Aspectos importantes de microbiologia: coleta, preservação de espécimes e noções de biologia...
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Aspectos importantes de microbiologia
coleta preservaccedilatildeo de espeacutecimes e noccedilotildees de
biologia molecularMaria Clara Padoveze
Divisatildeo de Infecccedilatildeo Hospitalar
Microbiologia ndash Surtos de IH
bull Todo resultado liberado pelo laboratoacuterio de microbiologia eacute consequumlecircncia da qualidade da amostra recebida
bull O material coletado deve ser representativo do processo infeccioso investigado devendo ser eleito o melhor siacutetio da lesatildeo evitando contaminaccedilatildeo com as aacutereas adjacentes
bull A coleta e o transporte inadequados podem ocasionar falhas no isolamento do agente etioloacutegico e favorecer o desenvolvimento da flora contaminante induzindo a um resultado inapropriado
bull procedimentos adequados de coleta devem ser adotados para evitar o isolamento de um ldquofalsordquo agente etioloacutegico
bull Na amostra devem estar identificadosndash 1048707 Nome e registro do pacientendash 1048707 Leito ou ambulatoacuterio e especialidadendash 1048707 Material colhidondash 1048707 Data hora e quem realizou a coleta
Microbiologia ndash Surtos de IH
Consideraccedilotildees gerais da coleta
bull 1048707 Colher antes da antibioticoterapia sempre que possiacutevelbull 1048707 Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais
cliacutenicosbull 1048707 Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha
maior probabilidade de ser isoladobull 1048707 Considerar o estaacutegio da doenccedila na escolha do material
Patoacutegenos enteacutericos causadores de diarreacuteia estatildeo presentes em maior quantidade e satildeo mais facilmente isolados durante a fase aguda ou diarreacuteica do processo infeccioso intestinal
bull 1048707 Quantidade suficiente de material deve ser coletado para permitir uma completa anaacutelise microbioloacutegica
bull O pedido do exame deve conter as informaccedilotildees necessaacuterias para o perfeito desenvolvimento da anaacutelise cliacutenica do espeacutecime
Consideraccedilotildees de seguranccedila
bull 1048707 Utilizar as barreiras de proteccedilatildeo necessaacuterias a cada procedimento
bull 1048707 Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patogecircnica
bull 1048707 Usar frascos e meios de transporte apropriadosbull 1048707 Natildeo manusear a amostra em tracircnsitobull Natildeo contaminar a superfiacutecie externa do frasco de
coleta e verificar se ele estaacute firmemente vedado(caso ocorram respingos ou contaminaccedilatildeo na parte
externa do frasco fazer descontaminaccedilatildeo com aacutelcool 70)
bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material
bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados
bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios
bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos
bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio
Consideraccedilotildees de seguranccedila
TRANSPORTE DAS AMOSTRAS
bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para
ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo
ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida
ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar
ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte
Amostras Inadequadas
bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)
bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a
temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem
tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida
colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes
microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees
natildeo apropriadas
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
PREPARO DE CULTURAS
bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso
Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado
incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento
e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento
PUREZA DAS CULTURAS
bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza
bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada
VIABILIDADE DA CULTURA
bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
ESTOQUE DE CULTURAS
bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Microbiologia ndash Surtos de IH
bull Todo resultado liberado pelo laboratoacuterio de microbiologia eacute consequumlecircncia da qualidade da amostra recebida
bull O material coletado deve ser representativo do processo infeccioso investigado devendo ser eleito o melhor siacutetio da lesatildeo evitando contaminaccedilatildeo com as aacutereas adjacentes
bull A coleta e o transporte inadequados podem ocasionar falhas no isolamento do agente etioloacutegico e favorecer o desenvolvimento da flora contaminante induzindo a um resultado inapropriado
bull procedimentos adequados de coleta devem ser adotados para evitar o isolamento de um ldquofalsordquo agente etioloacutegico
bull Na amostra devem estar identificadosndash 1048707 Nome e registro do pacientendash 1048707 Leito ou ambulatoacuterio e especialidadendash 1048707 Material colhidondash 1048707 Data hora e quem realizou a coleta
Microbiologia ndash Surtos de IH
Consideraccedilotildees gerais da coleta
bull 1048707 Colher antes da antibioticoterapia sempre que possiacutevelbull 1048707 Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais
cliacutenicosbull 1048707 Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha
maior probabilidade de ser isoladobull 1048707 Considerar o estaacutegio da doenccedila na escolha do material
