Dimitrius Leonardo Pitol PhD FORP/USP · Método Quantitativo •Pegar 5ml de Descalcificador do...
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Dimitrius Leonardo Pitol PhD
FORP/USP
XIX Congresso Brasileiro de Histotecnologia
XIX Congresso Brasileiro de Histotecnologia
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COROA
POLPA
DENTINA
Osso Cortical
ou
Compacto ou
Denso
Medula Óssea
vermelha
Osso Trabeculado
ou Esponjoso
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Osso Cortical Osso trabecular
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Tecido Mineralizado
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33% de Matriz Orgânica
28% Colágeno do Tipo I
5% Osteonectina Osteocalcina
Proteoglicanas Sialoproteína
Proteína Morfogenética Óssea
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•Cálcio
• Fosfato
•Magnésio
•Potássio
• Sódio
•Citrato
•Matriz inorgânica
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Métodos de descalcificação
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• Soluções ácidas diluídas.
• Soluções quelantes.
•Misturas de soluções acidas + soluções quelantes.
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Mecanismo de ação dos agentes descalcificadores
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Ca++
Ca++
Ca++
Solução descalcificadora
Àcido (H+)
H3PO4 (acido fosfórico) + cloreto de cálcio + água
Ca++(PO4)6 (OH)2
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Tempo para a troca do descalcificador
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Pitol, et al.; Int.J.Morphol 25(2): 309 – 313, 2007
Descalcificadores mais utilizados
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• Acido nítrico 5%.
• Acido fórmico + citrato de sódio.
• EDTA (ácido etileno-diamino-tetracético).
• ETDA (tartarato de sódio e potássio, tartarato de sódio Hcl.
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ETDA
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EDTA. 0,7g
Tartarato de sódio e potássio. 8g
Tartarato de sódio. 0.14g
Hcl. 120ml
H2O destilada. 900ml
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FÊMUR ETDA DESCALCIFICADO EM 24 HORAS
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ETDA EDTA
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Cuidados com a descalcificação
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•Material bem fixado.
•Concentração.
•Volume do descalcificador.
•Trocas constantes.
•Ponto Ideal.
•Neutralizar o descalcificador.
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Como saber o ponto ideal da
descalcificação ?
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Métodos mais utilizados
•Método radiográfico.
• Flexibilidade do tecido.
•Utilização de alfinete.
•Método quantitativo.
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Método Quantitativo
• Pegar 5ml de Descalcificador do fundo do Frasco.
• Acrescentar 1 ml de Amônia concentrada (Misturar).
• Acrescentar 0,1ml de Oxalato de amônia.
• Deixar por 10 minutos para verificar a presença de cálcio.
• Se não formar precipitado acrescentar mais 0,1ml , com intervalo de 10 minutos.
• Até no Máximo 0,6 ml .
• Se não formar precipitado o tecido e considerado descalcificado.
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Métodos para aceleras as descalcificação
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Métodos de inclusão
Parafina (Histosec Merck)
Historesina ( Leica Historesin)
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Métodos de coloração
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Hematoxilina Eosina
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Tricômico de Masson XIX Congresso Brasileiro de Histotecnologia
ODONTOBLASTOS
DENTINA
POLPA DENTÁRIA
Picro Sirus
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Azul de Toluidina
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TRAP
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Medula Óssea
Biopsia de medula óssea por trefina.
Geralmente fixação bem.
São amostras pequenas que facilitam a penetrabilidade
do fixador.
E também a ação dos agentes descalcificadores.
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EDTA Entretanto os protocolos
com EDTA em biopsia de medula variam de 48 a 72 horas
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Neat MJ, et al. J Clin Pathol 2013;66:54–57.
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FIGURE 2. Giemsa stain showing morphologic details of a trephine decalcified by
ultrasound and a 10% EDTA solution.
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Acido Nítrico
FIGURE 3. A, Homogenous Mib1 staining in an EDTA-decalcified sample. B, Heterogenous Mib1 staining in an acid-decalcified sample of the same patient.
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Conclusões Oscilação na forma de ultra-som, acelera a penetração de
agentes quelantes dentro do tecido ósseo, conduzindo a uma
rápida destruição de estruturas cristalinas como fosfato de
cálcio, de magnésio fosfato, cálcio e carbonato.
Formalina tamponada, seguido por uma descalcificação ultra-
sons baseados em EDTA, significativamente acelera o
processamento de medula óssea
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Processamento de Unhas
As unhas são placas de células queratinizadas
localizadas na superfície dorsal das falanges terminais
dos dedos.
A porção proximal da unha é chamada de raiz da unha O
epitélio da dobra de pele que cobre a raiz da unha
consiste nas camadas usuais da epiderme.
A camada córnea desse epitélio forma a cutícula da
unha.
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É na raiz da unha que se observa a sua formação,
graças a um processo de proliferação e diferenciação
das células epiteliais aí colocadas, que gradualmente se
queratinizam , formando uma placa córnea.
A unha é constituída essencialmente por escamas
córneas compactas, fortemente aderidas umas às
outras.
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Processamento de unhas
Fixar com formol 10 %.
Duas lavagens rápida com água destilada.
Passar alguns segundos na solução de 40% de hidróxido de sódio.
Se for uma unha com lesões passa mais alguns segundos ate a unha ficar clara.
Lavar em H2O.
Desidratar e emblocar em parafina
Cortar o mais rápido possível, se não a rigidez retorna .
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Outra maneira de processamento
Não Usar fixação com formalina.
Processamento automatizado (ganha tempo).
Depois do material emblocado, colocar os
blocos de cabeça para baixo em uma superfície
gelada ( 1c°) em uma solução de hidróxido de
amônia a 10%, por trinta minuto.
Corte 2 μm.
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Research | Dermatol Pract Concept 2013;3(3):4
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Obrigado !!!
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