CARVALHO, Daniel Cardoso; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; GODINHO, Hugo (c); GODINHO, Alexandre (c)

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CARVALHO, Daniel Cardoso; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; GODINHO, Hugo (c); GODINHO, Alexandre (c) Departamento de Farmacologia e Departamento de Zoologia ICB-UFMG

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ISOLAMENTO E. CARACTERIZAÇÃO DE MARCADORES. MICROSATÉLITE. EM. DE. Prochilodus scrofa. CARVALHO, Daniel Cardoso; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; GODINHO, Hugo (c); GODINHO, Alexandre (c). Departamento de Farmacologia e Departamento de Zoologia ICB-UFMG. Crescimento populacional. - PowerPoint PPT Presentation

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CARVALHO, Daniel Cardoso; KALAPOTHAKIS,Evanguedes; GODINHO, Hugo (c);

GODINHO, Alexandre (c)

Departamento de Farmacologia e Departamento de ZoologiaICB-UFMG

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Crescimento populacional

Maior demanda de energia elétrica

Construção de represas

Interrupção de vias migratórias

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Figura I1: A figura mostra como ocorre o aumento (esquerda) ou diminuição (direita) nonúmero de repetições de microsatélites numa fita de DNA, durante a replicação atravésdo deslizamento da polimerase. (MOXON & WILLS, 1999)

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Biblioteca Genômica

Isolamento dos clones

Hibridização

Sequenciamento

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Sítio de corte da enzima utilizada deixando extremidades coesivas

Mapa do vetor utilizado

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Escolha da enzima apropriada para a montagem da biblioteca

Corte do DNA total com Sau3A Divisão das frações da biblioteca

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Técnica de transformação bacteriana utilizada (eletroporação)

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Isolamento dos clones da biblioteca seguido de PCR ou mini-prep para a posterior aplicação na

membrana

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Oligonucleotídeos utilizados como sonda: CA, TC, CTT,

ACGA, TA, GGA, AAAG,TATC

Hibridização com sondas radioativas

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Equipamento de Sequenciamento automático utilizado:

ABI 310

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Seqüência de um dos microsatélites encontrados Seqüência de outro dos microsatélites encontrados

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PCR dos loci de microsatélite de cada indivíduo.

Gel de poliacrilamida dos produtos de PCR.

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Montagem de tabela com nº e freqüência de MS.

Cálculo da heterozigosidade observada e esperada.

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Definição da distância genética e fluxo gênico entre as populações.

Verificação da necessidade de construçãode mecanismos de transposição.

Árvore Genealógica

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