependent! activity! of! soluble! amyloid! oligomers! in! protein! misfolding!diseases.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!279(45),!46363–6.!!
Kett,!L.!R.,!Boassa,!D.,!Ho,!C.!C.TY.,!Rideout,!H.!J.,!Hu,!J.,!Terada,!M.,!…!Dauer,!W.!T.!(2012).! LRRK2! Parkinson! disease! mutations! enhance! its! microtubule!association.!Human1Molecular1Genetics,!21(4),!890–9.!!
Khatri,! I.! A.,! &! Chaudhry,! U.! S.! (2009).! PARKINSON! ’! S! DISEASE! T! A! REVIEW.!Pakistan1Journal1of1Neurological1Sciences,!4(1),!33–43.!
Kim,!R.!H.,! Peters,!M.,! Jang,! Y.,! Shi,!W.,! Pintilie,!M.,! Fletcher,!G.! C.,!…!Mak,!T.!W.!(2005).!DJT1,!a!novel! regulator!of! the! tumor!suppressor!PTEN.!Cancer1Cell,!7(3),!263–73.!!
Knott,! A.! B.,! Perkins,! G.,! Schwarzenbacher,! R.,! &! BossyTWetzel,! E.! (2008).!Mitochondrial! fragmentation! in! neurodegeneration.! Nature1 Reviews.1Neuroscience,!9(7),!505–18.!!
Koller,!W.,!VetereTOverfield,!B.,!&!Gray,!C.!(1990).!Environmental!risk!factors! in!Parkinson’s!disease.!Neurology,!23,!487–502.!!
Krenz,! A.,! Falkenburger,! B.! H.,! Gerhardt,! E.,! Drinkut,! A.,! &! Schulz,! J.! B.! (2009).!Aggregate!formation!and!toxicity!by!wildTtype!and!R621C!synphilinT1!in!the!nigrostriatal! system! of! mice! using! adenoviral! vectors.! Journal1 of1Neurochemistry,!108(1),!139–46.!!
Krüger,! R.! (2004).! The! role! of! synphilinT1! in! synaptic! function! and! protein!degradation.!Cell1and1Tissue1Research,!318(1),!195–9.!!
KrygowskaTWajs,! A.,! Lenda,! T.,! Adamek,! D.,! Moskała,! M.,! Kuter,! K.,! Kunz,! J.,! …!Ossowska,! K.! (2008).! Increased! synphilinT1! expression! in! human! elderly!brains! with! substantia! nigra! Marinesco! bodies.! Pharmacological1 Reports :1PR,!60(6),!914–24.!!
Referências Bibliográficas
89!
Kulisevsky,!J.,!Luquin,!M.!R.,!Arbelo,!J.!M.,!Burguera,!J.!a.,!Carrillo,!F.,!Castro,!a.,!…!Yañez,!R.!(2013).!Advanced!Parkinson’s!disease:!Clinical!characteristics!and!treatment!(part!1).!Neurología1(English1Edition),!28(8),!503–521.!!
Langston,! J.,! Ballard,! P.,! Tetrud,! J.,! &! Irwin,! I.! (1983).! Chronic! Parkinsonism! in!humans!due!to!a!product!of!meperidineTanalog!synthesis.!Science,!219,!979–980.!!
Langston,! J.! W.! (2002).! Parkinson’s! disease:! current! and! future! challenges.!Neurotoxicology,!23(4T5),!443–450.!!
Langston,!J.!W.,!Ballard,!P.,!Tetrud,!J.!W.,!&!Irwin,!I.!(1983).!Chronic!Parkinsonism!in! humans! due! to! a! product! of!meperidineTanalog! synthesis.!Science1(New1York,1N.Y.),!219(4587),!979–80.!!
Lashuel,!H.!a,!Overk,!C.!R.,!Oueslati,!A.,!&!Masliah,!E.!(2013).!The!many!faces!of!αTsynuclein:!from!structure!and!toxicity!to!therapeutic!target.!Nature1Reviews.1Neuroscience,!14(1),!38–48.!!
Lau,!L.!de,!&!Breteler,!M.!(2006).!Epidemiology!of!Parkinson’s!disease.!The1Lancet1Neurology,!5,!525–535.!!
Lee,! F.! J.! S.,! &! Liu,! F.! (2008).! Genetic! factors! involved! in! the! pathogenesis! of!Parkinson’s!disease.!Brain1Research1Reviews,!58(2),!354–64.!!
Lee,!G.,! Tanaka,!M.,! Park,!K.,! Lee,! S.! S.,!Kim,!Y.!M.,! Junn,!E.,!…!Mouradian,!M.!M.!(2004).! Casein! kinase! IITmediated! phosphorylation! regulates! alphaTsynuclein/synphilinT1!interaction!and!inclusion!body!formation.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!279(8),!6834–9.!
Lee,! H.! J.,! Kang,! S.! J.,! Lee,! K.,! &! Im,! H.! (2011).! Human! αTsynuclein! modulates!vesicle! trafficking! through! its! interaction! with! prenylated! Rab! acceptor!protein! 1.! Biochemical1 and1 Biophysical1 Research1 Communications,! 412(4),!526–31.!!
Lee,! H.TJ.,! Choi,! C.,! &! Lee,! S.TJ.! (2002).! MembraneTbound! alphaTsynuclein! has! a!high! aggregation!propensity! and! the! ability! to! seed! the! aggregation!of! the!cytosolic!form.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!277(1),!671–8.!!
Lee,!K.TW.,!Chen,!W.,!Junn,!E.,!Im,!J.TY.,!Grosso,!H.,!Sonsalla,!P.!K.,!…!Mouradian,!M.!M.!(2011).!Enhanced!phosphatase!activity!attenuates!αTsynucleinopathy!in!a!mouse!model.!The1Journal1of1Neuroscience :1The1Official1Journal1of1the1Society1for1Neuroscience,!31(19),!6963–71.!!
