Determinação de cloroacetaldeído em plasma por HPLC com detecção por fluorescência PVC.
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Determinação de Determinação de cloroacetaldeído em plasma cloroacetaldeído em plasma por HPLC com detecção por por HPLC com detecção por
fluorescênciafluorescência
ClOCl Cl
Cl n
ClPVC
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Cl
Angiosarcoma hepático
O cloreto de vinila é um importante precursor químico usado na indústria de plástico PVC (embalagens, tubulações, cartões de crédito, interior de automóveis, etc.)
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Guengerich, F.P. (1992) Chem. Res. Toxicol., 5, 2-5.
XP450
haleto de vinila
XO
halooxirano
N
N
O
NH2
O
dR
+
- X-
N
N
O
NH2
dR - H+
- H2ON
N
O
N
dR
3,N4--dCyd
XO
haloacetaldeído
N
N
O
NH2
dR
N
N
O
NH
X
OH
dR
- X-
N
N
O
NH
OH
dR
- H2O
N
N
O
N
dR
+- H+
N
N
O
N
dR
3,N4--dCyd
dR= 2’-desoxirribose
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NN
NN
O
N
dR
N2,3--dGuo
NN
NN
N
dR
1,N6--dAdo
NN
NN
O
N
1,N2--dGuo
dR
N
N
O
N
dR
3,N4--dCyd
Carcinógenos
Cloreto de vinilaCl
H
H
H
Carbamato de etila (uretano)
CH3 O
O
NH2
P450CH2 O
O
NH2
Carbamato de vinila
dR= 2’-desoxirribose
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Pandya, G.A. e Moriya, M (1996) Biochemistry, 35, 11487 - 11492; Moriya, M. et al. (1994) Biochemistry, 91, 11899 – 11903.
dR= 2’-desoxirribose
GTransição
TransversãoT e C
TTransição
TransversãoAN
N
O
N
dR
3,N4-dC
NN
NN
N
dR
1,N6-dA
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Singer, B. et al. (1987) Carcinogenesis, 8, 745 - 747; Cheng e, K.C. et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88, 9974 - 9978. Langouët, S. et al. (1997), Biochemistry, 36, 6069 – 6079 e. (1998), Biochemistry, 37, 5184 - 5193.
dR= 2’-desoxirribose
ATransição
ATransição
TransversãoT
NN
NN
O
N
dR
N2,3--dGuo
NN
NN
O
N
1,N2--dGuo
dR
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Bartsch, H. et al. (1994) Drug Metabol. Rev., 26, 349 - 371.
• Ativação do protooncogene Ki-ras
por substituições:
GC AT na base 2 do codon 13 ou
GC TA na base 2 do codon 12
Angiosarcoma hepático
Humano
Cloreto de vinila
Cl
H
H
H+
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Análises ToxicológicasAnálises Toxicológicas
Necessidade de uso de ferramentas da Química Analítica (métodos específicos, precisos e suficientemente sensíveis) para a avaliação qualitativa e/ou quantitativa do toxicante.
Detecção de algum parâmetro relacionado à Detecção de algum parâmetro relacionado à exposição ao toxicante em substratos tais exposição ao toxicante em substratos tais como fluidos e/ou tecidos orgânicos com o como fluidos e/ou tecidos orgânicos com o objetivo de diagnosticar as intoxicações.objetivo de diagnosticar as intoxicações.
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Desafios em Toxicologia Desafios em Toxicologia AnalíticaAnalítica
Substância de interesse é conhecida ?Substância de interesse é conhecida ?
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Amostra a ser analisada : matriz Amostra a ser analisada : matriz complexa na qual a substância de complexa na qual a substância de interesse pode estar presente.interesse pode estar presente.
Métodos que permitam a separação entre a substância de interesse e a matriz na qual ela se encontra dissolvida precisam ser utilizados.
Desafios em Toxicologia Desafios em Toxicologia AnalíticaAnalítica
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Métodos de Preparo da Métodos de Preparo da AmostraAmostra
Aquecimento da amostra - Aquecimento da amostra - “Headspace”“Headspace”
Técnicas de digestãoTécnicas de digestão Extração líquido - líquidoExtração líquido - líquido Extração de fase - sólidaExtração de fase - sólida Microextração de fase - sólidaMicroextração de fase - sólida DerivatizaçãoDerivatização
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Métodos de AnáliseMétodos de Análise
Permitem a detecção, identificação e, na Permitem a detecção, identificação e, na maioria das vezes, a quantificação da maioria das vezes, a quantificação da substância de interesse.substância de interesse.
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Métodos de AnáliseMétodos de Análise
Espectrofotometria Espectrofotometria ((UV/VISUV/VIS))
Espectrometria de Absorção Espectrometria de Absorção AtômicaAtômica
Cromatografia em Camada DelgadaCromatografia em Camada Delgada
Cromatografia Gasosa - FID, ECD, Cromatografia Gasosa - FID, ECD, MSMS
HPLC - UV/VIS, Fluorescência, MSHPLC - UV/VIS, Fluorescência, MS
Cromatografia em fluido supercríticoCromatografia em fluido supercrítico
Eletroforese CapilarEletroforese Capilar
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Substâncias Orgânicas Pouco ou Substâncias Orgânicas Pouco ou Não Voláteis Não Voláteis
Cromatografia em camada delgada ou HPLC
Homogeneização, diluição, desproteinização.
Extração líquido-líquido ou extração de fase sólida.
Análise por cromatografia em camada delgada e/ou HPLC acoplado a um detector UV, de fluorescência e/ou um espectrômetro de massa (ionização por electrospray).
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Cromatografia Líquida de Alta Cromatografia Líquida de Alta Eficiência Eficiência