GLICOSE MONOREAGENTEK082INSTRUÇÕES DE USO

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Bioclin

FINALIDADEMétodo para a determinação da Glicose. Teste enzimático colorimétrico,somente para uso diagnóstico in vitro.

PRINCÍPIO DE AÇÃOMetodologia: Enzimática Colorimétrica - GOD - PAP. A Glicose é oxidadaenzimaticamente pela Glicose-oxidase (GOD) de acordo com a seguintereação:

EQUIPAMENTOS E INSUMOS OPERACIONAISEspectrofotômetro ou colorímetro, banho-maria (37º C), relógio ou cro-nômetro, pipetas, tubos de ensaio. Encontram-se no mercado especi-alizado de artigos para Laboratórios de Análises Clínicas.

CONDIÇÕES DE ARMAZENAMENTO E TRANSPORTEA temperatura de armazenamento deverá ser de 2 a 8 ºC. O transporte,em temperaturas entre 15 e 30 ºC, não deverá exceder 72 (setenta eduas) horas. Manter ao abrigo da luz e evitar umidade.

CUIDADOS ESPECIAIS1 - Somente para uso diagnóstico in vitro;2 - Seguir com rigor a metodologia proposta para obtenção de resulta-dos exatos;3 - A água utilizada na limpeza do material e na preparação dos reagentesdeve ser recente e isenta de agentes contaminantes;4 - Colunas deionizadoras saturadas liberam água alcalina, ions diver-sos e agentes oxidantes e redutores, que podem alterar de forma signi-ficativa os resultados;5 - O nível de água no banho-maria deve ser superior ao nível dosreagentes nos tubos de ensaio;6 - Manusear com cuidado os reagentes. O Reagente Nº 1 contém Azidasódica, irritante para pele e mucosas; O Reagente Nº 2 contém Ácidobenzóico, causador de irritações alérgicas cutâneas em pessoas sen-síveis;7 - O desenvolvimento de coloração rósea no reagente Nº 1 nãointerfere na qualidade e estabilidade do reagente, desde queseja utilizado o Branco correspondente e dosagens periódicasdo padrão.8 - Determinar o fator periodicamente e a cada lote do produto;9 - O descarte do material utilizado deverá ser feito obedecendo oscritérios de biossegurança de acordo com a legislação vigente.

AMOSTRASPlasmas (fluoretado), soro, líquor; líquido (ascítico, pleural e sinovial).O uso do anticoagulante Fluoreto - Bioclin é recomendado por ser inibidorda glicólise. Usar 1 gota para cada 3 mL de sangue. O soro só poderáser usado se for centrifugado e dosado imediatamente após a colheita.Em outros líquidos biológicos adicionar um inibidor da glicólise na mesmaproporção descrita para o sangue, centrifugando a amostra antes deiniciar a dosagem.

DESCRIÇÃO DO PROCESSOTécnica Ponto FinalMarcar 3 tubos de ensaio: B (Branco), A (Amostra), P (Padrão) e proce-der como a seguir:

Homogeneizar bem e colocar em banho-maria 37 ºC por 10 minutos.Ler a absorbância da Amostra e do Padrão em 505 nm (490-550 nm),acertando o zero com o Branco. A cor é estável por 30 minutos.

INTERFERENTESAmostras com concentração até 20 mg/dL de Bilirrubina, 750 mg/dL deTriglicérides e 160 mg/dL de Hemoglobina não produzem interferênciasignificativa. Nos casos de interferências produzidas pela amostra, re-alizar também um Branco da Amostra, a fim de minimizar a ação dosinterferentes. Proceder como a seguir:Marcar 1 tubo como Branco da Amostra e colocar 1,0 mL de Cloreto desódio 0,85% com 10 µL da Amostra. Determinar a sua absorbância em490-550 nm, acertando o zero com água destilada ou deionizada.Subtrair a absorbância assim obtida, da absorbância do tubo da Amos-tra. Calcular a concentração multiplicando o resultado pelo Fator decalibração.O uso de medicamentos altamente redutores como o Ácido ascórbico(Vitamina C) interferem na reação, pois competem com o consumo deH2O2, fornecendo valores falsamente diminuídos. Por esta razão, deve-se suspender o seu uso pelos menos 12 horas antes da coleta daamostra.

