Apresentação do PowerPoint - Anatomia papel e caneta · 2020. 1. 29. · Significado de...
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PREPARO DE TECIDOS
(fixação, impregnação e coloração)
Ricardo Santos Simões
Leandro Sabará de Mattos
HISTOLOGIA
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Significado de Histologia
Do grego hydton, hystos que significa tecido ou trama e logos, estudo.
O termo tecido foi introduzido por Marie François Xavier Bichat(Fisiologista e Anatomista Francês), pois comparou sua trama com os fiosque formam um tecido (pano).
Sem o uso do microscópio Bichat examinou mais de seiscentos corpos eidentificou 21 tipos de tecidos formadores de órgãos no corpo humano.
Atualmente esses tecidos são agrupados em quatro tipos.
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Porque estudar Histologia?
Para se conhecer o tecido
normal e identificar lesões ao
microscópio de luz
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Exemplo de diagnóstico
anatomopatológico
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Coleta do material
- Evitar causar qualquer tipo de dano ao material
- Mergulhar a peça imediatamente em um fixador
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Fixador mais utilizado
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Formol
O formol é o aldeído fórmico, gás
É comercializado em solução aquosa a
39,9% (40%)
Decompõe-se rapidamente na presença da
luz em ácido fórmico, por isso, é
comercializado em frascos escuros contendo
metanol
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Como é normalmente preparado
Formol............................ .10 ml
Água destilada..................90 ml
(Formalina)
Desta maneira foi preconizado
que o formol é utilizado a 10%
(Na realidade é utilizado a 4%)
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A fixação é empregada para:
- Interromper o metabolismo celular;
- Evitar a autólise;
- Matar bactérias e fungos;
- Endurecer o tecido em consequência da ligação
cruzada ou da desnaturação das moléculas de
proteínas.
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aminoácido aminoácido
Pontes de
metileno
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Mecanismo de fixação do formol
(aldeído)
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Requisitos para uma boa fixação
1 – intervalo mínimo entre a coleta do material e afixação;
2 – Contato de todas as superfícies do líquido como fixador;
3 – Grande volume do líquido fixador (20 X).
4 – Peças com espessura mínima de 1 mm emáxima de 6 mm;
5 – Tipo de fixador.
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Formol ............................100 ml
Água destilada.................300 ml
Ácido acético glacial..........20 ml
Ácido pícrico.............à saturação
Solução de Bouin
Bouin alcoólico(Solução de Duboscq-Brasil)
Outros fixadores:
Etanol acético
Soluções de Carnoy, Gendre, Zenker, Helly
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Acondicionamento das amostras
identificação
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Tempo de fixação
Formol: 24 horas /48 horas
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Tecidos mineralizados
Ácido fórmico 8 a 10%
EDTA 7 a 10%
Tamponado
Descalcificadores
Osso
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Inclusão em parafina
Peça
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Processamento automatizado:
Aparelho histotécnico
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Microtomia
Junqueira e Carneiro, (1995)
Espessura de corte: de 4 a 6 μm
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Microtomia
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Extenção e estiramento dos
cortes em banho-maria
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Pesca dos cortes
Estufa 60º C
Secagem – 1 a 2 horas
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Melhor adesão dos cortesAlbumina
Para histologia
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Coloração com hematoxilina e eosina
Mais antiga coloração combinada e a mais difundida em todos os
laboratórios
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Coloração pela Hematoxilina e eosina (HE)
Hematoxilina (H)
Corante básico; cora estruturas ácidas (DNA, RNA)
estruturas basófilas
Eosina (E)
Corante ácido; cora estruturas básicas (citoplasma,componentes extracelulares)
estruturas eosinofílicas Coloração
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Hematoxilina (H)
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Eosina (E)
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Montagem da lâmina
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• Outros métodos de coloração
• Tricrômio
• Reticulina
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Aorta: orceína (fibras elásticas)
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Impregnação pela prata: fibras reticulares
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Tricrômico de Masson
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Vários componentes são perdidos durante o processamento
histológico de rotina
- Lipídios
- Glicogênio
- Proteoglicanos e GAGs
- Alternativa: fixadores não aquosos – álcool; Bouin
alcoólico
- Não incluir em parafina
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Cortes em congelação no criostato
Sudan Black
Congo Red
Oil red O
Sulfato de azul do nilo
Tetróxido de ósmio
Monta-se a lâmina em
glicerina
Método de identificação
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Lipídios em cortes por congelação no criostato
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Imuno-Histoquímica
• Identifica por intermédio de anticorpos algumas proteínas próprias daquele tecido
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Microscopia eletrônica