Análises Toxicológicas

ANÁLISES TOXICOLÓGICAS

JUCELINO NERY DA CONCEIÇÃO FILHOFarmacêutico-Bioquímico

Coordenador de Apoio Diagn. e Terapêutico

CIAVE

XXIX CURSO DE TOXICOLOGIA BÁSICAXXIX CURSO DE TOXICOLOGIA BÁSICA

LABORATÓRIOS DE TOXICOLOGIA NO BRASILLABORATÓRIOS DE TOXICOLOGIA NO BRASIL

-- Poucos existentesPoucos existentes

-- Alto custoAlto custo

-- Situação na BahiaSituação na Bahia

-- REBLASREBLAS

PRINCIPAIS OBJETIVOS:PRINCIPAIS OBJETIVOS:

• Afastar / confirmar uma intoxicação;

• Avaliar o grau de agressão;

• Auxiliar na avaliação do tratamento.

EXAMES LABORATORIAISEXAMES LABORATORIAIS

NAS INTOXICAÇÕESNAS INTOXICAÇÕES

Nem sempre os exames laboratoriais são imprescindíveis para o diagnóstico e/ou tomada de decisão.

• Análises Clínicas de RotinaAnálises Clínicas de Rotina:

�� Gerais - hemograma, glicemia, eletrólitos, uréia, creatinina, sumário de urina, etc.

� Específicas - tempo de protrombina, tempo de coagulação, ferro sérico, etc.



(exames complementares)(exames complementares)



(exames complementares)(exames complementares)

Agente Tóxico Exame Complementar Alteração . .

Abelhas hemograma leucocitose, neutrofilia, desv. esq.

CK / CK-MB elevação

Carbamazepina ionograma hipocalemia, hiponatremia

glicemia, TGO/TGP elevação

Chumbo hemograma bx. Hb / ponteado basófilo

Cianeto ácido lático elevação

hemogasometria elevação PvO2

Etanol glicemia diminuição

Serpentes peçonhentas tempo de coagulação elevação

•• Análises ToxicológicasAnálises Toxicológicas: análise do agente químico propriamente dito e/ou de seus produtos de biotransformação.



- Triagem (Triagem (screeningscreening)):

�� Qualitativo / semiquantitativo - Ex.: drogas de abuso, benzodiazepínicos, ADT, metais pesados, etc.

-- DosagemDosagem:

� Quantitativo - Ex.: fenobarbital sérico, colinesterase sérica, metahemoglobina, arsênico urinário.

ANÁLISES TOXICOLÓGICASANÁLISES TOXICOLÓGICAS

INDICADORES BIOLÓGICOS:

1. De absorção

2. De efeito



1. De absorção2. De efeito

Parâmetro que indica a absorção de um agente tóxicoatravés da presença da substância exógena (toxicanteinalterado) ou seu metabólito no organismo.



1. De absorção 2. De efeito

Representa o resultado de uma interação química entre:• a quantidade de agente químico absorvido;• receptores biológicos do organismo exposto.

Reflete modificações precoces que precedem danos estruturais oufuncionais progressivos a nível molecular, celular ou tissular.

- Parâmetro que indica o efeito do agente tóxico no organismo -


CARACTERÍSTICA FUNDAMENTAL

� ordem de traços (ppm/ppb);

� ligada a uma matriz biológica.

ANALISTA X CLÍNICO

• Máximo de informações

• Entrosamento

QUESTÕES PRÉQUESTÕES PRÉ--ANALÍTICASANALÍTICAS

• Para quê? (Finalidade)

• O quê? (Toxicante)

• Onde? (Amostra)

• Como? (Método)

�� FINALIDADEFINALIDADE(para quê?)(para quê?)

• Forense

• Urgência

• Medicamentos

• Alimentos

• Controle do grau de exposição ...

�� FINALIDADE FINALIDADE (cont.)(cont.)

... Controle do grau de exposiçãoControle do grau de exposição

� Ocupacional

� Ambiental

� Diagnóstico diferencial

� Drogas de importância social

Fundamentos: Toxicocinética / Fundamentos: Toxicocinética / ToxicodinâmicaToxicodinâmica

–– Classes para avaliação:Classes para avaliação:� substâncias químicas inalteradas� produtos do metabolismo do toxicante� parâmetros bioquímicos e hematológicos

� agente químico precursor� metabólito� indicador de efeito

�� TOXICANTETOXICANTE(O quê?)(O quê?)