Leong,! S.! L.,! Cappai,! R.,! Barnham,! K.! J.,! &! Pham,! C.! L.! L.! (2009).!Modulation! of!alphaTsynuclein! aggregation! by! dopamine:! a! review.! Neurochemical1Research,!34(10),!1838–46.!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 90!
Leroy,! E.,! Boyer,! R.,! &! Polymeropoulos,! M.! H.! (1998).! IntronTexon! structure! of!ubiquitin! cTterminal! hydrolaseTL1.!DNA1Research :1An1 International1 Journal1for1Rapid1Publication1of1Reports1on1Genes1and1Genomes,!5(6),!397–400.!!
Lesage,!S.,!Anheim,!M.,!Letournel,!F.,!Bousset,!L.,!Honoré,!A.,!Rozas,!N.,!…!Brice,!A.!(2013).!G51D!αTsynuclein!mutation!causes!a!novel!parkinsonianTpyramidal!syndrome.!Annals1of1Neurology,!459–471.!!
Levy,!O.,!Malagelada,!C.,!&!Greene,!L.!(2009).!Cell!death!pathways!in!Parkinson’s!disease:!proximal!triggers,!distal!effectors,!and!final!steps.!Apoptosis,!14(4),!478–500.!!
Li,! J.,! Vn,! U.,! &! Al,! F.! (2001).! Effect! of! familial! Parkinson! ’! s! disease! point!mutations!A30P!and!A53T!on! the! structural!properties! ,! aggregation! ,! and!fibrillation!of!human!alphaT!synuclein.!Biochemistry,!40(38),!11604–13.!
Li,!J.,!Vn,!U.,!&!Al,!F.!(2002).!Conformational!behavior!of!human!alphaT!synuclein!is! modulated! by! familial! Parkinson! ’! s! disease! point! mutations! A30P! and!A53T!.!NeuroToxicology,!23(4T5),!553–67.!
Li,! X.,! Liu,! Z.,! Tamashiro,! K.,! Shi,! B.,! Rudnicki,! D.! D.,! Ross,! C.! a,! …! Smith,!W.!W.!(2010).!SynphilinT1!exhibits!trophic!and!protective!effects!against!Rotenone!toxicity.!Neuroscience,!165(2),!455–62.!!
Liani,!E.,!Eyal,!A.,!Avraham,!E.,!Shemer,!R.,!Szargel,!R.,!Berg,!D.,!…!Engelender,!S.!(2004).!Ubiquitylation!of! synphilinT1!and!alpha! Tsynuclein!by!SIAH!and! its!presence!in!cellular!inclusions!and!Lewy!bodies!imply!a!role!in!Parkinson!’!s!disease.!Proc.1Natl.1Acad.1Sci.1USA,!101(15),!5500–5505.!
Liu,! Y.,! Fallon,! L.,! Lashuel,! H.! A.,! Liu,! Z.,! &! Lansbury,! P.! T.! (2002).! The! UCHTL1!Gene! Encodes! Two! Opposing! Enzymatic! Activities! that! Affect! alphaTSynuclein! Degradation! and! Parkinson! ’! s! Disease! Susceptibility.! Cell,! 111,!209–218.!
Lo!Bianco,!C.,!Schneider,!B.!L.,!Ridet,!J.,!Déglon,!N.,!&!Aebischer,!P.!(2002).!AlphaTSynucleinopathy!and!selective!dopaminergic!neuron!loss!in!a!rat!lentiviralTbased!model!of!Parkinson!’!s!disease.!PNAS,!99(16),!10813–10818.!
Logroscino,! G.! (2005).! The! Role! of! Early! Life! Environmental! Risk! Factors! in!Parkinson! Disease:! What! Is! the! Evidence?! Environmental1 Health1Perspectives,!113(9),!1234–1238.!!
Lotharius,! J.,! &! Brundin,! P.! (2002).! Pathogenesis! of! Parkinson’s! disease:!dopamine,! vesicles! and! alphaTsynuclein.! Nature1 Reviews.1 Neuroscience,!3(12),!932–42.!!
Lowe,! J.,! McDermott,! H.,! Landon,! M.,! Mayer,! R.! J.,! &! Wilkinson,! K.! D.! (1990).!Ubiquitin! carboxylTterminal! hydrolase! (PGP! 9.5)! is! selectively! present! in!
Referências Bibliográficas
91!
ubiquitinated! inclusion! bodies! characteristic! of! human! neurodegenerative!diseases.!The1Journal1of1Pathology,!161(2),!153–60.!!
Malkus,! K.! a,! Tsika,! E.,! &! Ischiropoulos,! H.! (2009).! Oxidative! modifications,!mitochondrial!dysfunction,!and!impaired!protein!degradation!in!Parkinson’s!disease:! how! neurons! are! lost! in! the! Bermuda! triangle.! Molecular1Neurodegeneration,!4,!24.!!
ManningTBog,!A.!B.,!McCormack,!A.!L.,!Li,!J.,!Uversky,!V.!N.,!Fink,!A.!L.,!&!Di!Monte,!D.!a.! (2002).!The!herbicide!paraquat!causes!upTregulation!and!aggregation!of! alphaTsynuclein! in! mice:! paraquat! and! alphaTsynuclein.! The1 Journal1 of1Biological1Chemistry,!277(3),!1641–4.!!
Maroteaux,!L.,!Campanelli,! J.,!&!Scheller,!R.! (1988).!Synuclein:!a!neuronTspecific!protein!localized!to!the!nucleus!and!presynaptic!nerve!terminal.!J1Neurosci,!8(8),!2804–2815.!!
Martín,! E.! D.,! GonzálezTGarcía,! C.,! Milán,! M.,! Fariñas,! I.,! &! Ceña,! V.! (2004).!StressorTrelated!impairment!of!synaptic!transmission!in!hippocampal!slices!from!alphaTsynuclein!knockout!mice.!The1European1Journal1of1Neuroscience,!20(11),!3085–91.!
