Diagnóstico do carcinoma gastrointestinal pela detecção plasmática da heparanase

AC. GIOVANNA CANATO TOLOI

ORIENTADOR: PROF. DR. JAQUES WAISBERG

VII CICI – VII Congresso de Iniciação Científica do IAMSPE

INTRODUÇÃO

Introdução Carcinomas gastrointestinais

◦Alta incidência◦Alta morbidade◦Alta mortalidade

◦ Principais causas de morte relacionadas ao câncer◦Metástases

◦ Principal causa de morte em doentes com tumor

IntroduçãoMetástase

Mecanismo◦ Interação entre matriz extracelular e membrana

basal◦ Membrana basal: colágeno tipo IV, laminina e

proteoglicanos de heparan sulfato◦ Invasão: metaloproteinases e enzimas

(heparanase)

Introdução Heparanase

◦ Endo-beta-glucuronidase◦ Degradação da cadeia de proteoglicanos de heparan

sulfato ◦ Efeito modulador multifuncional das células neoplásicas◦ Papel na progressão de tumores do esôfago, estômago e

cólon◦ Expressão relacionada ao prognóstico do carcinoma

gastrointestinal

Introdução Heparanase-1 (HPSE1) e Heparanase-2 (HPSE2)◦Codificadas por genes diferentes◦Distribuição tecidual e celular distintas◦ Identidade global: 35%

Introdução◦ HPSE1

◦ Associada ao aumento potencial dos tumores e metástases◦ Formas

◦ Superficie celular◦ 65kDa◦ Proteína percusora sem atividade enzimática aparente

◦ Enzima ativa◦ 50kDa◦ Enzima madura

Introdução◦HPSE2: papel clínico pouco elucidado

◦ Sem atividade enzimática◦ Poucos dados sobre funções no

desenvolvimento tumoral

Introdução Catepsina B

◦ proteinase cisteina lisossômica◦ alguns estudos: superexpressão desta enzima em

tumores malignos◦ pode facilitar a invasão por dois processos:

◦ degradação direta dos componentes da matriz extracelular

◦ ativação de outras proteases

MÉTODO

Critérios de elegibilidade

Idade ≥ 18 anos Diagnóstico histopatológico confirmado de carcinoma gastrintestinal Sem quimioterapia ou radioterapia Sem tratamento prévio de outra neoplasia Ausência de doença aguda associada

Pacientes◦ Grupo Paciente: 21 indivíduos operados de

carcinoma gastrointestinal primário sem doença metastática◦ 16 (76,2%) homens e 5 (23,8%) mulheres ◦ Média de idade: 68,7 ± 10,0 anos (50 a 82 anos)

◦ Grupo Controle: 43 indivíduos saudáveis◦ 32 (74,4%) homens e 11 (25,6%) mulheres◦ Média de idade: 52,9 ± 5,0 anos (46 a 65 anos)

Distribuição pela localização

Distribuição pelo grau de diferenciação

Método Amostras de plasma e de células mononucleares de ambos os grupos de indivíduos

Proteínas HPSE1 e HPSE2 identificadas e quantificadas pelo método Western Blot

Expressão de mRNA analisada com PCR tempo real

Atividade enzimática da HPSE1 mensurada com heparan sulfato biotinilado e ensaio de ELISA-like• Atividade da Catepsina B foi mensurada por

espectrofluorometria e os estudos foram feitos triplicados

Resultados

Resultados

Resultados

ResultadosA

tivi

dad

e C

atep

sin

a B

Conclusão

Conclusão Houve um aumento significativo na atividade enzimática da HPSE1 e Catepsina B no plasma do grupo paciente.

Este estudo com teste de plasma e sangue não invasivo demonstrou a superexpressão das isoformas combinadas de HPSE1 e HPSE2 no carcinoma gastrointestinal como também um aumento da atividade da HPSE1 e da Catepsina B.

Estes resultados, combinados com os resultados de outros estudos são encorajadores para investigar sua possível contribuição para diagnóstico e tratamento do carcinoma gastrointestinal.