LABORATRIO DE ANAERBIOS

Bactrias Anaerbias Gram

Prof. Dr. Mario Julio Avila-Campos

Negativas e Gram Positivas

http://www.icb.usp.br/bmm/mariojac

Bactrias Anaerbias Gram

NegativasNegativas

Gneros Porphyromonas (Assacarolticos) ePrevotella (Sacarolticos)

- Infeces orais: mordidas; Infeces de cabea,pescoo e trato respiratrio.

- Espcies:

- Prevotella intermedia, P. corporis, P.melaninogenica, P. denticola, P. loeschii.

- Porphyromonas asaccharolytica, P. endodontalis, P.gingivalis.

- Espcies:

Prevotella spp. e Porphyromonas spp.

Periodontite Endocardite

Cultura pura

GNERO Fusobacterium

- Trato gastrointestinal e respiratrio superior: F. nucleatum

- F. necrophorum: + virulento, abscessos em pulmes, - F. necrophorum: + virulento, abscessos em pulmes, fgado e articulaes.

- F. ulcerans: lcera tropical.

- F. alocis, F. sulci, F. periodonticum

Fusobacterium nucleatum

Clulas fusiformes

Gengivite ulcero-necrosante

(GUN)

Grupo Bacteroides fragilis

Espcie Bacteroides fragilis

Comensais Enterotoxignicas

Gnero Bacteroides

Comensais Enterotoxignicas

- Microbiota indgena;- Patgenos oportunistas;- Predominam no clon;- Resistentes a drogas antimicrobianas.

Laboratrio de Anaerbios

Bacteroides fragilis

Peritonite Celulite

Abscesso heptico

Cncer colorretal ?

Laboratrio de Anaerbios

Fator de virulnciaEstgio da infeco

Cpsula polissacardicaFmbriasHemaglutininas

Cpsula polissacardica

ADESO

ANTI-FAGOCITOSE

Bacteroides fragilis - Fatores de Virulncia

HemolisinasNeuraminidaseFragilisina (enterotoxina)

Cpsula polissacardicaLipopolissacardeo (LPS)

ESTABELECIMENTO DA INFECO/DANO TECIDUAL

ANTI-FAGOCITOSE

Adeso de espcies do Gnero Bacteroides s clulas HEp-2

B. ovatusB. fragilis

Nakano et al. (2009)

E. coli O127:H6 Adeso localizada

B. vulgatus

Padro de adeso no definido

Invaso de espcies do grupo B. fragilis s clulas HEp-2

Microscopia confocal

B. fragilis B. vulgatus

confocal

PI Iodeto de propdio (vermelho)Marcador de DNA

DiOC Iodeto diexil-oxacarbocianina (verde)

Marcador de membrana celular

Nakano et al. (2009)Laboratrio de Anaerbios

LPS: Componentes ausentesLPS: Componentes ausentes 2-ceto-3-deoxioctanato (CDO) e heptose polissacardeo interno cido 3-hidroxi-tetradecanoico lipdio A

Madigan et al. (2004)Laboratrio de Anaerbios

Neuraminidase (sialidase)

Cliva cidos silicos(cido N-acetil neuramnico)

clulas eucariticas

contribuioNutrio Aderir, invadir e destruir tecidos

Laboratrio de Anaerbios

Enterotoxina (fragilisina)

Bacteroides fragilis (ETBF)

Modifica cito-esqueleto de actina

Hidrolisa E-caderina - protenaPM: 20.000

Metaloprotease Famlia Metzincina

Hidrolisa E-caderina - protenade aderncia do epitlio intestinal

PM: 20.000 Da

Zinco co-fator

Histidina essencial para o zinco

Metionina integridade da ligao

Acmulo de fludos

DiarreiaLaboratrio de Anaerbios

Teste citotxico de ETBF em clulas HT-29/C1

Controle ETBF

Nakano et al. (2005)Laboratrio de Anaerbios

294 bp

1 2 3 4 5 6 7 8

bft

Deteco do gene bft (PCR) e subtipo bft-1 (Multiplex-PCR)