Marx,! F.! P.,! Holzmann,! C.,! Strauss,! K.! M.,! Li,! L.,! Eberhardt,! O.,! Gerhardt,! E.,! …!Krüger,!R.! (2003).! Identification!and! functional! characterization!of!a!novel!R621C! mutation! in! the! synphilinT1! gene! in! Parkinson’s! disease.! Human1Molecular1Genetics,!12(11),!1223–1231.!!
Marx,! F.,! Soehn,! A.! S.,! Berg,! D.,! Melle,! C.,! Schiesling,! C.,! Lang,! M.,! …! Krüger,! R.!(2007).! The! proteasomal! subunit! S6! ATPase! is! a! novel! synphilinT1!interacting! proteinTimplications! for! Parkinson’s! disease.! FASEB1 Journal :1Official1Publication1of1 the1Federation1of1American1Societies1 for1Experimental1Biology,!21(8),!1759–67.!!
Masliah,!E.,!Rockenstein,!E.,!Veinbergs,!I.,!Mallory,!M.,!Hashimoto,!M.,!Takeda,!A.,!…!Mucke,!L.! (2000).!Dopaminergetic!Loss!and! Inclusion!Body! formation! in!alphaTsynuclein! Mice :! Implications! for! neurodegenerative! disorders.!Science,!287,!1265–68.!
Massey,! A.,! Kiffin,! R.,! &! Cuervo,! A.! M.! (2004).! Pathophysiology! of! chaperoneTmediated! autophagy.! The1 International1 Journal1 of1 Biochemistry1 and1 Cell1Biology,!36,!2420–2434.!!
Matsuda,! N.,! Sato,! S.,! &! Shiba,! K.! (2010).! PINK1! stabilized! by! mitochondrial!depolarization! recruits! Parkin! to! damaged! mitochondria! and! activates!latent!Parkin!for!mitophagy.!The1Journal1of1Cell1…,!189(2),!211–221.!!
McCormack,!A.!L.,!Thiruchelvam,!M.,!ManningTBog,!A.!B.,!Thiffault,!C.,!Langston,!J.!W.,!CoryTSlechta,!D.!a.,!&!Di!Monte,!D.!a.!(2002).!Environmental!Risk!Factors!and! Parkinson’s! Disease:! Selective! Degeneration! of! Nigral! Dopaminergic!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 92!
Neurons!Caused!by!the!Herbicide!Paraquat.!Neurobiology1of1Disease,!10(2),!119–127.!!
Mcnaught,!K.! S.! P.,!Olanow,!C.!W.,!Halliwell,! B.,! Isacson,!O.,!&! Jenner,! P.! (2001).!Failure!of!the!ubiquitin–proteasome!system!in!Parkinson’s!disease,!2.!
McNaught,!K.!S.!P.,!Perl,!D.!P.,!Brownell,!A.TL.,!&!Olanow,!C.!W.!(2004).!Systemic!exposure! to! proteasome! inhibitors! causes! a! progressive! model! of!Parkinson’s!disease.!Annals1of1Neurology,!56(1),!149–62.!!
Miller,!D.!W.,!Hague,!S.!M.,!Clarimon,!J.,!Baptista,!M.,!GwinnTHardy,!K.,!Cookson,!M.!R.,! &! Singleton,! a.! B.! (2004).! AlphaTSynuclein! in! blood! and! brain! from!familial!Parkinson!disease!with!SNCA! locus! triplication.!Neurology,!62(10),!1835–1838.!!
Murphy,!D.!D.,!Rueter,!S.!M.,!Trojanowski,!J.!Q.,!&!Lee,!V.!M.!(2000).!Synucleins!are!developmentally! expressed,! and! alphaTsynuclein! regulates! the! size! of! the!presynaptic!vesicular!pool! in!primary!hippocampal!neurons.!The1Journal1of1Neuroscience,!20(9),!3214–20.!!
Murray,!I.!J.,!Medford,!M.!a,!Guan,!H.TP.,!Rueter,!S.!M.,!Trojanowski,!J.!Q.,!&!Lee,!V.!M.TY.! (2003).! Synphilin! in!normal!human!brains! and! in! synucleinopathies:!studies!with!new!antibodies.!Acta1Neuropathologica,!105(2),!177–84.!!
Nagakubo,! D.,! Taira,! T.,! Kitaura,! H.,! Ikeda,! M.,! Tamai,! K.,! IguchiTAriga,! S.! M.,! &!Ariga,!H.! (1997).!DJT1,! a!novel! oncogene!which! transforms!mouse!NIH3T3!cells! in! cooperation! with! ras.! Biochemical1 and1 Biophysical1 Research1Communications,!231(2),!509–13.!
Nagano,! Y.,! Yamashita,! H.,! Takahashi,! T.,! Kishida,! S.,! Nakamura,! T.,! Iseki,! E.,! …!Matsumoto,!M.! (2003).! SiahT1! facilitates!ubiquitination!and!degradation!of!synphilinT1.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!278(51),!51504–14.!!
Nasseh,!I.,!&!Tengan,!C.!(2001).!Doenças!mitocondriais.!Rev1…,!9(2),!60–69.!!
Neystat,! M.,! Rzhetskaya,! M.,! Kholodilov,! N.,! &! Burke,! R.! E.! (2002).! Analysis! of!synphilinT1!and!synuclein!interactions!by!yeast!twoThybrid!b!Tgalactosidase!liquid!assay.!Neuroscience1Letters,!325,!119–123.!
O’Farrell,! C.,! Pickford,! F.,! Vink,! L.,! McGowan,! E.,! &! Cookson,! M.! R.! (2002).!Sequence! conservation! between! mouse! and! human! synphilinT1.!Neuroscience1Letters,!322(1),!9–12.!!
