Caderno de Atividades Práticas - Biologia Celular

UNIVERSIDADE TIRADENTES UNIT

CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS E DA SADE

ATIVIDADES PRTICAS

BIOLOGIA CELULAR

Prof. Dra. Plcia Barreto Prata Gois

ALUNO:________________________

UNIVERSIDADE TIRADENTES

DISCIPLINA: BIOLOGIA CELULAR

PROFESSORA Dra. PLCIA BARRETO PRATA GOIS

PRTICA N 01: APRESENTAO DAS NORMAS DE CONDUTA NO

LABORATRIO

- Usar roupas protetoras

- Usar luvas para manipular material biolgico

- Lavar as mos antes de sair do laboratrio

- Proibido comer, fumar e beber no laboratrio

- Manter a rea de trabalho limpa e organizada

- Cuidados especiais com os equipamentos, principalmente o microscpio

- Cuidados especiais para evitar leses com objetos pontiagudos

- Prender os cabelos, no usar anis e pulseiras

- Preferncia de utilizao de material descartvel

- Eliminar os resduos e lixo biolgico em local adequado



PROF. Dra. PLCIA BARRETO PRATA GOIS

PRTICA N 02: INSTRUMENTOS BSICOS DE UM LABORATRIO

1. Introduo

Os laboratrios, tanto de Biologia quanto de Qumica e Fsica, fazem uso de

vrios instrumentos que so chamados de vidrarias e equipamentos. Estes

instrumentos so utilizados para realizar diversas anlises, reaes qumicas,

experincias, efetuar medies, entre outras.

2. Objetivo

Conhecer os instrumentos bsicos de um laboratrio

3. Atividade Prtica

Identifique e descreva a funo dos seguintes equipamentos:

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PRTICA N 03: MICROSCOPIA

1. Introduo

O microscpio um instrumento que permite observar os objetos no

perceptveis a olho nu, formado por um sistema de lentes que ampliam a

imagem do objeto.

Microscpio ptico se refere a qualquer microscpio que utiliza a luz para

observar amostras. Existem dois tipos de microscpio, o simples e o composto.

O microscpio simples possui somente uma lente e comumente chamado

de lupa.

O microscpio ptico composto possui dois sistemas de lentes: um prximo

ao olho do observador sistema ocular e outro prximo do objeto sistema de

objetivas.

O microscpio ptico composto constitudo por: parte mecnica, ptica e

sistema de iluminao. A parte mecnica formada pela base, platina e tubo. A

parte ptica composta pelo sistema de objetivas e oculares. O sistema de

iluminao tem a funo de iluminar o objeto a ser analisado.

2. Objetivo

Identificar as partes do microscpio e aprender suas respectivas funes.

3. Material a ser Utilizado

- Microscpio ptico

4. Atividade Prtica

A figura abaixo um desenho esquemtico de um microscpio ptico

mostrando seus diversos componentes. Escreva o nome e a funo de

cada componente.




PRTICA N 04: MICROSCOPIA

1. Introduo

A ampliao da imagem do objeto analisado obtida quando os raios de luz

da fonte de luz passam pelo condensador que dirige os raios sob a lmina e

atravessa o objeto. A seguir, os raios de luz passam para as objetivas. A

imagem novamente ampliada pela lente ocular. A imagem final do objeto,

proporcionada pelo microscpio, ser virtual, ampliada e invertida em relao

ao mesmo. A ampliao total o resultado da multiplicao do aumento da

objetiva pela da ocular.

2. Objetivo

Aprender a manusear o microscpio.


- Microscpio ptico

- Lminas de esfregao sanguneo

4. Atividade Prtica

Focalize a lmina no microscpio de luz, conforme o procedimento descrito

abaixo e faa desenhos do que foi observado nos crculos abaixo:

PROCEDIMENTO CORRETO PARA A FOCALIZAO

1- Observe se est na objetiva panormica (4X). Gire o revlver, olhando

lateralmente, para evitar que alguma objetiva toque a platina. Verifique se

cada objetiva est encaixada, pelo rudo caracterstico do encaixe.

2- Abaixe a platina at travar.

3- Pegue a lmina segurando-a apenas pelas bordas.