1 2 3 4 5 6 7 8

190 bpbft-1

Nakano et al. (2005)Laboratrio de Anaerbios

Gene bft

bft-1 bft-2 bft-3

mais potente

Laboratrio de Anaerbios

Colonizao e patogenicidade de B. fragilis enterotoxignico

Inoculao intra-gstrica em camundongos isentos de germes

Nakano et al. (2006)Laboratrio de Anaerbios

Alteraes histopatolgicas do produzidas nos camundongos

Subtiposrgos

Ceco Clon Fgado

bft-1 Edema moderado e Edema e aumento da Sem alteraes bft-1 Edema moderado e eroso

bft-2 Ulcerao proeminente

Edema e aumento da lmina prpria

Edema e aumento da lmina prpria

Sem alteraes degenerativas, e raras clulas inflamatrias

Congesto com poucas clulas inflamatrias

Nakano et al. (2006)Laboratrio de Anaerbios

Aspectos histopatolgicos do intestino grosso de camundongos

bft-1 bft-2

No ETBF

Nakano et al. (2006)

Bacteroides fragilis

Celulite anaerbiaFascite necrosante

Peritonite

Faringite

Abscesso

Bactrias Anaerbias

Gram-positivasGram-positivas

Infeces endgenas agrupadas em trs categorias:

1. No Invasiva: Toxina responsvel pelos sintomas (C.difficile).

Gnero Clostridium

2. Invasiva (Histotxica): Infeco progressiva e destruiodo tecido (C. perfringens).

3. Purulenta: Infeco mista, envolve vrios rgos,usualmente na cavidade peritoneal.

Colite pseudomembranosa ou colite associada a antibiticos.

Produz 2 toxinasToxina A: Enterotoxina (libera fluidos)

Toxina B: Citotoxina (efeito citoptico).

Clostridum difficile

Ocorrncia do processo:

Diarria Febreclicas

leucocitose Perfurao intestinal

Morte

PCR

Efeito citoptico: controle negativo e positivo

A e B B

A mais isolada de espcimes clnicos: queimaduras, feridastraumticas, aspirao pulmonar, trato vaginal, abortos, etc.

Tipos de C. perfringens:

1. Tipo A: produz toxina alfa (fosfolipase C).

Clostridum perfringens

1. Tipo A: produz toxina alfa (fosfolipase C).

2. Tipo B: produz toxinas alfa, beta e epsilon.

3. Tipo C: produz toxina alfa e beta (necrtizante).

4. Tipo D: produz toxinas alfa e epsilon (permease).

5. Tipo E: produz toxinas alfa e iota (necrotizante).

Ao da fosfolipase C

Gangrena gasosa

Toxina elaborada no stio do trauma ou leso.

Liga-se rapidamente ao tecido neural: paralisia e espasmos.

Produz 2 toxinas: (metaloproteases)

Tetanolisina (48 Kda): hemolisina sensvel ao O2.Tetanospasmina (150 Kda): sensvel ao calor 50 oC.

Clostridum tetani

calor 50 oC. Tipos de Ttano:

1. Generalizado: rigidez nos msculos voluntrios (face-trismo, tronco.2. Localizado: espasmos, aumento tnus muscular.3. Ceflico: paralisia facial rgida (nervo craniano).4. Neonatal: infeco umbilical.

Resistente a pH cido, e a 60 oC x 20 min.

Alimentos mal conservados ou inadequadamente esterilizados.

Produz potente neurotoxina.

Existem 7 tipos toxignicos:- Tipo A, B, E e F: homem.

Clostridum botulinum

- Tipo A, B, E e F: homem.- Tipo E: peixes.

- Tipo CC1: Neurotoxina - Aves.C2: Permeabilidade vascular - ovinos e bovinos.

- Tipo D: Bovino, ovino, eqino.

- Tipo G: C. argentinense.

No h contrao muscular!

Botulismo Alimentar: Toxina pr-formada. Dor abdominal,Paralisia flcida e respiratria.

Botulismo Ferimento: Forma rara. Feridas em contato comtoxinas.

Botulismo Infantil: Coloniza trato gastrintestinal de recm

Tipos de botulismo

Botulismo Infantil: Coloniza trato gastrintestinal de recmnascidos. Ingesto de toxina comalimentos - Mel de abelha.

Botulismo Bovino: Paralisia muscular e morte. Ingesto decarcaas com toxinas.

Gelia de mocot