CONTROLE DE QUALIDADE MICROBIOLÓGICO · metabolismo de via oxidativa ou ... da análise das n...
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CONTROLE DE QUALIDADE
MICROBIOLÓGICO
CONTAMINAÇÃO MICROBIANA
• A contaminação microbiana é um evento
indesejável na produção de
medicamentos e ocasiona problemas
quando presente. Os microrganismos, por
metabolismo de via oxidativa ou
fermentativa, produzem produtos, em sua
maioria, de caráter ácido, que alteram o
pH do meio onde estão inseridos.
• Os excipientes de fármacos podem sofrer mudança de cor, como o corante amarelo de tartrazina utilizado em xaropes. Emulsões podem ser quebradas e suspensões podem precipitar, uma vez que agentes emulsificantes e suspensores atuam em valores de pH determinados. O mais importante é a hidrólise de conservantes, como os parabenos, cloretos de benzalcônio e formaldeídos, que perdem totalmente sua amplitude de ação quando em meios fora do pH ótimo.
• Os princípios ativos de fármacos podem
ser degradados por hidrólise também
devido à mudança de pH, ou devido ao
seu consumo como fonte de carbono
pelos microrganismos; os medicamentos
são meios inóspitos para microrganismos,
que devem portanto consumir todas as
fontes de carbono possíveis para
sobreviver. A conseqüência é,
independente do caso, a ineficácia
terapêutica ou cosmética.
• O produto constituído, de maneira geral,
quando na forma sólida ou semi-sólida,
apresenta colônias visualizadas a olho nu,
e quando na forma líquida, apresentam
turvação. A fermentação de bactérias,
além dos metabólitos ácidos e alcoólicos
usuais, libera gases (CO2 e H2S) que
produzem bolhas e odor desagradável na
maioria dos fármacos.
MEIOS DE PREVENÇÃO
• Bioburden = biocarga; carga microbiana
natural total (intrínseca; microrganismos
não patogênicos) de um item. Fatores de
influência na carga microbiana: nutrientes,
pH, atividade de água, substâncias
antimicrobianas.
• A estimativa da população microbiana é
determinada, em todo o mundo, de acordo
com a EN ISO 11737-1.
Matéria-prima e Princípios Ativos
• Matérias-primas de origem natural tiveram
contato direto com o meio ambiente, e por
isso possuem um bioburden muito mais
elevado que as de origem sintética. No
caso de fitoterápicos, por exemplo, o
bioburden dos componentes varia
conforme a área de coleta da matéria-
prima, e a planta produtiva (região de
produção).
Água
• Água potável – água clorada, bioburden de 500 UFC/mL; utilizada para limpeza de áreas produtivas e abastecimento do sistema de tratamento de indústria,pois é a partir desta água que os outros tipos são produzidos.
• Água purificada – PWTR, bioburden de 100 UFC/mL; utilizada na formulação de produtos não estéreis.
Processo Produtivo
• No processo produtivo, as tubulações, válvulas, mangueiras, tanques e reatores que conduzem ou armazenam os produtos devem sofrer assepsia e saneamento pois podem reter quantidades mínimas de substâncias e desenvolver colônias de microrganismos, contaminando toda uma produção (biofilme – forma de contaminação massiva).
Ambiente
• As paredes devem ser lisas, laváveis e
sanitizáveis, e os cantos das salas devem
ser arredondados, para evitar o acúmulo
de microrganismos.
Limpeza e Desinfecção
• A limpeza e desinfecção são feitas através
do tratamento diário, periódico ou de
choque de áreas com desinfetantes e
sanitizantes, com o objetivo de reduzir o
bioburden de ambientes.
Pessoal
• É a maior fonte de contaminação. São
necessários o treinamento e
monitorização do pessoal e sua condição
de saúde.
Material de Acondicionamento e
Embalagem
• Os materiais de acondicionamento e
embalagem (vidro, plástico, laminados,
moldados, etc.) devem ser lavados com
água de qualidade e armazenados de
forma adequada (caixas de papelão
geram fungos e esporos).
DEFINIÇÕES
Lote • Lote é definido como uma quantidade de
produto de mesma composição e
características físicas, químicas e
sensoriais, produzida e manuseada numa
mesma batelada, sob as mesmas
condições.
Amostra de lote e unidade de
amostra • Amostra de lote é uma fração do total
produzido, retirada ao acaso, para avaliar
as condições do lote. No caso de
medicamentos acondicionados em
embalagens individuais, é composta de n
embalagens individuais.
Planos de amostragem de lotes
• O plano de duas classes classifica os
lotes em duas categorias, aceitável ou
inaceitável, dependendo dos resultados
da análise das n unidades de amostra.
São os mais aplicados no caso de ensaios
de presença/ausência, como Salmonella,
por exemplo, em que ausência é aceitável
e a presença em qualquer das n unidades
de amostra é inaceitável.
• O plano de três classes classifica os
lotes em três categorias, aceitável,
qualidade intermediária mas aceitável e
inaceitável. São recomendados para
ensaios qualitativos, para os quais
opadrão não é ausência, mas sim, valores
dentro de uma faixa entrem e M.