DESCRIÇÃO DOS CÁLCULOSMétodo Ponto Final

Glicose (mg/dL) = Absorbância da amostra x 100Absorbância do padrão

Exemplo:Absorbância da amostra = 0,347Absorbância do padrão = 0,350

Glicose (mg/dL) = 0,347 x 100 = 990,350

Como a reação segue a Lei de Lambert-Beer, o Fator de calibração podeser usado.

Fator de calibração = Concentração do padrão (100 mg/dL)Absorbância do padrão

mg/dL = Absorbância da amostra x Fator de calibração

Exemplo:Fator de calibração = 100 = 286

0,350

REAGENTESReagente Nº 1 - Reagente Enzimático - conservar entre 2 e 8º C.Contém: Tampão (pH 7,0) 100 mmol/L, Fenol 2 mmol/L, 4- Aminoantipirina0,3 mmol/L, Azida sódica 8 mmol/L, Glicose Oxidase > 10.000 U/L,Peroxidase > 700 U/L.Reagente Nº 2 - Padrão - conservar entre 2 e 8º C, bem vedado.Contém: Glicose 100,0 mg/dL (5,56 mmol/L) Ácido benzóico 20,47 mmol/L. Em baixas temperaturas o Ácido benzóico pode precipitar, fato quenão interfere na qualidade do Padrão.

APRESENTAÇÃO

Glicose + O2 + H2O Ácido Glucônico + H2O2

GOD

O Peróxido de hidrogênio, em presença da Peroxidase (POD) reage coma 4 Aminoantipirina e Fenol, formando um cromógeno vermelho cerejacuja intensidade de cor é proporcional à concentração de Glicose.

Reagentes

Reagente Nº 1

Reagente Nº 2

K082-1 K082-2 K082-3

Vo lume250 mL

3 mL

2 x 250 mL

3 mL

4 x 250 mL

3 mL

Branco Padrão AmostraAmostra

Reagente Nº 2Reagente Nº 1

- -- -

1,0 mL

- -10 µL1,0 mL

10 µL- -

1,0 mL

Os resultados serão expressos em mg/dL.Glicose (mg/dL) = 0,347 x 286 = 99

A reação é linear até 500 mg/dL. Para amostras com valores acima de500 mg/dL ou densidade óptica acima de 0,8, diluir a amostra com Cloretode sódio 0,85%, repetir a dosagem e multiplicar o resultado obtido pelofator de diluição.

LIMITAÇÕES DO PROCESSOO método proposto não é indicado para dosagem de Glicose na urina.

CONTROLE INTERNO DE QUALIDADEDeve ser prática rotineira do Laboratório Clínico o uso de soro controlepara checar a precisão e exatidão das dosagens. Deve ser de 5% oerro máximo permitido em relação aos valores pré-estabelecidos paraos controles.

VALORES DE REFERÊNCIAOs valores de referência em mg/dL, para o presente método, foramobtidos através da determinação de Glicose em populações sadias dosexo masculino e feminino.Plasma ....................................................... 60 a 99 mg/dLLíquor ......................................................... 50 a 70 mg/dLRecém-nascidos a termo .......................... 30 a 80 mg/dLPrematuros ................................................ 20 a 50 mg/dLPara converter os valores de mg/dL em mmol/L ( SI ) multiplicar por0,0556.Estes valores devem ser usados como orientação, sendo que cadalaboratório deverá criar sua faixa de valores de referência, de acordocom a população atendida.

DESEMPENHO DO PRODUTOExatidãoRECUPERAÇÃOA análise de recuperação foi feita com 05 determinações de amostras.As exatidões foram calculadas e se encontraram em boa concordânciacom os valores de referência, obtendo uma recuperação entre 94% e104%.

COMPARAÇÃO DE MÉTODOS E ESPECIFICIDADE METODOLÓGICAO Kit Glicose Monoreagente Bioclin foi comparado com outro métodopara dosagem de glicose comercialmente disponível. Foram realizadas07 análises e os resultados foram avaliados. A equação linear obtida foiY = 0,9755X + 0,9991 e o coeficiente de correlação = 0,999053.Com estes resultados pode-se concluir que o kit apresenta boaespecificidade metodológica.