4- Abra a presilha e coloque a lmina sobre a platina, solte a presilha

lentamente e verifique se a lmina est bem encaixada. Centralize o

material no orifcio da platina.

5- Ligue o microscpio. Aumente a luz.

6- Levante a platina at o ponto mximo movimentando o parafuso

macromtrico.

7- Olhando atravs da ocular e utilizando o parafuso macromtrico, abaixe

lentamente a platina, at que o material a ser observado possa ser visto.

Assim que isto ocorrer, corrija a focalizao utilizando o parafuso

micromtrico.

8- Explore a lmina movimentando os parafusos do charriot com uma das

mos e o parafuso micromtrico com a outra. OBS: Procure observar no

microscpio sempre com os dois olhos abertos.

9- Encaixe a objetiva de pequeno aumento (10X) e faa o ajuste da

focalizao, utilizando apenas o parafuso micromtrico. Observe o campo

atentamente.

10- Selecione uma determinada rea do material, centralize-a e encaixe a

objetiva de mdio aumento (40X). Faa o ajuste da focalizao utilizando o

parafuso micromtrico.

11- Selecione uma determinada rea do material, centralize-a, coloque uma

gota do leo de imerso na lmina e encaixe a objetiva de grande aumento

(100X). Faa o ajuste da focalizao, utilizando apenas o parafuso

micromtrico.

12- Terminada a observao, abaixe a platina, gire o revlver para encaixar a

objetiva de menor aumento (4X), diminua a luz, desligue o microscpio,

retire a lmina e guarde-a. OBS: Se utilizar a objetiva de maior aumento

(100X) limpe-a com gaze embebida em lcool:ter (1:1)




PRTICA N 05: PREPARAES CITOLGICAS

1. Introduo

Para obter uma boa visualizao no microscpio so necessrios alguns

cuidados durante o processamento da amostra a ser analisada. Esses

cuidados vo desde a escolha e coleta do material at a montagem das

lminas. Vrias tcnicas foram desenvolvidas para obteno de lminas para

anlise em microscpio ptico, essas tcnicas visam o estudo de aspectos

muito prximo de seu estado natural vivo e a diminuio de artefatos

(alteraes produzidas nas clulas pelas tcnicas utilizadas). As principais

tcnicas so: montagem total, esfregao, espalhamento, esmagamento e

decalque.

a. Montagem Total

Consiste em colocar o material a ser analisado, que dever ser fino

ou transparente, diretamente sobre uma lmina.

b. Esfregao

As clulas livres presentes nos lquidos corporais, como sangue,

smen, lquor, so dispostas sobre a lmina em uma fina camada, de forma

que ficam isoladas uma das outras, podendo ser observadas em microscpio

ptico.

c. Espalhamento

Erroneamente chamado de esfregao, consiste em deslizar o

raspado de mucosas sobre uma lmina.

d. Esmagamento

Consiste em esmagar, entre lmina e lamnula, o material a ser

analisado. til para estudos de divises celulares.

2. Objetivo

Aprender as diferentes tcnicas de preparao de lminas para observao

de clulas no microscpio


- Tesoura

- Lmina

- Lamnula

- Abaixador de lngua

- Azul de metileno

- Pipeta de Pasteur

- Sangue com EDTA

- Cebola

- Lmina de Bisturi

4. Atividade Prtica

1- Montagem Total

- Cortar um pedao de fio de cabelo e colocar sobre a lmina

- Adicionar uma gota de gua destilada

- Cobrir com lamnula

2- Espalhamento

- Com um abaixador de lngua raspar a parte interna da bochecha

- Espalhar o material sobre a lmina em crculos

- Colocar uma gota de azul de metileno


3- Esfregao

- Colocar uma gota de sangue no canto da lmina

- Com outra lmina, em um ngulo de aproximadamente 40, arrastar o

sangue pela lmina

- Deixar secar em temperatura ambiente

4- Esmagamento

- Fazer um corte fino na cebola

- Colocar sobre a lmina


- Espremer o material entre lmina e lamnula utilizando os dedos polegares

e indicador.




PRTICA N 06: CITOQUMICA

1. Introduo

A citoqumica a rea da biologia que estuda os mtodos de colorao dos

tecidos e constituintes celulares. So classificadas de acordo com a reao

qumica envolvida.