Obeso,! J.,!&!RodriguezTOroz,!M.! (2000).!Pathophysiology!of! the!basal!ganglia! in!Parkinson’s!disease.!Trends1in1…,!23(10),!8–19.!!
Olanow,! C.,! &! Tatton,! W.! (1999).! Etiology! and! pathogenesis! of! Parkinson’s!disease.!Annual1Review1of1Neuroscience,!22,!123–144.!!
Referências Bibliográficas
93!
Olanow,! C.!W.,! Perl,! D.! P.,! Demartino,! G.! N.,! &!Mcnaught,! K.! S.! P.! (2004).! Lewy!bodies! and! aggresomes! LewyTbody! formation! is! an! aggresomeTrelated!process :!a!hypothesis!Personal!view.!The1Lancet1Neurology,!3,!496–503.!
Onyango,! I.! G.! (2008).! Mitochondrial! dysfunction! and! oxidative! stress! in!Parkinson’s!disease.!Neurochemical1Research,!33(3),!589–97.!!
Ostrerova,!N.,!Petrucelli,!L.,!Farrer,!M.,!Mehta,!N.,!Choi,!P.,!Hardy,!J.,!&!Wolozin,!B.!(1999).!alphaTSynuclein!shares!physical!and!functional!homology!with!14T3T3!proteins.!The1Journal1of1Neuroscience :1The1Official1Journal1of1the1Society1for1Neuroscience,!19(14),!5782–91.!!
Ozansoy,!M.,!&!Başak,!a!N.!(2013).!The!central!theme!of!Parkinson’s!disease:!αTsynuclein.!Molecular1Neurobiology,!47(2),!460–5.!!
Pacheco,!C.,!Aguayo,!L.!G.,!&!Opazo,!C.! (2012).!An!extracellular!mechanism!that!can! explain! the! neurotoxic! effects! of! αTsynuclein! aggregates! in! the! brain.!Frontiers1in1Physiology,!3,!297.!!
Parent,!M.,!&!Parent,!A.!(2010).!Substantia!nigra!and!Parkinson’s!disease:!a!brief!history! of! their! long! and! intimate! relationship.! The1 Canadian1 Journal1 of1Neurological1Sciences,!313–319.!!
Parkinson,! J.! (2002).! An! essay! on! the! shaking! palsy.! 1817.! The1 Journal1 of1Neuropsychiatry1and1Clinical1Neurosciences,!14(2),!223–36;!discussion!222.!!
Pearce,! J.! (1989).! Aspects! of! the! history! of! Parkinson’s! disease.! Journal1 of1Neurology,1Neurosurgery,1and1Psychiatry,!52,!6–10.!!
Pereira,! D.! (2011).! Factores! de! Risco! na! doença! de! Parkinson.! Acta1 Medica1Portuguesa,!23,!15–24.!!
Perfeito,!R.,! CunhaTOliveira,!T.,!&!Rego,!A.!C.! (2012).!Revisiting!oxidative! stress!and!mitochondrial! dysfunction! in! the! pathogenesis! of! Parkinson! diseaseTTresemblance! to! the! effect! of! amphetamine! drugs! of! abuse.! Free1 Radical1Biology1&1Medicine,!53(9),!1791–806.!!
Perfeito,! R.,! &! Rego,! A.! (2011).! Papel! da! alfaTsinucleína! e! da! disfunção!mitocondrial!associada!à!doença!de!Parkinson.!Revistaneurociencias.com.br,!1–12.!!
Petit,!A.,!Kawarai,!T.,!Paitel,!E.,!Sanjo,!N.,!Maj,!M.,!Scheid,!M.,!…!Tandon,!A.!(2005).!WildTtype! PINK1! prevents! basal! and! induced! neuronal! apoptosis,! a!protective! effect! abrogated! by! Parkinson! diseaseTrelated! mutations.! The1Journal1of1Biological1Chemistry,!280(40),!34025–32.!!
Pickart,! C.! M.,! &! Eddins,! M.! J.! (2004).! Ubiquitin:! structures,! functions,!mechanisms.!Biochimica1et1Biophysica1Acta,!1695(1T3),!55–72.!!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 94!
Picon,! P.,! &! Beltrame,! A.! (2002).! Doença! de! Parkinson :! Protocolo! Clínico! e!Diretrizes!Terapêuticas.!Consulta1Pública1SAS/MS,!10,!235–246.!
PlunTFavreau,!H.,! Klupsch,! K.,!&!Moisoi,!N.! (2007).! The!mitochondrial! protease!HtrA2!is!regulated!by!Parkinson’s!diseaseTassociated!kinase!PINK1.!Nature1Cell1…,!9(11),!1243–52.!!
Pridgeon,!J.!W.,!Olzmann,!J.!a,!Chin,!L.TS.,!&!Li,!L.!(2007).!PINK1!protects!against!oxidative!stress!by!phosphorylating!mitochondrial!chaperone!TRAP1.!PLoS1Biology,!5(7),!e172.!!
Prontuário!terapêutico;!2013;!Ministério!da!Saúde,!INFARMED.!
Proukakis,! C.,! Dudzik,! C.,! &! Brier,! T.! (2013).! A! novel! αTsynuclein! missense!mutation!in!Parkinson!disease.!Neurology,!80(11),!1062–4.!!
Przedborski,! S.,! &! Vila,! M.! (2001).! MPTP:! a! review! of! its! mechanisms! of!neurotoxicity.!Clinical1Neuroscience1Research,!1(6),!407–418.!!
Ralph,!G.!S.,!Radcliffe,!P.!a,!Day,!D.!M.,!Carthy,! J.!M.,!Leroux,!M.!a,!Lee,!D.!C.!P.,!…!Azzouz,! M.! (2005).! Silencing! mutant! SOD1! using! RNAi! protects! against!neurodegeneration!and!extends!survival!in!an!ALS!model.!Nature1Medicine,!11(4),!429–33.!