VENENO

RINS

PULMÕES

BILE, SUOR, ETC.

ABSORÇÃO DISTRIBUIÇÃOBIOTRANSFORMAÇÃO

EXCREÇÃO

TOXICOCINÉTICA

Exemplo:Exemplo:

biossíntese do heme

ALA ALA-U

ALA-D PbPb

PROTOPORFIRINA

Sangue Urina

PbPb

PORFOBILINOGÊNIO

HEMEheme-sintetase PbPb

ALA-sintetase (�)

(�)(�)

�� TOXICANTE TOXICANTE (cont.)(cont.)

Seleção da amostra que melhor represente a biodisponibilidade, a eliminação ou o efeito do toxicante no organismo.

�� AMOSTRAAMOSTRA(onde?)(onde?)

Exemplo:Exemplo:

biossíntese do heme

ALA ALA-U

ALA-D () PbPb

PROTOPORFIRINA

Sangue Urina

PbPb

PORFOBILINOGÊNIO

HEMEheme-sintetase PbPb

ALA-sintetase (�)

(�)(�)

�� AMOSTRA AMOSTRA (cont.)(cont.)

--PbPb

• Esclarecimento de intoxicação letal:

� matriz proveniente de material de necrópsia:

• tecidos• fluidos• órgãos• Conteúdo gástrico

• Intoxicações agudas:

� sangue (soro/plasma)� urina� lavado gástrico� vômito� restos de

alimentos/medicamentos


� Controle de exposição ambiental e ocupacional a xenobióticos:

–– sangue / urinasangue / urina� Controle terapêutico:

–– soro / plasmasoro / plasma� Controle de dopagem/dependência

–– urinaurina


Amostras Alternativas• Etanol............................... ar expirado• As e Pb............................. unha• As e Hg............................. cabelo• Organoclorados................ tecido adiposo• Cr...................................... tecido septo nasal• hipnóticos e organoclor. ... leite materno

Atenção:

• Horário e vasilhame• Tempo

• Temperatura de conservação• Tipo de anticoagulante

• Quantidade/volume


Exemplos de cuidados a serem observados:

1. Dosagem de etanol:

- coleta de sangue com heparina;

- reduzir o contato da amostra com o ar.

2. Dosagem de Metahemoglobina:

- a amostra deve ser processada no mesmo dia da coleta.


Finalidade:Finalidade:

– Orientação adequada do tratamento;– Rapidez no atendimento dirigido ao agente;– Prognóstico;– Avaliação da terapêutica.

MÉTODOS TOXICOLÓGICOSMÉTODOS TOXICOLÓGICOS

�alta sensibilidadeSensibilidade refere- se a capacidade do exame de detectar pacientes com a doença em questão (freqüência de resultados falso- negativos).

�exatidão: concordância entre o resultado do exame e o valor verdadeiro.

�precisão: concordância de uma série de medidas da mesma grandeza.

Exigências ao método de análise:

MÉTODOS TOXICOLÓGICOSMÉTODOS TOXICOLÓGICOS

IDENTIFICAÇÃO E IDENTIFICAÇÃO E QUANTIFICAÇÃOQUANTIFICAÇÃO

FASES DA ANÁLISE TOXICOLÓGICA

separação

extração

identificação, quantificação:Técnica de sensibilidade compatível com o teor do

analito na amostra.

MÉTODOS ANALÍTICOS

A. ENSAIOS QUÍMICOS

Testes simples p/ triagem no material pesquisado.

Amostras: pós, soluções, medicamentos, etc.

Ex.: Teste de Reisch, Ensaio de Gutzeit, teste para cocaína, ensaio para warfarin, salicilatos, etc.

TESTE DE REINSCH

- Identificação de algumas substâncias inorgânicasAg, Au, Pl, Hg, Bi, Sb e As

HClHCl

Calor 2 As2O3 + 3 H2 ---> 4 Asº + 3 H2O


TESTE DE REINSCH

- Identificação de algumas substâncias inorgânicasAg, Au, Pl, Hg, Bi, Sb e As


MÉTODOS ANALÍTICOS (cont.)

B. ANÁLISES COLORIMÉTRICAS

Método que visa determinar a concentração de uma substância pela medida da absorção relativa de luz, tomando como referência a absorção da substância numa concentração conhecida.

