7/29/2019 Cromatografia de excluso molecular e Cromatografia de Afinidade - Sem videos

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Cromatografia de ExclusoMolecular e Cromatografia de

Afinidade

Alessandra Honjo Ide

Franciane de Almeida Brehm

Larissa Richter

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INTRODUO

Ambos os mtodos, da excluso molecular e

de afinidade, so mtodos de cromatografia

LQUIDA;

So mtodos muito novos, visto que, seus

desenvolvimentos se iniciaram,

respectivamente em 1964 e 1987.

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Como funciona um HPLC?

Para compreender melhor como funcionam as

tcnicas, vamos verificar um pouco o

funcionamento de um HPLC.

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Como funciona um HPLC?

VIDEO HPLC

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CROMATOGRAFIA DE AFINIDADE

, comumente, um mtodo de separao de

misturas bioqumicas, baseadas em interaes

biolgicas altamente especficas como:

Antgeno e Anticorpo;

Enzima e substrato;

Receptor e ligante.

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USOS DA CROMATOGRAFIA DEAFINIDADE

Purificar e concentrar uma substncia de uma de uma

mistura para uma soluo-tampo;

Reduzir a quantidade de uma substncia em umamistura;

Descobrir qual composto biolgico se liga a uma

substncia em particular;

Purificar e concentrar uma soluo de enzimas.

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QUAL O PRINCPIO DA SEPARAO?

A fase ESTACIONRIA comumente uma matriz gelatinosa,

geralmente de agarose.

A molcula de interesse na mistura deve ter suas caractersticas

fsico-qumicas conhecidas, de modo que uma propriedade definida

e diferente das demais deve existir para que seja explorada na

interao com a fase estacionria;

Como as outras substncias da mistura no possuem essa

interao, no sero retidas na coluna;

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QUAL O PRINCPIO DA SEPARAO?

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QUAL O PRINCPIO DA SEPARAO?

Podemos detalhar entre:

A fase estacionria

O processo de Eluio

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A FASE ESTACIONRIA

O composto de interesse se liga ao

composto contido fase estacionria.

Por exemplo: numa mistura de protenas

A, B, C e D, desejamos estudar a protenaA, que se liga facilmente com glicose.

Portanto, a parede do tubo aonde essa

mistura ser despejada conter glicose,

que logo atrair a protena A para si,

conseqentemente separando-a das

demais, que sero filtradas do tubo.

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A ELUIO

Aps restar na fase estacionria apenas os

ligante com os compostos de interesse,

despejado no tubo uma soluo contendo os

mesmos ligantes contidos na parede do tubo ou

reagente desnaturantes (uria, guanidina, etc)

desprendendo a protena da parede do tubo.

No exemplo, adicionado uma soluo de

resduos de glicose que fazem com que a

protena A se desprenda da parede do tubo,

sendo despejada, em meio a soluo, em outro

tubo para estudo.

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PARA ENTENDER MELHOR:

VIDEO AFINIDADE

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APLICAES

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INTRODUO

FALTA COMENTAR: Detectores, principaiscolunas, principais utilizaes, preparo deamostra: Tem naquele livro!

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INTRODUO

VIDEO ALE