““DETECÇÃO MOLECULAR DO HPV

EM PACIENTES ENCAMINHADAS

À URS – SAGRADA FAMÍLIA - PBH” Vanessa Carla de Moraes Gonçalves Cirino

Orientadora: Profa. Annamaria Ravara Vago

PAD – Departamento de Morfologia - ICB – UFMGLaboratório de Biologia das Interações Celulares

INCIDÊNCIA DO CÂNCER DO COLO DO ÚTERO

15% DE TODAS AS CATEGORIAS DE CÂNCER FEMININO

2O TIPO DE NEOPLASIA MAIS COMUM ENTRE AS MULHERES

MAIOR INCIDÊNCIA ENTRE MULHERES DE 40 A 60 ANOS

40.000 NOVOS CASOS SÃO DIAGNOSTICADOS A CADA ANO

Estimativas para o ano 2005 das taxas brutas de incidência por 100.000 e de número de casos novos por câncer, em mulheres, segundo localização primária.

Localização PrimáriaLocalização PrimáriaNeoplasia malignaNeoplasia maligna

Estimativa dos Casos NovosEstimativa dos Casos Novos

Minas GeraisMinas Gerais Belo HorizonteBelo Horizonte

CasosCasos Taxa Taxa BrutaBruta CasosCasos Taxa Taxa

BrutaBruta

Pele não Melanoma Pele não Melanoma 5.440 5.440 55,96 55,96 840 840 66,43 66,43

Mama Feminina Mama Feminina 4.220 4.220 43,46 43,46 850 850 66,99 66,99

Traquéia, Brônquio e Pulmão Traquéia, Brônquio e Pulmão 770 770 7,95 7,95 130 130 10,41 10,41

Estômago Estômago 800 800 8,24 8,24 160 160 12,93 12,93

Colo do Útero Colo do Útero 1.580 1.580 16,27 16,27 300 300 23,28 23,28

Cólon e Reto Cólon e Reto 1.110 1.110 11,45 11,45 270 270 21,25 21,25

Esôfago Esôfago 350 350 3,61 3,61 40 40 3,47 3,47

Leucemias Leucemias 410 410 4,19 4,19 80 80 6,09 6,09

Cavidade Oral Cavidade Oral 330 330 3,38 3,38 60 60 4,86 4,86

Pele Melanoma Pele Melanoma 210 210 2,21 2,21 60 60 4,67 4,67

Outras Localizações Outras Localizações 7.010 7.010 72,12 72,12 1.490 1.490 117,32 117,32

TotalTotal 22.23022.230 228,75228,75 4.2804.280 337,39337,39

HISTOLOGIA

ConnectiveConnective TissueTissueStratified SquamousStratified Squamous

EpitheliumEpithelium

INCIDÊNCIA DAS NEOPLASIAS

NEOPLASIAS INTRAEPITELIAIS CERVICAIS

COILOCITOSE

Nova Classificação Bethesda System.

NIC I » lesão escamosa intra-epitelial de baixo grau (LSIL)

NIC II, III e carcinoma in situ » lesão escamosa intra-epitelial de alto grau (HSIL)

Células escamosas atípicas de significado indeterminado » ASCUS

Células glandulares atípicas de significado indeterminado » AGUS

FATORES DE RISCO

Infecção por HPVParidade elevada

Início precoce da vida sexual ativa

Multiplicidade de parceiros sexuais

Tabagismo

Uso de contraceptivo oral

Casos de imunossupressão

Baixo nível socioeconômico

VIAS DE TRANSMISSÃO

Sexual

Neonatal

Através de pinças, luvas, roupas, equipamentos, etc.