Patoacutegenos enteacutericos causadores de diarreacuteia estatildeo presentes em maior quantidade e satildeo mais facilmente isolados durante a fase aguda ou diarreacuteica do processo infeccioso intestinal
bull 1048707 Quantidade suficiente de material deve ser coletado para permitir uma completa anaacutelise microbioloacutegica
bull O pedido do exame deve conter as informaccedilotildees necessaacuterias para o perfeito desenvolvimento da anaacutelise cliacutenica do espeacutecime
Consideraccedilotildees de seguranccedila
bull 1048707 Utilizar as barreiras de proteccedilatildeo necessaacuterias a cada procedimento
bull 1048707 Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patogecircnica
bull 1048707 Usar frascos e meios de transporte apropriadosbull 1048707 Natildeo manusear a amostra em tracircnsitobull Natildeo contaminar a superfiacutecie externa do frasco de
coleta e verificar se ele estaacute firmemente vedado(caso ocorram respingos ou contaminaccedilatildeo na parte
externa do frasco fazer descontaminaccedilatildeo com aacutelcool 70)
bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material
bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados
bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios
bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos
bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio
Consideraccedilotildees de seguranccedila
TRANSPORTE DAS AMOSTRAS
bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para
ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo
ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida
ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar
ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte
Amostras Inadequadas
bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)
bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a
temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem
tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida
colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes
microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees
natildeo apropriadas
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
PREPARO DE CULTURAS
bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso
Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado
incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento
e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento
PUREZA DAS CULTURAS
bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza
bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada
VIABILIDADE DA CULTURA
bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
ESTOQUE DE CULTURAS
bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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bull procedimentos adequados de coleta devem ser adotados para evitar o isolamento de um ldquofalsordquo agente etioloacutegico
bull Na amostra devem estar identificadosndash 1048707 Nome e registro do pacientendash 1048707 Leito ou ambulatoacuterio e especialidadendash 1048707 Material colhidondash 1048707 Data hora e quem realizou a coleta
Microbiologia ndash Surtos de IH
Consideraccedilotildees gerais da coleta
bull 1048707 Colher antes da antibioticoterapia sempre que possiacutevelbull 1048707 Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais
cliacutenicosbull 1048707 Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha
maior probabilidade de ser isoladobull 1048707 Considerar o estaacutegio da doenccedila na escolha do material
Patoacutegenos enteacutericos causadores de diarreacuteia estatildeo presentes em maior quantidade e satildeo mais facilmente isolados durante a fase aguda ou diarreacuteica do processo infeccioso intestinal
bull 1048707 Quantidade suficiente de material deve ser coletado para permitir uma completa anaacutelise microbioloacutegica
bull O pedido do exame deve conter as informaccedilotildees necessaacuterias para o perfeito desenvolvimento da anaacutelise cliacutenica do espeacutecime
Consideraccedilotildees de seguranccedila
bull 1048707 Utilizar as barreiras de proteccedilatildeo necessaacuterias a cada procedimento
bull 1048707 Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patogecircnica
bull 1048707 Usar frascos e meios de transporte apropriadosbull 1048707 Natildeo manusear a amostra em tracircnsitobull Natildeo contaminar a superfiacutecie externa do frasco de
coleta e verificar se ele estaacute firmemente vedado(caso ocorram respingos ou contaminaccedilatildeo na parte
externa do frasco fazer descontaminaccedilatildeo com aacutelcool 70)
bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material
bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados
bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios
bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos
bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio
Consideraccedilotildees de seguranccedila
TRANSPORTE DAS AMOSTRAS
bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para
ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo
ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida
ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar
ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte
Amostras Inadequadas
bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)
bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a
temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem
tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida
colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes
microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees
natildeo apropriadas
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
PREPARO DE CULTURAS
bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso
Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado
incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento
e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento
PUREZA DAS CULTURAS
bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza
bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada
VIABILIDADE DA CULTURA
bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
ESTOQUE DE CULTURAS
bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
- Slide 1
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Consideraccedilotildees gerais da coleta
bull 1048707 Colher antes da antibioticoterapia sempre que possiacutevelbull 1048707 Observar a anti-sepsia na coleta de todos os materiais
cliacutenicosbull 1048707 Colher do local onde o microrganismo suspeito tenha
maior probabilidade de ser isoladobull 1048707 Considerar o estaacutegio da doenccedila na escolha do material
Patoacutegenos enteacutericos causadores de diarreacuteia estatildeo presentes em maior quantidade e satildeo mais facilmente isolados durante a fase aguda ou diarreacuteica do processo infeccioso intestinal
bull 1048707 Quantidade suficiente de material deve ser coletado para permitir uma completa anaacutelise microbioloacutegica
bull O pedido do exame deve conter as informaccedilotildees necessaacuterias para o perfeito desenvolvimento da anaacutelise cliacutenica do espeacutecime
Consideraccedilotildees de seguranccedila
bull 1048707 Utilizar as barreiras de proteccedilatildeo necessaacuterias a cada procedimento
bull 1048707 Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patogecircnica
bull 1048707 Usar frascos e meios de transporte apropriadosbull 1048707 Natildeo manusear a amostra em tracircnsitobull Natildeo contaminar a superfiacutecie externa do frasco de
coleta e verificar se ele estaacute firmemente vedado(caso ocorram respingos ou contaminaccedilatildeo na parte
externa do frasco fazer descontaminaccedilatildeo com aacutelcool 70)
bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material
bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados
bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios
bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos
bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio
Consideraccedilotildees de seguranccedila
TRANSPORTE DAS AMOSTRAS
bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para
ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo
ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida
ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar
ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte
Amostras Inadequadas
bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)
bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a
temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem
tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida
colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes
microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees
natildeo apropriadas
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
PREPARO DE CULTURAS
bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso
Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado
incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento
e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento
PUREZA DAS CULTURAS
bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza
bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada
VIABILIDADE DA CULTURA
bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
ESTOQUE DE CULTURAS
bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Consideraccedilotildees de seguranccedila
bull 1048707 Utilizar as barreiras de proteccedilatildeo necessaacuterias a cada procedimento
bull 1048707 Toda amostra deve ser tratada como potencialmente patogecircnica
bull 1048707 Usar frascos e meios de transporte apropriadosbull 1048707 Natildeo manusear a amostra em tracircnsitobull Natildeo contaminar a superfiacutecie externa do frasco de
coleta e verificar se ele estaacute firmemente vedado(caso ocorram respingos ou contaminaccedilatildeo na parte
externa do frasco fazer descontaminaccedilatildeo com aacutelcool 70)
bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material
bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados
bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios
bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos
bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio
Consideraccedilotildees de seguranccedila
TRANSPORTE DAS AMOSTRAS
bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para
ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo
ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida
ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar
ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte
Amostras Inadequadas
bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)
bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a
temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem
tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida
colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes
microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees
natildeo apropriadas
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
PREPARO DE CULTURAS
bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso
Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado
incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento
e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento
PUREZA DAS CULTURAS
bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza
bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada
VIABILIDADE DA CULTURA
bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
ESTOQUE DE CULTURAS
bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
- Slide 1
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bull 1048707 Natildeo contaminar a requisiccedilatildeo meacutedica que acompanha o material
bull 1048707 As amostras deveratildeo ser transportadas em sacos plaacutesticos fechados
bull 1048707 Identificar claramente a amostra coletada com todos os dados necessaacuterios
bull 1048707 Colocar a identificaccedilatildeo no frasco de coleta e nunca na tampa ou sobre roacutetulos
bull 1048707 Encaminhar os materiais imediatamente ao laboratoacuterio
Consideraccedilotildees de seguranccedila
TRANSPORTE DAS AMOSTRAS
bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para
ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo
ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida
ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar
ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte
Amostras Inadequadas
bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)
bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a
temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem
tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida
colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes
microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees
natildeo apropriadas
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
PREPARO DE CULTURAS
bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso
Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado
incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento
e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento
PUREZA DAS CULTURAS
bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza
bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada
VIABILIDADE DA CULTURA
bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
ESTOQUE DE CULTURAS
bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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TRANSPORTE DAS AMOSTRAS
bull Transportar as amostras IMEDIATAMENTE ao laboratoacuterio para
ndash 1048707 Assegurar a sobrevivecircncia e isolamento do microrganismo
ndash 1048707 Evitar o contato prolongado dos microorganismos com anesteacutesicos utilizados durante a coleta pois eles poderatildeo exercer atividade bactericida
ndash 1048707 Evitar erros de interpretaccedilatildeo nas culturas quantitativas principalmente urina e lavado broncoalveolar
ndash 1048707 Consultar o laboratoacuterio para verificar a disponibilidade dos meios de transporte
Amostras Inadequadas
bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)
bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a
temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem
tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida
colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes
microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees
natildeo apropriadas
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
PREPARO DE CULTURAS
bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso
Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado
incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento
e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento
PUREZA DAS CULTURAS
bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza
bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada
VIABILIDADE DA CULTURA
bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
ESTOQUE DE CULTURAS
bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Amostras Inadequadas
bull 1048707 Material cliacutenico recebido em soluccedilatildeo de fixaccedilatildeo (formalina)
bull 1048707 Ponta de cateter de Foleybull 1048707 Material conservado inadequadamente com relaccedilatildeo a
temperatura bull 1048707 Frascos natildeo esteacutereisbull 1048707 Presenccedila de vazamentos frascos quebrados ou sem
tampa com contaminaccedilatildeo na superfiacutecie externabull 1048707 Mais de uma amostra de urina fezes escarro ferida
colhida no mesmo dia e da mesma origembull 1048707 Swab uacutenico com muacuteltiplas requisiccedilotildees de testes
microbioloacutegicosbull 1048707 Swab secobull 1048707 Culturas para anaeroacutebios recebidas em condiccedilotildees
natildeo apropriadas
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
PREPARO DE CULTURAS
bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso
Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado
incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento
e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento
PUREZA DAS CULTURAS
bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza
bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada
VIABILIDADE DA CULTURA
bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
ESTOQUE DE CULTURAS
bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
PREPARO DE CULTURAS
bull Uma vez obtida uma cultura satisfatoacuteria a mesma deve ser mantida pura e viaacutevel e para isso eacute preciso
Transferir periodicamente a cultura em um meio deـcultura adequado
incubar ateacute que a cultura atinja a fase estacionaacuteria ـmaacutexima de crescimento
e estocar em temperatura apropriada para impedir ـmaior crescimento
PUREZA DAS CULTURAS
bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza
bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada
VIABILIDADE DA CULTURA
bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
ESTOQUE DE CULTURAS
bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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PUREZA DAS CULTURAS
bull Para assegurar a pureza das culturas estas devem ser obtidas periodicamente de uma cultura e verificadas regularmente quanto agrave pureza
bull Os meacutetodos para avaliar a pureza da cultura variam com o tipo de cultura a ser testada
VIABILIDADE DA CULTURA
bull A viabilidade eacute avaliada pela taxa de crescimento e atividade metaboacutelica A deterioraccedilatildeo das culturas pode resultar do manuseio incorreto do cultivo inadequado de transferecircncias frequumlentes por um longo periacuteodo meio de cultura improacuteprio mutaccedilatildeo e ataque da bacteacuteria por um bacterioacutefago
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
ESTOQUE DE CULTURAS
bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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bull O estoque de culturas deve ser preparado de modo que as culturas sejam armazenadas e preservadas por um longo periacuteodo sem transferecircncia
bull Tais culturas tendem a permanecerem estaacuteveis e satildeo utilizadas como fonte de cultura caso a cultura ativa seja perdida eou deteriorada
MANUTENCcedilAtildeO DAS CULTURAS
Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Surtosbull Colher material indicado pelo estudo
epidemioloacutegicobull Natildeo colher amostras cuja interpretaccedilatildeo dos
resultados natildeo seraacute esclarecedora para o surto bull Natildeo confundir procedimentos cliacutenicos e
epidemioloacutegicos com anaacutelise fiscalbull O exame microbioloacutegico eacute um procedimento que
envolve custos e deve ser um recurso utilizado com racionalidade
bull Esclarecer o laboratoacuterio cliacutenico quando se tratar de amostras de investigaccedilatildeo de surto e quais as possiacuteveis hipoacuteteses
Surtosbull Colher amostras cliacutenicas que visem o esclarecimento do
diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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diagnoacutesticondash Confirmar a identificaccedilatildeo da espeacutecie ou da
susceptibilidade do microrganismo com um laboratoacuterio de referecircncia se houver necessidade
ndash Ser criterioso na indicaccedilatildeo de coletas de profissionais de sauacutede para natildeo gerar problemas institucionais
bull Quando necessaacuteria a coleta esclarecer o profissional suficientemente
bull Ter clareza de qual seraacute o procedimento a ser adotado em caso de resultado positivo antes de iniciar a indicaccedilatildeo da coleta (ex afastamento tratamentoetc)
bull Manter a confidencialidade
Surtos
bull Colher amostras ambientais que possam ser correlacionadas com o diagnoacutestico estabelecido
ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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ndash Ter em mente a hipoacutetese de que se trata de surto propagado por pessoa-a-pessoa ou fonte uacutenica para saber indicar a coleta adequada
ndash Ter em mente qual o possiacutevel agente e seus provaacuteveis reservatoacuterios e formas de transmissatildeo (buscar na literatura)
ndash Natildeo colher amostras ambientais se o laboratoacuterio cliacutenico natildeo dispuser de recursos teacutecnicos para processaacute-la Se necessaacuterio contatar um laboratoacuterio de referecircncia
Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Pseudo-surtos
bull Mais frequumlentemente associado a contaminaccedilatildeo durante a execuccedilatildeo do exame microbioloacutegico
bull Eventualmente pode ser associado com contaminaccedilatildeo sistemaacutetica de coletasndash Anti-seacutepticos contaminadosndash Recipientes contaminadosndash Profissional de sauacutede
Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Anaacutelise Fiscal
Fonte wwwincqsfiocruzbrmanualhtm
Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
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Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Anaacutelise fiscal
bull O processo de apreensatildeo de amostra para anaacutelise fiscal de medicamentos soacute tem validade oficial se tal accedilatildeo for desencadeada pela autoridade sanitaacuteria competente (vigilacircncias sanitaacuterias estaduais ou municipais) podendo ser desencadeada por denuacutencia embora nem toda denuacutencia gere uma anaacutelise fiscal ou indicado pelo Sistema de Monitorizaccedilatildeo de Medicamentos
Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Anaacutelise Fiscalbull A anaacutelise fiscal consistiraacute na coleta de amostra
representativa do estoque existente a qual dividida em trecircs partes seraacute tornada inviolaacutevel para que se assegurem as caracteriacutesticas de conservaccedilatildeo e autenticidade
bull Uma parte eacute entregue ao detentor ou responsaacutevel a fim de servir como contraprova e as duas outras partes satildeo imediatamente encaminhadas ao laboratoacuterio oficial do estado para realizaccedilatildeo das anaacutelises indispensaacuteveis ndash Satildeo necessaacuterios materiais suficientes para trecircs anaacutelisesndash Tabela de nuacutemero miacutenimo de itens para anaacutelise fiscal de
medicamentos e produtos ANVISA FIOCRUZ
FONTE Informe SNVSAnvisaUFARM nordm 1 de 7 de maio de 2004 [wwwanvisagovbrfarmacovigilacircnciainformes2004]
Caracterizaccedilatildeo dos sistemas de tipagem
bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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bull 1 Tipabilidade habilidade da teacutecnica em produzir um resultado de tipagem para cada resultado
2 Reprodutibilidade capacidade de gerar os os mesmos resultados quando uma mesma cepa for testada em repetidos ensaios laboratoriais
bull 3 Poder discriminatoacuterio capacidade da teacutecnica em diferenciar isolados natildeo relacionados epidemiologicamente
bull 4 Facilidade de realizaccedilatildeobull 5 Facilidade de interpretaccedilatildeo
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Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Leito-Dia HC-UNICAMP 1998
Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Exemplos de tipagem molecular
Staphylococcus aureus Unidade de Pesquisa Cliacutenica UNICAMP 2004
Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Tipagem molecular
bull A determinaccedilatildeo de uma origem clonal para microrganismos isolados de diversas fontes (pacientes ou reservatoacuterios) eacute uma etapa importante na identificaccedilatildeo de surtos hospitalares
bull Informaccedilotildees quanto a origem clonal de isolados microbianos tambeacutem permite melhor elucidar a cadeia epidemioloacutegica e selecionar as medidas de controle mais objetivas
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
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bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Meacutetodos fenotiacutepicos
ndash Sorotipagemndash Perfil de susceptibilidade a antimicrobianosndash Susceptibilidade a bacterioacutefagos (fagotipagem)
bull Apresentam algumas limitaccedilotildees de tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
bull Microrganismos de uma mesma origem clonal podem apresentar diferenccedilas na manifestaccedilatildeo fenotiacutepica de alguns aspectos avaliados
Caracterizaccedilatildeo de clones
Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Meacutetodos genotiacutepicos
bull Baseado no polimorfismo encontrado no genomabull Particularidades que podem ser acessadas por
clivagem da fita genocircmica ou amplificaccedilatildeo de um fragmento
bull Resultado final padratildeo de bandas especiacutefico para o clone cuja aparecircncia lembra um coacutedigo de barras
bull Interpretaccedilatildeo envolve a comparaccedilatildeo de padrotildees estabelecendo criteacuterios de similaridade e diferenciaccedilatildeo
ndash Maior tipabilidade poder discriminatoacuterio e reprodutibilidade
Meacutetodos genotiacutepicos
Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Mais frequumlentemente utilizadosbull PCR = Polimerase Chain Reaction baseado
na amplificaccedilatildeo de uma sequumlecircncia do DNA e anaacutelise do seu polimorfismo
bull Anaacutelise de plasmiacutedeos baseado na anaacutelise do DNA extra-cromossocircmico de bacteacuterias
bull PFGE = Pulsed Field Gel Electrophoresis baseado na anaacutelise de diferenccedila entre os fragmentos produzidos pela clivagem do DNA com enzimas de restriccedilatildeo
Meacutetodos genotiacutepicos
bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
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bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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bull A seleccedilatildeo dos meacutetodos a serem utilizados depende de variaacuteveis comondash Tipo de microrganismo a ser estudadondash Tempo para execuccedilatildeo do ensaiondash Disponibilidade dos recursos
Tipagem molecular
bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
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bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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bull A utilizaccedilatildeo de recursos de tipagem molecular natildeo prescinde da necessidade de um esmerado estudo epidemioloacutegico do fenocircmeno
bull Nem todos os surtos requerem anaacutelises da origem clonal para seu esclarecimento
bull A adequada identificaccedilatildeo da espeacutecie e correta realizaccedilatildeo do perfil de susceptibilidade a antimicrobianos e condiccedilatildeo elementar para anaacutelise dos aspectos microbioloacutegicos do surto
Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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Referecircncias Bibliograacuteficas
bull LEVI CE Procedimentos Laboratoriais da Requisiccedilatildeo do Exame agrave Anaacutelise Microbioloacutegica IN ANVISA Manual de Microbiologia Cliacutenica para o Controle de Infecccedilatildeo em Serviccedilos de Sauacutede 2004 wwwanvisagovbr
bull Manual de Coleta wwwincqsfiocruzbrmanualhtmbull FORTALEZA CMCB Aplicaccedilatildeo dos sistemas de tipagem molecular agrave
epidemiologia hospitalar de bacteacuterias Monografia apresentada para qualificaccedilatildeo no Curso de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Patologia da Faculdade de Medicina de Botucatu Universidade Estadual de Satildeo Paulo - UNESP MAIO 1999
bull BRANCHINI MLM Aplicaccedilatildeo de Meacutetodos de Tipagem Molecular na Investigaccedilatildeo de surtos intra-hospitalares Tese de livre-docecircncia apresentada agrave Faculdade de Ciecircncias Meacutedicas da Universidade Estadual de Campinas ndash UNICAMP
bull PADOVEZE MC Estudo da Epidemiologia molecular dos Staphylococcus aureus Resistentes agrave Oxacilina em Pacientes Portadores de Siacutendrome de Imunodeficiecircncia Adquirida Tese apresentada ao Departamento de Microbiologia e Imunologia do Instituto de Biologia da Universidade Estadual de Campinas para obtenccedilatildeo do tiacutetulo de mestre
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