Aula1 - Instituto de Ciências Biomédicas | USPireneyan/CursoPG/PDFs/Aula1.pdf · Não haverá...
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Data Tópico/Objetivo
Set
embr
o 18 Gastrulação20 Discussão periódicos25 Eixo DV27 Discussão periódicos
Out
ubro
2 Neurulação; Definição do campo neural
4 Discussão periódicos
9 Desenvolvimento do Membro
11Não haverá aula
1518 Discussão periódicos23 Genes Hox25 Discussão periódicos30 Prova escrita
Nota: (apresentação x 1 +participação em discussão x1 + prova escrita x 2)/4A= 8-10B=6-8C=5-6
http://tinyurl.com/ireneyan
Evaluating a paper
A thorough understanding and evaluation of a paper involves answering several questions:
a. What questions does the paper address?
b. What are the main conclusions of the paper?
c. What evidence supports those conclusions?
d. Do the data actually support the conclusions?
e. What is the quality of the evidence?
f. Why are the conclusions important ?
http://www.biochem.arizona.edu/classes/bioc568/papers.htm
Type of research Question asked:
Descriptive What is there? What do we see?
ComparativeHow does it compare to other organisms? Are our findings general?
Analytical How does it work? What is the mechanism?
1. De onde as células vêm? PARA ONDE vão?
2. O que estas células PODEM ser?
3. QUANDO elas decidem o que vão ser?
4. COMO ocorre esta decisão?
5. Como é determinada a MORFOLOGIA tecidual?
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Descrição Expressão Cirurgia Descrição
•Embriologia Clássica•Mapa do Destino•Imunohistoquímica •Hibridização in situ•RT-PCR
Cirurgia
•Cultura•Transplantação•Ablação
Expressão
•SUPERexpressão
•SUBexpressão•RNA antisenso•RNAi•Knockout ou mutação
1. De onde as células vêm? PARA ONDE vão?
2. O que estas células PODEM ser?
3. QUANDO elas decidem o que vão ser?
4. COMO ocorre esta decisão?
5. Como é determinada a MORFOLOGIA tecidual?
Como seguir uma célula entre várias?
Gilbert 8th Edition
A injeção de corante flourescente permite acompanhar o destino celular
Gilbert 8th Edition
A injeção de corante flourescente permite acompanhar o destino celular
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Injeção de corante fluorescente(Dale e Slack, 1987;Lane e Sheets, 2000)
Mapa do destino = Fate MapInjeção de Corante Fluorescente
Hibridação in situ
RT-PCR= Reverse-TranscriptasePCRConversão de RNA em cDNA (DNA complementar)
Descrição
•Embriologia Clássica•Mapa do Destino•Imunohistoquímica •Hibridização in situ•RT-PCR
Cirurgia
•Cultura•Transplantação•Ablação
Expressão
•SUPERexpressão
•SUBexpressão•RNA antisenso•RNAi•Knockout ou mutação
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uper Expressão Gênica!!!!
•Microinjeção de RNA
•Eletroporação
•Infecção
•Transgênese
Microinjeção de RNA
Eletroporação Transgênicos por integração no prónucleo
Descrição
•Embriologia Clássica•Mapa do Destino•Imunohistoquímica •Hibridização in situ•RT-PCR
Cirurgia
•Cultura•Transplantação•Ablação
Expressão
•SUPERexpressão
•SUBexpressão•RNA antisenso•RNAi•Knockout ou mutação
RNA antisenso
RNA mensageiro
DNA
Inibição da Tradução
RNA antisenso inibe a tradução
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RNAi1. RNA dupla fita (dsRNA) reconhecido pelo complexo enzimático DICER
2. Clivagem do dsRNA em siRNA (silencing RNA)
3. siRNA utilizado como ‘molde’ pelo complexo RISC para reconhecimetdo do RNA-alvo a ser clivado
Knockout 1) Transfecção
Linhagemda massa celular interna
Massa Celular Interna
Blastocele
Trofoblasto
Zona Pelúcida
Ao final de várias mitoses, distinguem-se duas populações de células:•Massa Celular Interna•Trofoblasto
Embrião Propriamente Dito
Porção Embrionária da Placenta
Porção Embrionária da Placenta
Knockout : 2) RecombinaçãoO Knockout, ao contrário da transgênese, requer recombinação
Knockout : 3) Seleção
G418Neomicina
Knockout : 4) Barriga de aluguel
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Knockout : 5) Quimeras Transgênese: 6) Cruzamento
Descrição
•Embriologia Clássica•Mapa do Destino•Imunohistoquímica •Hibridização in situ•RT-PCR
Cirurgia
•Cultura•Transplantação•Ablação
Expressão
•SUPERexpressão
•SUBexpressão•RNA antisenso•RNAi•Knockout ou mutação
1. De onde as células vêm? PARA ONDE vão?
2. O que estas células PODEM ser?
3. QUANDO elas decidem o que vão ser?
4. COMO ocorre esta decisão?
5. Como é determinada a MORFOLOGIA tecidual?
•Transplantação: troca de microambiente/mudança de contextoO transplante de vesícula óptica para o ectoderma do tronco em anfíbios gera cristalino ectópicos.O ectoderma do tronco tem potencial de formar crist alino.
doador
aceptor
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Os genes A,B e C contribuem para o desenvolvimento de vísceras: Sua relação pode ser resumida como:
A → B -|C -| formação de vísceras
2) Expressão de A iráa) estimular formação de vísceras b) inibir formação de vísceras
3) Num animal mutante defeituoso para o gene B (não expressa), o embrião irá a) carecer de vísceras
b) desenvolver excesso de vísceras
4) Num animal com ganho de função de B, o mutante iráa) carecer de vísceras
b) desenvolver excesso de vísceras
5) Num animal com perda de função de C, o mutante iráa) carecer de vísceras
b) desenvolver excesso de vísceras
Você quer fazer um camudongo knockout. O gene normal tem 2 exons e um intron, como demonstrado abaixo. Qual das construções abaixo seria o ideal para fazer o knockout?
