Aula 11 Cromatografia Líquida 2S2012

7/25/2019 Aula 11 Cromatografia Lquida 2S2012

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Uma das diferenas entre a CG e a CL so asconfiguraes experimentais:

Slido

lquido sobreum slido

FASEESTACIONRIA

CONFIGURAOEXPERIMENTAL

PLANAR

COLUNA


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Ex de interao analito - FE

Equilbrio FE FM (partio na crom. Lquido-lquido)

Diferente para as substncias diferentesPolaridade

Tamanho


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Cromatografia em coluna

Convencional(Clssica)

Solvente

Fase estacionria

Suporte inerte

Lquida de alta eficincia - CLAE(HPLC)

- Colunas verticais (FM - gravidade)- Anlises quali e quantitativas- Baixo custo

- Baixa frequncia- Desempenho regular

- Colunas e FM altas presses- Anlises quali e quantitativas- Desempenho analtico satisfatrio

- Rapidez analtica, automao- Custo elevado ...


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Cromatografia lquida de alta

eficincia (CLAE)- Amplamente utilizada

- Dentre as modalidade mais importantes da cromatografia- Vem se desenvolvendo desde a dcada de 70

NO UMA TCNICA DE ANLISE ABSOLUTA

Necessidade de calibrao

RESULTADO : Amostras x Padres

(cromatograma)


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Subdivises da CLAE

Tipo de FE e o MECANISMO de separao

Cromatografia lquido-slido: CLS FE um slido mecanismo de adsoro

Cromatografia lquida de fase ligada: CLFLFE um lquido ligado quimicamente a um suporte slido

mecanismo de partio

Cromatografia lquido-lquido: CLL FE um lquido que recobre um slido

mecanismo de partio


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Cromatografia por excluso: CE

FE um gel que recobre um slido comporosidade controladaAplicao importante: anlise de polmeros(GPC)

Cromatografia de troca inica: CTI

FE slida contm grupos NR3+ (para troca

aninica) ou grupos SO3-

(para troca catinica)Determinao de compostos de carterinico (aminocidos, nions inorgnicos,ons metlicos, etc)

Mesmo mecanismo estudado da Prtica 10 !


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Cromatografia por afinidade: CA

FE possui substncias como enzimas e antgenos: interao seletivacom protenas e anticorpos

Cromatografia quiral: CQ

FE possui compostos com carbonos assimtricos (C*) para interagirseletivamente com compostos quirais


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Separao e Sinal analtico

FM

FM

FM

FM

FM

FM + componente separado

Cromatograma

Tempo de reteno

Sinal


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Entendendo o cromatograma

Diferentes espcies SAEM DA COLUNA em tempos diferentes: tr(tr= tempo de reteno medida em funo do tempo)

Tempo de reteno

Re

sposta

do

detector

Muita interaoPouca interao


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Anlise quantitativa

Quantidades iguais de substncias diferentes geram picoscromatogrficos com reas diferentes

Necessidade de calibrao:

Relaciona-se as reas dos picos com as concentraes

Anlise de PADRES e AMOSTRAS nas MESMAS CONDIES

Resposta

dod

etector

Concentrao do padro, no tr especfico

Equao de reta


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Sistema debombeamento

Reservatriode FM

Vlvula deamostragem

Colunacromatogrfica

Detector Registrador

frasco deplstico

ouvidro

+

Solvente(s)

orgnico(s)

CiclohexanoTetracloreto de carbonoToluenoEtanolAcetato de etila

MetanolAcetonitrilagua

(VERIFICAR TABELAS)

eliminao departculas maiores

que 5 mretirada de gases

Dissolvidos

Ultrasomou

Borbulhamento gases inertes

USO(preparao diria)

CUIDADOS

Ordem crescentede polaridade

gua


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Reservatriode FM

Vlvula deamostragem

Colunacromatogrfica


Impulsionar a FM para dentro da coluna com vazo constante e reprodutvel

BOMBAS DE ALTA PRESSO

Composio constanteeluio ISOCRTICA

Composio varivelEluio por GRADIENTE ou

Eluio por programao de solvente

Bomba de seringa

Bomba pneumtica

Amostras complexasCompostos de polaridade

muito diferente

Bomba recproca

Proporo doSolvente mais polar


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Reservatriode FM

Vlvula deamostragem

Colunacromatogrfica


Ex: Bomba recproca (uma das mais usadas)

Desvantagens:

Vazo pulsada amortecedorCavitao (bolhas) devido compresso

Vantagem:

Mudana da fase mvel

Para coluna


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Reservatriode FM

Vlvula deamostragem

Colunacromatogrfica


Dispositivo de ao inoxidvel com uma ala de amostragemque permite introduzir volumes exatos e precisos na coluna

ALA TROCVEL Volumes de 2 a 1000 L


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Reservatriode FM

Vlvula deamostragem

Colunacromatogrfica


Coluna tubo de ao inoxidvel separao

Capacidade:dimenses

i= 1 20 mm

L= 3 25 cm(limitado pela P trabalho)

FE Partculas com na faixa de m

Uso de partculas pequenas melhor separao (aumenta N)

+

FM

DUASCOMBINAES

Fase reversa

Fase normal

FE apolar (baixa polaridade)FM polar

FE polarFM apolar (baixa polaridade)


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EFICINCIA DA COLUNA

REPRESENTADADA POR NNmero de pratos tericos

N = 16

tr

W

2

Quanto maior o nmero de etapas, mais eficiente a separao

No implica em rapidez !Esta dada pela Altura do prato (H): H= L / N,

em que valores pequenos referem-se a colunas rpidas

- Determina a resoluo do cromatograma- Relacionada ao no de etapas de equilbrio entre o soluto naFE e o soluto na FM

Sina

ldo

detector

Tempo de reteno


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Consideraes prticas

Vrias configuraes instrumentais podem ser empregadas

determinao de vrios tipos de substncias

(mesmo em amostras complexas)

sistema alta presso: checar vazamentos

As condies instrumentais e de preparo de amostra influenciamno resultado

para minimizar os erros experimentais pode-se utilizar padresinternos

(substncia com caractersticas fsico-qumicas semelhantes s doanalito e que adicionada em quantidade fixae conhecida)


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Referncias

Skoog, D. A., Holler, F. J.; Nieman, T. A.Principles of Instrumental Analysis5th ed., Saunders College Publishing: Philadelphia, 1998

Harris, D. C.Anlise Qumica Quantitativa

7a ed., LTC Livros Tcnicos e Cientficos Editora, 2008

Collins, C. H., Braga, G. L., Bonato, P. S.

Fundamentos de Cromatografia1a ed., Editora UNICAMP: Campinas, 2006

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