Recchia,!A.,!Debetto,!P.,!Negro,!A.,!Guidolin,!D.,!Skaper,!S.!D.,!&!Giusti,!P.!(2004).!AlphaTsynuclein!and!Parkinson’s!disease.!FASEB1Journal :1Official1Publication1of1the1Federation1of1American1Societies1for1Experimental1Biology,!18(6),!617–26.!
Ribeiro,!C.!S.,!Carneiro,!K.,!Ross,!C.! a,!Menezes,! J.!R.!L.,!&!Engelender,!S.! (2002).!SynphilinT1! is! developmentally! localized! to! synaptic! terminals,! and! its!association! with! synaptic! vesicles! is! modulated! by! alphaTsynuclein.! The1Journal1of1Biological1Chemistry,!277(26),!23927–33.!!
Rodrigues,! M.,! &! Campos,! L.! C.! (2006).! Estratégia! para! o! tratamento! com!levodopa!na!doença!de!parkinson.!Revista1Analytica,!23,!44–51.!
Rogers,! N.,! Paine,! S.,! Bedford,! L.,! &! Layfield,! R.! (2010).! Review:! the! ubiquitinTproteasome! system:! contributions! to! cell! death! or! survival! in!neurodegeneration.!Neuropathology1and1Applied1Neurobiology,!36(2),! 113–24.!
Rooijen,!B.!van.!(2010).!Membrane!Interactions!of!Oligomeric!AlphaT!Synuclein :!Potential!Role!in!Parkinsons!Disease.!Current1Protein1and1…,!11(5),!334–342.!
Ross,! C.! a,! &! Pickart,! C.! M.! (2004).! The! ubiquitinTproteasome! pathway! in!Parkinson’s! disease! and! other! neurodegenerative! diseases.! Trends1 in1 Cell1Biology,!14(12),!703–11.!!
Referências Bibliográficas
95!
Ross,! C.! a,! &! Poirier,! M.! a.! (2005).! What! is! the! role! of! protein! aggregation! in!neurodegeneration?!Nature1Reviews.1Molecular1Cell1Biology,!6(11),!891–8.!!
Ross,!C.!a,!&!Smith,!W.!W.!(2007).!GeneTenvironment!interactions!in!Parkinson’s!disease.!Parkinsonism1&1Related1Disorders,!13(3),!S309–15.!!
Ross,! C.! a.,! &!Margolis,! R.! L.! (2005).! Neurogenetics:! insights! into! degenerative!diseases! and! approaches! to! schizophrenia.! Clinical1Neuroscience1 Research,!5(1),!3–14.!!
Rott,!R.,!Szargel,!R.,!Haskin,!J.,!Shani,!V.,!Shainskaya,!A.,!Manov,!I.,!…!Engelender,!S.!(2008).! Monoubiquitylation! of! alphaTsynuclein! by! seven! in! absentia!homolog!(SIAH)!promotes!its!aggregation!in!dopaminergic!cells.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!283(6),!3316–28.!!
Samii,!A.,!Jg,!N.,!&!Br,!R.!(2004).!Parkinson!’!s!disease.!Lancet,!363(9423),!1783–93.!
Santos,!G.,!Antunes,!L.,!Santos,!A.,!&!Bianchi,!M.!de!L.!(2009).!Coenzyme!Q!10!and!its!effects!in!the!treatment!of!neurodegenerative!diseases.!Brazilian1Journal1of1Pharmaceutical1Sciences,!45(4),!607–618.!
Satoh,!J.TI.,!&!Kuroda,!Y.!(2002).!A!putative!polymorphic!Val44Ala!variation!in!the!synphilinT1! gene! is! undetectable! in! Japanese! sporadic! Parkinson’s! disease!patients.!European1Journal1of1Neurology,!9(1),!15–18.!!
Serpell,!L.!C.,!Berriman,! J.,! Jakes,!R.,!Goedert,!M.,!&!Crowther,!R.!a.!(2000).!Fiber!diffraction!of!synthetic!alphaTsynuclein!filaments!shows!amyloidTlike!crossTbeta! conformation.! Proceedings1 of1 the1National1 Academy1 of1 Sciences1 of1 the1United1States1of1America,!97(9),!4897–902.!!
Shulman,!J.!M.,!De!Jager,!P.!L.,!&!Feany,!M.!B.!(2011).!Parkinson’s!disease:!genetics!and!pathogenesis.!Annual1Review1of1Pathology,!6,!193–222.!!
Shults,!C.!W.,!Oakes,!D.,!Kieburtz,!K.,!Beal,!F.,!Hass,!R.,!Plumb,!S.,!…!Lew,!M.!(2002).!Effects!of!Coenzyme!Q10!in!Early!Parkinson!Disease.!Arch1Neurol.,!59,!1541–1550.!
Silvestri,!L.,!Caputo,!V.,!Bellacchio,!E.,!Atorino,!L.,!Dallapiccola,!B.,!Valente,!E.!M.,!&!Casari,! G.! (2005).! Mitochondrial! import! and! enzymatic! activity! of! PINK1!mutants! associated! to! recessive! parkinsonism.!Human1Molecular1 Genetics,!14(22),!3477–92.!!
Smith,! P.! D.,! Crocker,! S.! J.,! JacksonTLewis,! V.,! JordanTSciutto,! K.! L.,! Hayley,! S.,!Mount,!M.!P.,!…!Park,!D.!S.!(2003).!CyclinTdependent!kinase!5!is!a!mediator!of! dopaminergic! neuron! loss! in! a! mouse! model! of! Parkinson’s! disease.!Proceedings1 of1 the1 National1 Academy1 of1 Sciences1 of1 the1 United1 States1 of1America,!100(23),!13650–5.!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 96!