Unidade analítica
• A unidade de amostra geralmente contém
uma quantidade de produto maior do que
a necessária para a análise, porque, ao se
coletar uma unidade de amostra, há
sempre o cuidado de se tomar
quantidades suficientes para estocagem
de contra-amostras e prevenção de
perdas por acidente.
Preparação de Amostras para
Análise • Assegurar-se de que a área de trabalho
está limpa, todos os instrumentos e
utensílios utilizados na abertura das
embalagens e retirada das unidades
analíticas (tesouras, pinças, facas,
espátulas, etc.) devem ser previamente
esterilizados (em autoclave ou estufa de
esterilização) ou mergulhados em etanol
70% e flambados no momento do uso.
INTRODUÇÃO ÀS BACTÉRIAS
• A coloração de bactérias (coloração de gram) é realizada da seguinte maneira: preparação de lâmina e adição de corantes básicos por um minuto (violeta genciana, cristal violeta, azul de metileno); adição de lugol (I2 + KI) para fixação do corante na célula durante um minuto; descoloração da célula com álcool 95oGL, e lavagem rápida da lâmina com álcool ou acetona; adição de floxina, corante ácido que colora em trinta minutos. Os resultados variam conforme a estrutura da parede celular bacteriana.
• As bactérias gram positivas possuem parede celular composta de uma camada espessa de peptidioglicanos que possui alta afinidade com os corantes básicos; as cores resultantes são: violeta para as culturas novas, e vermelho para as culturas antigas. As bactérias gram negativas possuem parede celular com camada bem mais fina de peptidioglicanos e presença de lipopolissacarídeos, que possuem alta afinidade com os corantes ácidos; a cor resultante é quase sempre vermelha
Bacilos gram positivos
Gram negativos
Placa de agar com bactérias
AGENTES BACTERIANOS
• Agentes bacteriostáticos: impedem a
multiplicação celular – possui ação
apenas enquanto em contato com as
bactérias; após ser retirado, a população
microbiana volta a se multiplicar sob
condições favoráveis. Como exemplo
temos a tetraciclina, o clorafenicol e os
novíssimos zyvox e synercidi.
AGENTES BACTERIANOS
• Agentes bactericidas: provocam danos
celulares que levam à morte da população
– possui ação definitiva, dependendo da
cepa de microrganismo; a população
microbiana é extinta do meio. Como
exemplo temos os antibióticos penicilina,
cefalosporina e vancomicina que atuam
sobre as enzimas responsáveis pela
síntese da parede.
Parabenos
• Os PARABENOS são agentes
conservantes que, ao longo dos anos, têm
provado sua funcionalidade como
preservante para formulações cosméticas.
São atóxicos, estáveis e efetivos em
baixas concentrações contra uma ampla
gama de microorganismos
• O METILPARABENO é solúvel em:
facilmente solúvel em água quente,
propilenoglicol e etanol
• O PROPILPARABENO é solúvel em:
pouco solúvel em água (mesmo a quente),
facilmente solúvel em propilenoglicol e
etanol
• Usados juntos na proporção de 4 partes
de metilparabeno p ra 1 parte de
propilparabeno em formulações orais e
cosméticas com até 0,1%.
Leveduras
• As leveduras, como os bolores e
cogumelos, são fungos.
• Como células simples, as leveduras
crescem e se reproduzem mais
rapidamente do que os bolores. São mais
eficientes na realização de alterações
químicas, por causa da sua maior relação
área/volume.
Placa agar com leveduras
Bolor
• O bolor ou mofo é uma designação
comum dada a fungos filamentosos que
não formam estruturas semelhantes a
cogumelos.
Placa agar com bolor
placa chromocult
Conceito de Atividade de Água
Faixa: 0 (completamente seco) — 1.0 (água pura)
Atividade de Água vs Umidade
• Umidade
• Valor quantitativo de água em uma
amostra em base seca ou base úmida.
• Propriedade que depende da quantidade
de amostra.
Atividade de Água vs Umidade
• Atividade de Água
• Medida do estado de energia da água em
um sistema (Qualitativo).
• Propriedade que não depende da
quantidade de material.
Atividade de Água fornece
informação sobre:
• • Crescimento microbiano
• • Migração da Água
• • Estabilidade Química e Bioquímica
• • Propriedades físicas
• • Vida útil
• Umidade não fornece estas informações
Valores de aw mínimos para
desenvolvimento de
microorganismos
• Microorganismos aw
• Item 1 Bactérias deteriorantes 0,90
• Item 2 Leveduras deteriorantes 0,88
• Item 3 Bolores deteriorantes 0,80
ÁGUA NOS MEDICAMENTOS
• ÁGUA LIVRE
• A água fracamente ligada ao substrato, e
que funciona como solvente, permitindo o
crescimento dos microorganismos e
reações químicas e que é eliminada com
relativa facilidade.
ÁGUA NOS MEDICAMENTOS
• ÁGUA COMBINADA
• A água está fortemente ligada ao
substrato, mais difícil de ser eliminada e
que não é utilizada como solvente e não
permite o desenvolvimento de
microorganismos e retarda as reações
químicas.
Aa vs Umidade