PrecisãoREPETITIVIDADEA repetitividade refere-se a 20 determinações sucessivas de Glicose,utilizando-se 3 amostras com concentrações diferentes, encontrando-se os seguintes resultados:

REPRODUTIBILIDADE:A reprodutividade refere-se a 20 determinações de Glicose, em 3 diasdiferentes, com 3 amostras de concentrações diferentes, encontrando-se os seguintes resultados:

Sensibil idadeA sensibilidade foi calculada a partir de 20 determinações de uma amos-tra isenta de glicose. A média de 0,4 mg/dL com desvio padrão de 0,503mg/dL. A sensibilidade, que indica o limite de detecção do Método,corresponde a 3 vezes o Desvio Padrão = 1,508 mg/dL.

Significado DiagnósticoA homeostase glicêmica é controlada pela ação de diversos hormônios,especialmente a insulina, que mantém o equilíbrio da concentração deglicose. Alterações hormonais e outros fatores levam a variações nestahomeostase, desencadeando hiper e hipoglicemia.A hiperglicemia ocorre em vários tipos de diabetes mellitus, onde sãofreqüentes retinopatias, lesões renais, neuropatias e aterosclerose. Odiabetes mellitus é classificado em: diabetes mellitus insulino dependen-te (Tipo I), diabetes mellitus insulino não dependente (Tipo II), diabetesmellitus associado a certas condições e síndromes (classificado anteri-ormente como diabetes secundário) e diabetes gestacional.Nas Hipoglicemias (HG) os níveis glicêmicos que levam às suas mani-festações são extremamente variáveis. As manifestações podem ocor-rer no jejum ou pós prandial. Ocorre HG de jejum no insulinoma, tumoresnão pancreáticos, doenças hepáticas, hipoadrenalinismo (doença deAddison), hipopituitarismo (doença de Simmond), enfermidade doarmazenamento retardado do glicogênio (doença de von Gierke). Ahipoglicemia pós-prandial ocorre devido a causa reativa (sintomas deHG 1 a 3 horas após a refeição); podendo ainda ser de origem alimentarou em conseqüência do diabetes mellitus Tipo II e de intolerância à Glicose.

NÚMERO DE TESTESK082-1 - 250 Testes / 10 µL de amostra/1 mL de ReagenteK082-2 - 500 Testes / 10 µL de amostra/1 mL de ReagenteK082-3 - 1000 Testes / 10 µL de amostra/1 mL de Reagente

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS1 - TRINDER, P., Ann. Clin. Biochem., 6-24, 1969.2 - TONKS, D. B., Quality Control in Clinical Laboratories, 1983.3 - LOTT, J. A.; TURNER, K., Clin. Chem., 1987, 21:1754, 1970.4 - CARL, A. B. and EDWARD R. A., Tietz Textbook of Clinical Chem. 2nded., 928-997,5 - Quibasa: Dados do Departamento de Pesquisa e Desenvolvimento.

GARANTIA DE QUALIDADEAntes de serem liberados para o consumo, todos os reagentes Bioclinsão testados pelo Departamento de Controle de Qualidade. A qualidadedos reagentes é assegurada até a data de validade mencionada naembalagem de apresentação, desde que armazenados e transportadosnas condições adequadas.

DADOS DO FABRICANTEQUIBASA QUÍMICA BÁSICA LtdaRua Teles de Menezes, 92 - Santa BrancaCEP 31565-130 - Belo Horizonte - MG - BrasilTel.: (31) 3439.5454 - Fax (31) 3439.5455e-mail - bioclin@bioclin.com.brwww.bioclin.com.brCNPJ: 19.400.787/0001-07 - Indústria Brasileira

ATENDIMENTO AO CONSUMIDORServiço de Assessoria ao Cliente Tel.: 0800 031 5454.e-mail: sac@bioclin.com.br

ANVISA: 10269360136.

Revisão: Fevereiro/09

Amostra1

Amostra2

Amostra3

Concentração Média (mg/dL)Desvio Padrão (mg/dL)Coeficiente de Variação (%)

66,850,81271,2157

103,503,90003,7682

91,751,61821,7637

Amostra1

Amostra2

Amostra3

Conc. Média / dia (mg/dL)Desvio Padrão (mg/dL)Coeficiente de Variação (%)

68,771,66012,4141

103,320,64490,6242

91,922,80373,0502