1.1. Reao Citoqumica mediada por Ligaes Eletrostticas

Um corante ionizado reage com um substrato de carga inica oposta.

Ento, existem dois fenmenos citoqumicos: acidofilia e basofilia.

Acidofilia, quando um substrato de carga positiva reage com um corante

de carga negativa. Ex: Eosina.

Basofilia, quando um substrato de carga negativa reage com um corante

de carga positiva. Ex: Azul de metileno.

1.2. Reao Citoqumica mediada por Ligaes Covalentes

A ligao covalente consiste no compartilhamento de eltrons entre dois

tomos. Muitas das reaes citoqumicas mediadas por ligaes covalentes

necessitam ser facilitadas por uma molcula de componente metlico, que

chamada de mordente. Ex: Coloraes Tricrmicas.

1.3. Reao Citoqumica mediada por Interaes Hidrofbicas

Essas reaes so especficas para lipdios apolares. Os corantes

utilizados (diludos base de lcool ou acetona) interagem com os lipdios

hidrofobicamente, ou seja, livres de gua. Ex: Sudan Black e Sudan III.

1.4. Imunocitoqumica

Utiliza a especificidade dos anticorpos para localizar molculas nas

clulas ou tecidos. A visualizao do anticorpo depende da sua ligao com

marcadores detectveis.

Quando o composto utilizado na marcao do anticorpo um

fluorocromo, a reao chamada de imunofluorescncia. Quando se utiliza

enzimas como marcadores, recebe a denominao de imunoperoxidase.

2. Objetivos

- Aprender uma tcnica de colorao de clulas

- Verificar a regio da clula que se cora pela eosina e pelo azul de metileno.


- Lminas

- sangue com EDTA

- pipeta de Pasteur

- corante pantico

- microscpio

- leo de imerso

4. Atividade Prtica

- Fazer uma lmina de esfregao sanguneo

- Deixar secar a temperatura ambiente

- Realizar a colorao utilizando os corantes panticos

- Deixar secar a temperatura ambiente

- Focalize a lmina no microscpio de luz, identifique um leuccito e faa o

desenho no crculo abaixo, mostrando as diferentes partes da clula e sua

afinidade pelos corantes utilizados:




PRTICA N 07: TIPOS CELULARES

1. Introduo

Existem dois tipos bsicos de clulas, as procariontes e eucariontes. As

clulas procariontes caracterizam-se pela pobreza de membranas, os

cromossomos no so separados do citoplasma por membrana, a nica

membrana existente a membrana plasmtica.

As clulas eucariontes apresentam duas partes distintas, o citoplasma e o

ncleo, o citoplasma envolvido pela membrana plasmtica e o ncleo, pelo

envoltrio nuclear, sua principal caracterstica a riqueza de membranas,

formando compartimentos que separam os processos metablicos.

As clulas vegetais so eucariontes e assemelham-se as clulas animais,

porm apresentam parede celular, cloroplastos e vacolos grandes.

2. Objetivo

- Diferenciar clulas procariontes e eucariontes animais e vegetais

3.Material a ser Utilizado

- Lminas de esfregao bacteriano corados pelo GRAM

- Abaixador de lngua

- Lminas

- Azul de metileno

- Pipeta de Pasteur

- Lamnula

- Cebola

- Lminas de Bisturi

- Microscpio

- leo de imerso

4. Atividade Prtica

- Observar no microscpio lminas de clulas procariontes (esfregao

bacteriano corado pelo Gram) e desenhar no crculo abaixo

- Preparar uma lmina de clulas eucariontes animais:

- Com um abaixador de lngua raspar a parte interna da bochecha

- Confeccionar a lmina pela tcnica de espalhamento (espalhar o material

sobre a lmina em crculos)



- Observar no microscpio e desenhar no crculo abaixo

- Preparar uma lmina de clulas eucariontes vegetais:

- Fazer um corte fino na cebola

- Colocar sobre a lmina



- Observar no microscpio e desenhar




PRTICA N 08: DIFUSO

1. Introduo

A difuso consiste no transporte de substncias atravs da membrana. A

difuso ocorre a favor de um gradiente de concentrao, ou seja, de uma

regio com maior concentrao de partculas para uma regio com menor

concentrao, em funo do tempo, at alcanar o equilbrio e esse

transporte no envolve gasto de energia.