Smith,!W.!W.,!Liu,!Z.,!Liang,!Y.,!Masuda,!N.,!Swing,!D.!a,!Jenkins,!N.!a,!…!Ross,!C.!a.!(2010).! SynphilinT1! attenuates! neuronal! degeneration! in! the! A53T! alphaTsynuclein! transgenic! mouse! model.! Human1 Molecular1 Genetics,! 19(11),!2087–98.!
Smith,!Y.,!Wichmann,!T.,!Factor,!S.!a,!&!DeLong,!M.!R.!(2012).!Parkinson’s!disease!therapeutics:! new! developments! and! challenges! since! the! introduction! of!levodopa.! Neuropsychopharmacology :1 Official1 Publication1 of1 the1 American1College1of1Neuropsychopharmacology,!37(1),!213–46.!!
Song,!D.!D.,!Shults,!C.!W.,!Sisk,!A.,!Rockenstein,!E.,!&!Masliah,!E.!(2004).!Enhanced!substantia! nigra! mitochondrial! pathology! in! human! alphaTsynuclein!transgenic!mice!after!treatment!with!MPTP.!Experimental1Neurology,!186(2),!158–72.!!
Souza,!J.!M.,!Giasson,!B.!I.,!Lee,!V.!M.,!&!Ischiropoulos,!H.!(2000).!ChaperoneTlike!activity!of!synucleins.!FEBS1Letters,!474(1),!116–9.!!
Spillantini,! M.,! Crowther,! R.! A.,! Jakes,! R.,! Hasegawa,! M.,! &! Goedert,! M.! (1998).!AlphaTSynuclein!in!filamentous!inclusions!of!Lewy!bodies!from!Parkinson!’!s!disease!and!dementia!with!Lewy!bodies.!Proc.1Natl.1Acad.1Sci.1USA,!95,!6469–6473.!
Stefanis,! L.! (2012).! αTSynuclein! in! Parkinson’s! disease.! Cold1 Spring1 Harbor1Perspectives1in1Medicine,!2(2),!a009399.!!
Stefanis,! L.,! Larsen,! K.! E.,! Rideout,! H.! J.,! Sulzer,! D.,! &! Greene,! L.! a.! (2001).!Expression!of!A53T!mutant!but!not!wildTtype!alphaTsynuclein!in!PC12!cells!induces!alterations!of! the!ubiquitinTdependent!degradation!system,! loss!of!dopamine! release,! and! autophagic! cell! death.!The1 Journal1of1Neuroscience :1The1Official1Journal1of1the1Society1for1Neuroscience,!21(24),!9549–60.!!
Stefanova,!N.,!Hainzer,!M.,!Stemberger,!S.,!CouillardTDesprés,!S.,!Aigner,!L.,!Poewe,!W.,! &!Wenning,! G.! K.! (2009).! Striatal! transplantation! for! multiple! system!atrophyTTare! grafts! affected! by! alphaTsynucleinopathy?! Experimental1Neurology,!219(1),!368–71.!!
Szargel,!R.,!Rott,!R.,!&!Engelender,!S.!(2008).!SynphilinT1!isoforms!in!Parkinson’s!disease:! regulation! by! phosphorylation! and! ubiquitylation.! Cellular1 and1Molecular1Life1Sciences :1CMLS,!65(1),!80–8.!!
Szargel,!R.,!Rott,!R.,!Eyal,!A.,!Haskin,!J.,!Shani,!V.,!Balan,!L.,!…!Engelender,!S.!(2009).!SynphilinT!1A! Inhibits! Seven! in!Absentia!Homolog! (! SIAH! )! and!Modulates!alphaT!!Synuclein!Monoubiquitylation!and!Inclusion!Formation.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!284(17),!11706–16.!
Takahashi,!M.,!Ko,!L.,!Kulathingal,!J.,!Jiang,!P.,!Sevlever,!D.,!&!Yen,!S.TH.!C.!(2007).!Oxidative! stressTinduced! phosphorylation,! degradation! and! aggregation! of!
Referências Bibliográficas
97!
alphaTsynuclein! are! linked! to! upregulated! CK2! and! cathepsin! D.! The1European1Journal1of1Neuroscience,!26(4),!863–74.!!
Takahashi,! T.,! Yamashita,! H.,! Nagano,! Y.,! Nakamura,! T.,! Kohriyama,! T.,! &!Matsumoto,!M.! (2006).! Interactions!of! SynphilinT1!with!phospholipids!and!lipid!membranes.!FEBS1Letters,!580(18),!4479–84.!!
Tanaka,!M.,!Kim,!Y.!M.,!Lee,!G.,!Junn,!E.,!Iwatsubo,!T.,!&!Mouradian,!M.!M.!(2004).!Aggresomes!formed!by!alphaTsynuclein!and!synphilinT1!are!cytoprotective.!The1 Journal1 of1 Biological1 Chemistry,! 279(6),! 4625–31.!doi:10.1074/jbc.M310994200!
Tanji,!K.,!Tanaka,!T.,!Mori,!F.,!Kito,!K.,!Takahashi,!H.,!Wakabayashi,!K.,!&!Kamitani,!T.!(2006).!NUB1!suppresses!the!formation!of!Lewy!bodyTlike! inclusions!by!proteasomal!degradation!of!synphilinT1.!The1American1Journal1of1Pathology,!169(2),!553–65.!!
Tanji,!K.,!Toki,!T.,!Tamo,!W.,!Imaizumi,!T.,!Matsumiya,!T.,!Mori,!F.,!…!Wakabayashi,!K.!(2003).!Glycogen!synthase!kinaseT3!b!phosphorylates!synphilinT1!in!vitro.!Neurophatology,!23,!199–202.!
Tatsch,!M.,!Nitrini,! R.,! &!Neto,!M.! (2002).!Demência! com! corpúsculos! de! Lewy:!uma! entidade! distinta! com! tratamento! específico?! Revista1 Brasileira1 de1Psiquiatria,!24(3),!152–156.!!