VÍRUS DO PAPILOMA HUMANO

(HPV)

baixo risco : : 1, 2, 6, 11, 26, 40, 42, 1, 2, 6, 11, 26, 40, 42, 53- 55, 57, 59, 66 e 68; 53- 55, 57, 59, 66 e 68; médio e alto risco: : 5, 8, 16, 18, 31, 5, 8, 16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 e 59;33, 35, 39, 45, 51, 52, 56 e 59;

Câncer de peleCâncer de pele

Câncer de mucosasCâncer de mucosas

1, 2, 5 e 8

16, 18, 31 e 45

O GENOMA DO HPV

Dupla Hélice de DNA circular,8000 pb, 3 segmentos:

“Early-region” (E) – E1, E2, E4, E5, E6, E7

“Late-region” (L) – L1 e L2

“Long control region” (LCR)

MÉTODOS DE DETECÇÃOCLÍNICO - LABORATORIAIS

Citopatológico

Colposcópico

Histopatológico

MÉTODOS DE DETECÇÃO MOLECULARES

Captura Híbrida

Hibridização com sondas

PCR – Reação em Cadeia da Polimerase

OBJETIVO

Realizar a extração do DNA e detecção de um fragmento do genoma viral amplificado por PCR das amostras cervicais coletadas de pacientes na URS – Sagrada Família.

METODOLOGIAMETODOLOGIA

POPULAÇÃO POPULAÇÃO ESTUDADAESTUDADA

DESENHO EXPERIMENTALDESENHO EXPERIMENTAL

PACIENTES ENCAMINHADAS

n = 82

COLETA DE AMOSTRASECTO E ENDOCERVICAIS

EXTRAÇÃO DE DNA

COLORAÇÃOAg+

PCR

ELETROFORESEGEL DE POLIACRILAMIDA

Proteinase KFenol: Clorofórmio: IAA

MECANISMO DO PCR

PCR – fragmento de 450 pb do genoma viral ( Região de L1)

Primers : MY09 e MY11

Programa de 40 ciclosPrograma de 40 ciclos

PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTODE 450 pb DO GENOMA DO HPV

PRODUTO DE AMPLIFICAÇÃO DO FRAGMENTO DE 110 pb DO GENE DE β–GLOBINA HUMANO

RESULTADOS

Amostras coletadas 82

Extração de DNA 60

PCR – HPV 40

PCR – β-Globina 6

RESULTADOS

AMOSTRASAMOSTRAS PCR - HPVPCR - HPV PCR – PCR – ββ-Globina-Globina

11 -- - -

22 -- ++

33 ++ ++

44 ++ ++

55 -- ++

66 -- + +

OBJETIVOS FUTUROS

Realizar a comparação entre os achadosclínico-colposcópicos, citológicos, histopatológicos e moleculares obtidos nas amostras analisadas.

Realizar a detecção dos subtipos de HPV.

BIBLIOGRAFIA Ministério da Saúde/ Instituto Nacional do Câncer, 1996, Viva Ministério da Saúde/ Instituto Nacional do Câncer, 1996, Viva Mulher. Programa Nacional do Câncer do Colo Uterino – Manual Mulher. Programa Nacional do Câncer do Colo Uterino – Manual Informativo, RJ.Informativo, RJ.

Villa, L. , Caballero, O. L. , Levi, J. E. , Pena, S. D. J. , Simpson A. J. G. Villa, L. , Caballero, O. L. , Levi, J. E. , Pena, S. D. J. , Simpson A. J. G. An approach to Human Papillomavirus indentification using low An approach to Human Papillomavirus indentification using low stringency single specific primer PCR. stringency single specific primer PCR.

Franco, E. L. The sexually transmitted disease model for cervical Franco, E. L. The sexually transmitted disease model for cervical cancer: incoherent epidemiologic findings and the role ofcancer: incoherent epidemiologic findings and the role ofmisclassification of human papillomavirus infection. Epidemiology,misclassification of human papillomavirus infection. Epidemiology,v.2, p.98 – 106, 1991. v.2, p.98 – 106, 1991.

AGRADECIMENTOSProfessora Annamaria Ravara Vago

Pacientes participantes deste Projeto de Pesquisa

Professora Cleida A. Oliveira

Lucas Henrique, Sandra Moraes (Mãe) e Altair Cirino (Pai)

Amigos do Laboratório ( Alan, Soraya, Daniela, Alexandree Carla)

Equipe do Serviço de Patologia da URS – Sagrada Família(Médicos, Enfermeiros e Auxiliares de Enfermagem).