2. Objetivo

- Demonstrar o processo de difuso

3. Material a ser utilizado

- Saco de Dilise

- Cordo

- Soluo de azul de metileno

- Basto de vidro

- Becker de 500 mL

- 5 tubos de ensaio

- Pipeta de 5mL

- Pra

- Agitador magntico

- Estante para tubos de ensaio

- gua destilada

- Barra magntica

- Tesoura

4. Atividade Prtica

- Adicionar 400mL de gua destilada a um Becker de 500mL, colocando-o

sobre o agitador magntico.

- Abra a fita de celofane no Becker que contem gua destilada, de modo

que as suas paredes se separem formando um tubo.

- Amarre uma das extremidades com cordo

- Coloque 5mL da soluo de azul de metileno no saco de dilise. Amarre a

outra extremidade.

- Prepare uma estante com 5 tubos de ensaio, marque-os com 0,5,10,15 e

20 que correspondero aos tempos (em minutos) do experimento.

- Prenda o saco de dilise num basto de vidro, mergulhando-o no Becker,

de modo a no impedir a rotao da barra magntica.

- Ao mergulhar o saco no Becker, ligue a rotao do agitador e retire uma

amostra de 5mL da gua contida naquele recipiente colocando-o no tubo 0,

este ser o tempo zero do experimento.

- Passe a retirar amostras de 5mL, a cada 5 minutos (cronometrados), at

20 minutos, colocando cada amostra no respectivo tubo de ensaio.

- Observe a diferena de cor entre os tubos.




PRTICA N 09: OSMOSE EM CLULAS ANIMAIS

1. Introduo

Osmose a passagem espontnea (sem gasto de energia) do solvente da

soluo menos concentrada para a mais concentrada atravs de uma

membrana semipermevel.

Se uma clula animal (por exemplo, uma hemcia) for colocada numa

soluo hipertnica em relao ao seu citoplasma, ela perder gua e

murchar, ficar com a superfcie enrugada, fenmeno chamado de crenao.

Se for colocada numa soluo hipotnica, ela ganhar gua e seu volume

aumentar, entretanto, se a soluo for muito hipotnica, a membrana no

resistir e sofrer ruptura, fenmeno chamado de plasmoptise, no caso da

hemcia, hemlise.

2. Objetivo

Observar o que ocorre com as hemcias em diferentes concentraes

inicas.


- Lmina

- Lamnula

- Pipeta de Pasteur

- Sangue com EDTA

- Soluo de NaCl a 0,9%



- Microscpio ptico

4. Atividade Prtica

- Colocar na lmina uma gota de sangue

- Colocar uma gota da soluo de NaCl a 0.9%










PRTICA N 10: OSMOSE EM CLULAS VEGETAIS

1. Introduo

Nas clulas vegetais os efeitos osmticos so diferentes das clulas

animais. A parede celular que reveste a membrana plasmtica muito

resistente as diferenas de presso osmtica, os fenmenos osmticos

ocorrem entre o meio e o vacolo, assim mesmo em solues extremamente

hipotnica a clula vegetal nunca sofre plasmoptise.

Quando a planta perde muita gua, o meio extracelular torna-se hipertnico

em relao ao vacolo, o qual perde muita gua. O citoplasma e a membrana

se retraem, mas a parede celular devido a sua resistncia, no acompanha

esta retrao, fenmeno chamado de plasmlise.

2. Objetivo

Observar o que ocorre com as clulas vegetais em diferentes

concentraes inicas


- Lmina

- Lamnula

- Pipeta de Pasteur

- Lmina de bisturi

- Folha de Setcreasia purprea




- microscpio ptico

4. Atividade Prtica

- Fazer um corte bem fino do lado roxo da folha de Setcreasia purprea e

colocar na lmina





colocar na lmina





colocar na lmina







PRTICA N 11: OBSERVAO DE CLIOS E FLAGELOS

1. Introduo

Clios e flagelos so projees da membrana citoplasmtica que contm em

seu interior um feixe de microtbulos. Em clulas livres, essas estruturas so

responsveis pela movimentao e em clulas fixas, os clios tm como funo

movimentar fluido na superfcie celular.