Teive,!H.!(1998).!O!papel!de!Charcot!na!doença!de!Parkinson.!Arq1Neuropsiquiatr,!56(1),!141–145.!!
Teive,!H.,!&!Menezes,!M.!(2003).!Etiopatogenia!da!doença!de!parkinson.!Doença1de1Parkinson.1Rio1de1Janeiro:1…,!13(4),!201–214.!!
Thomas,! K.! J.,! McCoy,! M.! K.,! Blackinton,! J.,! Beilina,! A.,! van! der! Brug,! M.,!Sandebring,! A.,! …! Cookson,! M.! R.! (2011).! DJT1! acts! in! parallel! to! the!PINK1/parkin! pathway! to! control! mitochondrial! function! and! autophagy.!Human1Molecular1Genetics,!20(1),!40–50.!
Tokuda,!T.,!Salem,!S.,!Allsop,!D.,!Mizuno,!T.,!Nakagawa,!M.,!Locascio,!J.,!…!ElTAgnaf,!O.! M.! (2006).! Decreased! αTsynuclein! in! cerebrospinal! fluid! of! aged!individuals! and! subjects! with! Parkinson! ’! s! disease.! Biochemical1 and1Biophysical1Research1Communications,!349(1),!162–166.!
Tompkins,! M.! M.,! &! Hill,! W.! D.! (1997).! Contribution! of! somal! Lewy! bodies! to!neuronal!death.!Brain1Research,!775,!24–29.!
Trinh,! J.,! &! Farrer,! M.! (2013).! Advances! in! the! genetics! of! Parkinson! disease.!Nature1Reviews.1Neurology,!9(8),!445–54!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 98!
Tsai,!S.TC.,!&!Yuan,!R.TY.!(2012).!Medication!Management!of!Parkinson’s!Disease:!Early! versus! Advanced! Stages.! Journal1of1Experimental1&1Clinical1Medicine,!4(4),!209–214.!
Tsigelny,!I.!F.,!Sharikov,!Y.,!Wrasidlo,!W.,!Gonzalez,!T.,!Desplats,!P.!a,!Crews,!L.,!…!Masliah,! E.! (2012).! Role! of! αTsynuclein! penetration! into! the!membrane! in!the! mechanisms! of! oligomer! pore! formation.! The1 FEBS1 Journal,! 279(6),!1000–13.!!
Uéda,!K.,! Fukushima,!H.,!Masliah,!E.,! Xia,! Y.,! Iwai,! a,! Yoshimoto,!M.,!…!Saitoh,!T.!(1993).!Molecular!cloning!of!cDNA!encoding!an!unrecognized!component!of!amyloid! in! Alzheimer! disease.! Proceedings1 of1 the1 National1 Academy1 of1Sciences1of1the1United1States1of1America,!90(23),!11282–6.!
Uversky,!V.,!&!Eliezer,!D.!(2009).!Biophysics!of!Parkinsons!Disease:!Structure!and!Aggregation! ofTSynuclein.!Current1Protein1and1Peptide1Science,!10(5),! 483–499.!!
Uversky,! V.! N.! (2007).! Neuropathology,! biochemistry,! and! biophysics! of! alphaTsynuclein!aggregation.!Journal1of1Neurochemistry,!103(1),!17–37.!!
Van!der!Putten,!H.,!Wiederhold,!K.!H.,!Probst,!a,!Barbieri,!S.,!Mistl,!C.,!Danner,!S.,!…!Bilbe,!G.!(2000).!Neuropathology!in!mice!expressing!human!alphaTsynuclein.!The1 Journal1 of1 Neuroscience :1 The1 Official1 Journal1 of1 the1 Society1 for1Neuroscience,!20(16),!6021–9.!
Van!Rooijen,!B.!D.,!Claessens,!M.!M.!a!E.,!&!Subramaniam,!V.! (2010).!Membrane!Permeabilization! by! Oligomeric! αTSynuclein:! In! Search! of! the! Mechanism.!PloS1One,!5(12),!e14292.!!
Vekrellis,!K.,!Xilouri,!M.,!Emmanouilidou,!E.,!Rideout,!H.! J.,!&!Stefanis,!L.! (2011).!Pathological! roles! of! αTsynuclein! in! neurological! disorders.! Lancet1Neurology,!10(11),!1015–25.!
Venda,!L.!L.,!Cragg,!S.!J.,!Buchman,!V.!L.,!&!WadeTMartins,!R.!(2010).!αTSynuclein!and! dopamine! at! the! crossroads! of! Parkinson’s! disease.! Trends1 in1Neurosciences,!33(12),!559–68.!doi:10.1016/j.tins.2010.09.004!
Vila,! M.,! &! Przedborski,! S.! (2004).! Genetic! clues! to! the! pathogenesis! of!Parkinson’s!disease.!Nature1Medicine,!101Suppl(July),!S58–62.!!
Vila,!M.,!Vukosavic,!S.,!JacksonTLewis,!V.,!Neystat,!M.,!Jakowec,!M.,!&!Przedborski,!S.! (2001).! αTSynuclein! UpTRegulation! in! Substantia! Nigra! Dopaminergic!Neurons!Following!Administration!of!the!Parkinsonian!Toxin!MPTP.!Journal1of1Neurochemistry,!74(2),!721–729.!!
Volles,!M.!J.,!&!Lansbury,!P.!T.!(2003).!Zeroing!in!on!the!pathogenic!form!of!alphaTsynuclein! and! its! mechanism! of! neurotoxicity! in! Parkinson’s! disease.!Biochemistry,!42(26),!7871–8.!
Referências Bibliográficas
99!
Volpicelli,! L.,! Luk,! K.,! &! Patel,! T.! (2011).! Exogenous! αTsynuclein! fibrils! induce!Lewy! body! pathology! leading! to! synaptic! dysfunction! and! neuron! death.!Neuron,!72(1),!57–71.!