1. COLORIMETRIA VISUAL

Luz natural →→→→ comparação de cores


2 4 6 8 10 12

Ex.: Kit Lovibond®

2. ESPECTROFOTOMETRIA

A fonte de radiação emite até a região ultravioleta do espectro.

a. U.V. (< 400nm) ; b. Visa. U.V. (< 400nm) ; b. Visíível (400vel (400--760nm); c. I.V. (> 760nm760nm); c. I.V. (> 760nm))


2. ESPECTROFOTOMETRIA


2 4 6 8 10 12

Ex.: Colinesterase sérica / plasmática - Método de Ellman


d. ESPECTROFOTOMETRIA DE ABSORÇÃO ATÔMICA (E.A.A.)

Envolve a atomização da amostra, muitas vezes pela pulverização de uma solução da amostra numa chama, seguida pela investigação da absorção da radiação emitida por uma lâmpada elétrica que irradia o espectro do elemento a ser determinado.

Ag

Al

As

Au

Bi

Co

Hg

Pb

Sb

Se

Ti

Zn


e. FLUORIMETRIA

O imunoensaio de fluorescência polarizada (FPIA) é um imunoensaio caracterizado por sua simplicidade e rapidez.


3. CROMATOGRAFIA

Processo empregado para separar as substâncias de uma mistura.

3.1 - CCD

• Versatilidade, rapidez, sensibilidade, nitidez e baixo custo.


3.1. CCD (TLC / Cromatografia planar) – cont.

Os equipamentos de TLC (cromatografia planar) são uma moderna técnica, mundialmente reconhecida por sua flexibilidade e relação custo-benefício.


3.1 - CCD (cont.)

Devido ao seu princípio off-line o TLC oferece:

• Separação paralela de várias amostras com um tempo de requerimento mínimo

• Enorme flexibilidade

• Claridade na avaliação visual simultânea de todas as amostras e os seus componentes.

• Preparação simples da amostra devido ao uso de uma única fase estacionária.


3. CROMATOGRAFIA (cont.)

3.2 - CROMATOGRAFIA GASOSA

Método mais usado p/ separação e quantificação de agentes tóxicos orgânicos voláteis.

Ex.: fenol; etanol; metanol; organoclorados; etc.


Cromatógrafo a Gás



3.3 - HPLC

Em virtude da sua alta sensibilidade e alto poder de resolução, a HPLC é uma das mais importantes técnicas na análise de fármacos em fluidos biológicos.

Nível de detecção: 10-9 a 10-12 g.


HPLC

MÉTODOS ANALÍTICOS (cont.)HPLCHPLC

Cromatograma de uma mistura de pesticida.



3.4 - Imunocromatografia

Teste de triagem utilizado para drogasde abuso.


4. IMUNOTURBIDIMETRIA DE INIBIÇÃO

Método quantitativo que se baseia em uma técnica

turbidimétrica de imunoinibição que utiliza partículas de látex

(PETINIA).

Sistema analisador de química clínicaSistema analisador de química clínica

O detector converte a absorbância da luz em um impulso elétrico, que vai até a placa de medida do fotômetro (leitura digital).

↓↓↓↓O computador converte, então, a leitura digital em unidades de concentração (ou atividade)

PLFen + Acm -Fen � complexo PLFen-Acm -Fen + Fen- Acm -Fen (dispersa a luz a 340nm)

PLFen – reativo de partículas de látex-fenobarbital

Acm –Fen – anticorpo monoclonal específico contra o fenobarbital

complexo PLFen-Acm –Fen – complexo partículas de látex-anticorpo monoclonal

Fen- Acm –Fen – complexo fenobarbital-anticorpo monoclonal


4. IMUNOTURBIDIMETRIA DE INIBIÇÃO (cont.)

O Fen da amostra compete com as partículas de látex pelo Ac � ↓ vel. de agregação (Va).

↓↓↓↓ Va � ↑↑↑↑ cc Fen

INTERPRETAÇÃO DOS RESULTADOS

Para que se possa atribuir a causa de um envenenamento a uma substância e consequentemente, uma morte, se faz necessário haver uma correlação entre os achados químicos, clínicos e anatomopatológicos.

O resultado analítico deve ser interpretado levando em consideração toda a farmacologia da droga.

A identificação qualitativa de um produto ingerido não quantifica a severidade de uma intoxicação.

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