2. Objetivo

Diferenciar clios e flagelos


- Lmina da traquia

- Lmina de esperma

- Microscpio ptico

4. Atividade Prtica

1- Utilizando o microscpio ptico, focalize a lmina da traquia na objetiva

de 40X, observe os clios na superfcie das clulas epiteliais e desenhe no

crculo abaixo.

2 - Utilizando o microscpio ptico focalize a lmina de esperma na objetiva de

100X, observe o flagelo presente nos espermatozides e desenhe no crculo

abaixo.




PRTICA N 12: FORMAS NUCLEARES

1. Introduo

Os leuccitos ou glbulos brancos so clulas presentes no sangue

perifrico com funo de proteger o organismo contra agentes patolgicos

causadores de doenas. Os leuccitos apresentam ncleo de formas

caractersticas,.o neutrfilo possui o ncleo segmentado em lobos, em nmero

que varia de dois a cinco; o eosinfilo, com ncleo bilobado e com o citoplasma

preenchido por muitos grnulos rseos, os basfilos possuem um ncleo

irregular em forma de S, os linfcitos possuem um ncleo esfrico que ocupa

quase todo o volume da clula e os moncitos so clulas grandes com ncleo

na forma de rim ou ferradura.

2. Objetivos

- Identificar os diferentes tipos de leuccitos

- Verificar as diferentes formas nucleares


- Lminas de esfregao sanguneo

- Microscpio ptico

- leo de imerso

4. Atividade Prtica

- Focalize a lmina de esfregao sangneo no microscpio ptico, procure

e faa desenhos dos diferentes tipos nucleares presentes nas clulas

sangneas:

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PRTICA N 13: EXTRAO DE DNA

1. Introduo

Para visualizao do DNA necessrio separa-lo dos outros componentes

celulares. Os procedimentos utilizados para a extrao do DNA promovem

inicialmente a ruptura das membranas para liberao do material gentico e em

seguida, o DNA separado das protenas.

2. Objetivo

- Observar o DNA


- Banana

- Garfo

- Vidro relgio

- Bcker de 250 ml

- Proveta de 100ml

- 10ml de detergente comercial

- 3g de NaCl

- Banho-maria a 60C

- Gelo

- Tubo de ensaio

- Funil

- Gaze

- lcool

4. Atividade Prtica

- Amassar a banana e colocar em um becker de 250 mL

- Utilizando uma proveta, adicionar 10 mL de detergente comercial, 3g de

NaCl e completar com gua destilada at 100 mL, homogeneizar

- Adicionar a soluo preparada ao becker contendo a banana amassada

- Colocar o becker em banho-maria (60C) por 15 minutos, depois em um

recipiente com gelo

- Depois de resfriada, filtrar a soluo em um tubo de ensaio, o restante do

material dever ser descartado

- Adicionar lentamente lcool comercial gelado ao tubo de ensaio contendo

o filtrado

- Movimentar o tubo com cuidado de forma que o DNA apresente o aspecto

de um chumao de algodo

Questes:

1- Por que usado o detergente?

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2- Qual a funo do NaCl?

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3- Por que usado o lcool?

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PRTICA N 14: MITOSE

1. Introduo

A mitose uma das fases do Ciclo Celular, atravs da qual as clulas

eucariticas se dividem originando duas clulas-filhas com a mesma

composio gentica (mesmo nmero e tipo de cromossomos). Este processo

dura, em geral, 90 a 120 minutos e dividido em quatro etapas: prfase,

metfase, anfase e telfase. Prfase: a cromatina comea a se condensar, os

centrolos afastam-se para os plos opostos criando as fibras do fuso e a

membrana nuclear desaparece. Metfase: os cromossomos esto dispostos no

centro da clula, formando o que se chama de Placa Equatorial. Anfase: as

fibras do fuso se encurtam em direo aos plos levando consigo as

cromtides. Telfase: a cromatina comea a se descondensar, ressurgem a

membrana nuclear e a clula se divide.

2. Objetivo

- Identificar as fases da mitose


- Lminas de raiz de cebola

- Microscpio ptico

4. Atividade Prtica

- Focalize a lmina de raiz de cebola na objetiva de 40X no microscpio

ptico, procure e faa desenhos das diferentes fases da mitose:

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