Von!Campenhausen,! S.,! Bornschein,! B.,!Wick,!R.,! Bötzel,! K.,! Sampaio,! C.,! Poewe,!W.,!…!Dodel,!R.! (2005).!Prevalence!and! incidence!of!Parkinson’s!disease! in!Europe.!European1Neuropsychopharmacology :1 The1 Journal1 of1 the1European1College1of1Neuropsychopharmacology,!15(4),!473–90.!!
Wakabayashi,!K.,!Engelender,! S.,!Tanaka,!Y.,! Yoshimoto,!M.,!Mori,! F.,!Tsuji,! S.,!…!Takahashi,! H.! (2002).! Immunocytochemical! localization! of! synphilinT1,! an!alphaTsynucleinTassociated! protein,! in! neurodegenerative! disorders.! Acta1Neuropathologica,!103(3),!209–14.!!
Wakabayashi,! K.,! Engelender,! S.,! Yoshimoto,! M.,! Ross,! C.! A.,! &! Takahashi,! H.!(2000).!SynphilinT1!is!present!in!Lewy!Bodies!in!Parkinson’s!Diesease.!Ann1Neurol,!47(4),!521–523.!
Waxman,! E.,! &! Giasson,! B.! (2009).! Molecular! mechanisms! of! αTsynuclein!neurodegeneration.! Biochimica1 et1 Biophysica1 Acta1 (BBA)-Molecular1 …,!1792(7),!616–624.!!
Winner,! B.,! &! Jappelli,! R.! (2011).! In! vivo! demonstration! that! αTsynuclein!oligomers!are!toxic.!PNAS,!108(10),!4194–4199.!!
Wirdefeldt,! K.,! Adami,! H.TO.,! Cole,! P.,! Trichopoulos,! D.,! &! Mandel,! J.! (2011).!Epidemiology!and!etiology!of!Parkinson’s!disease:!a!review!of!the!evidence.!European1Journal1of1Epidemiology,!261Suppl11,!S1–58.!!
Withers,! G.! S.,! George,! J.! M.,! Banker,! G.! a,! &! Clayton,! D.! F.! (1997).! Delayed!localization! of! synelfin! (synuclein,! NACP)! to! presynaptic! terminals! in!cultured! rat! hippocampal! neurons.! Brain1 Research.1 Developmental1 Brain1Research,!99(1),!87–94.!!
WoodTKaczmar,! a,! Gandhi,! S.,! &! Wood,! N.! W.! (2006).! Understanding! the!molecular! causes! of! Parkinson’s! disease.! Trends1 in1 Molecular1 Medicine,!12(11),!521–8.!!
Xie,!A.,!Yu,!Y.,!&!Xu,!X.!(2010).!SynphilinT1!siRNA!increases!superoxide!dismutase!expression! in! a! rat! model! of! Parkinson’s! disease*�.!Neural1 Regeneration1Research,!5(12),!885–889.!!
Xie,!Y.TY.,!Zhou,!C.TJ.,!Zhou,!Z.TR.,!Hong,!J.,!Che,!M.TX.,!Fu,!Q.TS.,!…!Hu,!H.TY.!(2010).!Interaction! with! synphilinT1! promotes! inclusion! formation! of! alphaTsynuclein:!mechanistic!insights!and!pathological!implication.!FASEB1Journal :1Official1Publication1of1 the1Federation1of1American1Societies1 for1Experimental1Biology,!24(1),!196–205.!!
Mecanismos Moleculares envolvendo a alfa-Sinucleína e a Sinflina-1 na Doença de Parkinson !
! 100!
Xiromerisiou,! G.,! &! Dardiotis,! E.! (2010).! Genetic! basis! of! Parkinson! disease.!Neurosurgical1…,!28(1),!E7.!
Xu,! J.,! Kao,! S.TY.,! Lee,! F.! J.! S.,! Song,! W.,! Jin,! L.TW.,! &! Yankner,! B.! a.! (2002).!DopamineTdependent! neurotoxicity! of! alphaTsynuclein:! a! mechanism! for!selective! neurodegeneration! in! Parkinson! disease.! Nature1 Medicine,! 8(6),!600–6.!!
Yao,!Z.,!Gandhi,!S.,!Burchell,!V.!S.,!PlunTFavreau,!H.,!Wood,!N.!W.,!&!Abramov,!A.!Y.!(2011).!Cell!metabolism!affects! selective!vulnerability! in!PINK1Tassociated!Parkinson’s!disease.!Journal1of1Cell1Science,!124(Pt!24),!4194–202.!!
Yu,!S.,!Zuo,!X.,!Li,!Y.,!Zhang,!C.,!Zhou,!M.,!Zhang,!Y.!A.,!…!Chan,!P.!(2004).!Inhibition!of! tyrosine! hydroxylase! expression! in! alphaTsynucleinTtransfected!dopaminergic!neuronal!cells.!Neuroscience1Letters,!367(1),!34–9.!!
Zaarur,! N.,! Meriin,! A.! B.,! Gabai,! V.! L.,! &! Sherman,! M.! Y.! (2008).! Triggering!aggresome! formation.! Dissecting! aggresomeTtargeting! and! aggregation!signals! in!synphilin!1.!The1Journal1of1Biological1Chemistry,!283(41),!27575–84.!!
Zhang,!J.,!Hattori,!N.,!Leroy,!E.,!Morris,!H.!.,!Kubo,!S.TI.,!Kobayashi,!T.,!…!Mizuno,!Y.!(2000).!Association!between!a!polymorphism!of!ubiquitin!carboxyTterminal!hydrolase!L1!(UCHTL1)!gene!and!sporadic!Parkinson’s!disease.!Parkinsonism1&1Related1Disorders,!6(4),!195–197.!!
!