TK= gene da timidina quinase (necessário para o processo de seleção)
neoR= gene de resistência a neomicina (necessário para o processo de seleção)
Os genes A,B e C contribuem para o desenvolvimento de vísceras: Sua relação pode ser resumida como:
A → B -|C -| formação de vísceras
2) Expressão de A iráa)estimular formação de vísceras b) inibir formação de vísceras
3) Num animal mutante defeituoso para o gene B (não expressa), o embrião irá a) carecer de vísceras
b) desenvolver excesso de vísceras
4) Num animal com ganho de função de B, o mutante iráa) carecer de vísceras
b) desenvolver excesso de vísceras
5) Num animal com perda de função de C, o mutante iráa) carecer de vísceras
b) desenvolver excesso de vísceras
Você quer fazer um camudongo knockout. O gene normal tem 2 exons e um intron, como demonstrado abaixo. Qual das construções abaixo seria o ideal para fazer o knockout?
TK= gene da timidina quinase (necessário para o processo de seleção)
neoR= gene de resistência a neomicina (necessário para o processo de seleção)
It is not birth, marriage or death, but gastrulation, which is truly the most important time in your life
Lewis Wolpert (1986)
O evento mais importante da sua vidanão é o seu nascimento, seu casamento, sequer a sua
morte. É a Gastrulação.(e o aprendizado sobre este)
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•Definição dos Folhetos Embrionários:
Ectoderma,Mesoderma,Endoderma
•Requer um rearranjo celular extenso :
MOVIMENTOS MORFOGENÉTICOS
•Requer sinalização inter e intracelular
GRADIENTES MORFOGENÉTICOS
GASTRULAÇÃO
HoloblásticoRadial(ANFÍBIOS)
HoloblásticoRotacional(MAMÍFEROS)
MeroblásticoDiscoidal(RÉPTEIS, PEIXES,AVES)
CLIVAGEM EM VERTEBRADOS
*
dorsalventral
http://www.youtube.com/watch?v=c5E1Z4KuDCU&feature=fvwrel
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1. Formação de células-garrafa2. Invaginação do lábio do blastóporoDORSAL3. Invaginação do lábio do blastóporo ventral4. Deslocamento da Blastocele5. Formação to Tampão Vitelínico e do Arquêntero
O lábio do blastóporo é formado por células-garrafa
Mudança de FORMA CELULAR
O Arquêntero é formado pela fenda entre as células que involuem e as células vitelínicas
Fig 10.7
EctodermaMesodermaEndoderma
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Formação do EPI e HIPOblasto
Stern et al.
Início da linha primitiva a partir da Zona Marginal Posterior
Gastrulação:Formação do Ectoderma, Mesodermae Endoderma a partir do Epiblasto e Hipoblasto
A mesoderma se dá por DELAMINAÇÃO de células do Epiblasto no nó de Hensen e na linha primitiva
As células que ingressam pela linha primitiva têm dois destinos:Espaço entre Epi e HipoblastoDeslocam e substituem o Hipoblasto secundário, formando o endoderma definitivo
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As células do Epiblasto que migram
Para o espaço “do meio”: MesodermaPara a camada hipoblástica: Endoderma
As células do Hipoblasto são deslocadas lateralmente para formarem a VESÌCULA VITELÌNICA
http://www.youtube.com/watch?v=x-p_ZkhqZ0M&feature=related
As células do futuro mesoderma preenchem o espaço entre o EPI e HIPOblasto EXCETO na Membrana BucofaríngeaMembrana Cloacal
** *
* *
Anterior
Posterior
Yang, X., D. Dormann, A. E. Münsterberg and C. J. Weijer. 2002. Dev. Cell 3: 425–437.
Região mais anterior da linha Região mais posterior da linha
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As células da região mais anterior da linha primitiva formam o endoderma anterior e o mesoderma pré-cordal
As células da região mediana da linha primitiva formam a notocorda, e estruturas mesodérmicas laterais
As células da região mediana da linha primitiva formam a notocorda, e estruturas mesodérmicas laterais
As células do EPIBLASTO que migraram formam o• Mesodermana blastocele•Endodermaquando se inserem no Hipoblasto
As que permanecem na superfície formam a Ectoderma
www.stemcells.nih.gov
O blastocisto de mamífero contêm MASSA CELULAR INTERNA que formará o embrião propriamente dito
e o TROFOECTODERMA, que formará os anexos embrionários
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http://www.youtube.com/watch?v=9XV9c-97Wc4created by Annie Poon in collaboration with Mary Madabhushi
Movimentos Morfogenéticos : a força motriz da gastrulação O QUE DEFINE AS CÉLULAS DO ORGANIZADOR?
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O que direciona a migração celular? Como que termina a gastrulação?
Café... Café...
Cabou!!
http://tinyurl.com/ireneyan