Colheita, tratamento e armazenamento de amostras biológicas
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Colheita, tratamento e
armazenamento de amostras
biológicas
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Introdução
• A medição de biomarcadores em amostras de sangue tornou-se um componente integrante de muitos estudos epidemiológicos.
•Nós vamos falar brevemente sobre modelo colheita, processamento e armazenamento de sangue de quatro biomarcadores.
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• Hormonas Sexuais
• Carotenóides
•Marcadores inflamatórios
•Marcadores proteicos
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Hormonas sexuais
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Volume de sangue a ser recolhido
• 0,3 – 0,5 mL por cada hormona a ser analisada
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Testosterona e Estradiol podem ser recolhidos em:
Sangue com Heparina
Sangue com Citrato
Sangue com EDTA
Soro
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Resultados dos vários métodos de recolha
• Testosterona
Sangue com EDTA: •Resultados obtidos foram bons •Níveis hormona presente aceitáveis
Soro: •Níveis da hormona presentes em quantidades mais baixas do que com sangue com EDTA ou Heparina.
Sangue com citrato: •Piores resultados devido a uma diluição do anticoagulante
Sangue com Heparina: •Bons resultados •Níveis da hormona presente aceitáveis
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Continuação
• Estradiol
Sangue com EDTA: •Resultados obtidos foram bons •Níveis hormona presente aceitáveis
Soro: •Níveis da hormona presentes em quantidades mais baixas do que com sangue com EDTA ou Heparina.
Sangue com Heparina: •Bons resultados •Níveis da hormona presente aceitáveis
Sangue com citrato: •Piores resultados devido a uma diluição do anticoagulante
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Continuação
• Progesterona •Estrogénio
Podem ser recolhidos tal como as anteriores : •Sangue com EDTA •Sangue com Heparina •Sangue com citrato •Soro
Existem procedimentos que permitem contornar este problema •As mulheres fazem a colheita em qualquer fase do seu ciclo menstrual, mas fornecem aos profissionais de saúde um calendário exacto dos seus ciclos •Análises que pedem datas específicas para a colheita •Kits que permitem recolher amostras em diferentes alturas do ciclo
Mas tem variações devido ao ciclo menstrual
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Processamento
Temperatura
• Ambiente
• refrigerada
Tempo • Até 72 horas após a
colheita
Horário
Não altera os resultados
Não há alterações nos resultados
•A hora do dia não afecta a recolha
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Congelação e temperatura de armazenamento a longo prazo
• Temperaturas de - 20˚ C
•Temperaturas < - 70˚ C
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Ácido Ascórbico Carotenóides
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Ácido ascórbico = Vitamina C
Em que alimentos pode ser encontrada? Frutas cítricas, morango, tomate, brócolos, nabo,batatas e melão. A maioria das outras frutas e verduras contém alguma quantidade de vitamina C; peixes e leite fornecem pouca quantidade.
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Metabolismo de absorção do ferro Formação de hemoglobina , bom funcionameto
dos leucócitos Acção desintoxicante Integridade dos vasos sanguíneos Crescimento e regeneração celular, ossos, dentes,
gengivas Cicatrização Evita a formação de nitrosaminas Produção de colágeno e manutenção de tecido
conjuntivo
Função da vitamina C
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Processamento da amostra
Após 24 os seus níveis começam a degradar-se.
Dano oxidativo ou isomerização
Oxigênio, luz ou calor .
Armazenamento da amostra
Antes de se proceder ao seu congelamento deve ser adicionado um estabilizador ácido, como por exemplo, o ácido metafosfórico.
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Carotenóides
Os carotenóides são um grande grupo de pigmentos solúveis em gordura
Somente os animais são capazes de sintetizar carotenóides.
A estrutura química determina praticamente a função biológica.
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Fertilidade da mulher
Acção anti – oxidante
Retinol
Pro – vitamina A
Proliferação celular
Crescimento ósseo
Manutenção de uma boa visão
Pele saudável
Melhora as capacidades do sistema imunitário
Luteína e Zeaxantina
antimutagênicas e anticarcinogênicas
Nos humanos, todos os carotenóides exercem uma ação anti-oxidante, porém apenas alguns são
convertidos pelo organismo em retinol, uma forma ativa da vitamina
A. Por isso são denominados pró-vitamina A.
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Tipo de amostra e tipo de recolha
não são afectados pelo anticoagulante utilizado
níveis de retinol e caroteno têm variações sazonais durante todo o ano
Carotenóides
Soro Plasma
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Processamento da amostra
São estavéis durante uma semana se forem mantidos à temperatura ambiente.
dano oxidativo ou isomerização
oxigênio, luz ou calor
Armazenamento da amostra
Deve-se proceder ao seu congelamento a uma temperatura inferior a – 70º C .
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Tipo de colheita
• Sangue
- com EDTA
- Soro
•Sendo o primeiro o que obteve melhores resultados
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Geralmente, as amostras devem ser mantidas refrigeradas durante o tratamento, pois alguns marcadores inflamatórios podem degradar-se, quando a temperatura ambiente aumenta.
Tanto a interleucina-6 e o factor de necrose tumoral parecem degradar-se após 4 a 6 horas à temperatura ambiente, por isso devem ser
analisadas imediatamente
Processamento da amostra
Interleucina-6
A IL-6 é produzida por monócitos, macrófagos, linfócitos e fibroblastos e estimula a produção de células de imunoglobulina B, a proliferação de células T, a activação do mecanismo natural de morte celular .
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Temperatura de armazenamento a longo prazo
Poucos estudos têm examinado o efeito do armazenamento a longo prazo. Assim, normalmente recomenda-se, manter as amostras armazenadas a menos
de -70° C para garantir resultados validos.
Ciclos de congelamento/ descongelamento
devem ser evitados
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Marcadores Proteicos
![Page 25: Colheita, tratamento e armazenamento de amostras biológicas](https://reader033.fdocumentos.tips/reader033/viewer/2022060113/557202224979599169a30312/html5/thumbnails/25.jpg)
Marcadores proteicos
São proteínas que estão presentes à superficie de todas as células.
São chamados de antigénios.
Antigénios presentes na célula
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Recolha
Sangue
Anticoagulante
Citrato
Heparina
Citrato
Soro Não
recomendado
Recomendado
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Estes marcadores são úteis no diagnóstico de várias doenças, uma delas é o cancro.
São produzidos primariamente pelo tumor ou secundariamente pelo paciente, como
resposta à presença do tumor.
Estas substâncias são importantes para diferenciar tecidos normais de tecidos
neoplásicos.
É também importante que possam ser caracterizadas e/ou quantificadas.
Marcadores tumorais são aqui encontrados
Fluidos biológicos
Sangue
Tecido tumoral
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Elevações significativas da atividade total ou variações no padrão habitual destas isoenzimas podem ser indicativas da presença de processo neoplásico. Deve ser ressaltada a baixa especificidade deste tipo de marcador.
Marcadores
utilizados
Enzimas
Fosfatase alcalina
ossos Fígado Testículos
Desidrogenase láctica
Sangue
Fosfatase ácida
Próstata
Isoenzimas
![Page 29: Colheita, tratamento e armazenamento de amostras biológicas](https://reader033.fdocumentos.tips/reader033/viewer/2022060113/557202224979599169a30312/html5/thumbnails/29.jpg)
Cuidados a ter em conta
•As amostras deverão ser utilizadas de imediato, à temperatura ambiente.
•Deve também adicionar-se um inibidor de proteases para que seja reduzida a clivagem de proteínas.
![Page 30: Colheita, tratamento e armazenamento de amostras biológicas](https://reader033.fdocumentos.tips/reader033/viewer/2022060113/557202224979599169a30312/html5/thumbnails/30.jpg)
O armazenamento destas amostras
A longo prazo recomenda-se a congelação à temperatura baixa (– 70ºC) , para
minimizar a degradação das amostras.
Ciclos de congelação e descongelação devem ser evitados.
![Page 31: Colheita, tratamento e armazenamento de amostras biológicas](https://reader033.fdocumentos.tips/reader033/viewer/2022060113/557202224979599169a30312/html5/thumbnails/31.jpg)
Conclusões
• Com este trabalho podemos concluir que existem muitos processos comuns na recolha de amostras sanguíneas.
• Contudo cada um dos exemplos referidos por nós mostrava que haviam algumas variáveis que iriam depender do tipo de substancia que se ia analisar.
• Assim podemos dizer que é necessária atenção a quando da recolha das amostras, no seu processamento e posterior armazenamento.
• Todas os exemplos aqui referidos possuem características que se forem descurados podem levar a uma má análise e a um resultado não válido.