Atividades de apoio em Biologia Celular e Molecular Aluno: ______________________________________________ n ______ srie:_________ Componentes do grupo:_______________________________________________________ ______________________________________________________ ______________________________________________________ Atividade prtica - Extrao do DNA da cebola (Alliun cepa) OBJETIVOS Conhecer os princpios bsicos da extrao do material gentico da cebola, a partir dos tecidos do bulbo.

PR-REQUISITOS O aluno deve conhecer a composio da clula, com relao sua estrutura qumica e aos seus componentes. INTRODUO Para a anlise do DNA de clulas eucariticas, a primeira etapa importante o seu isolamento. O procedimento a seguir utilizado para extrair grandes quantidades de DNA a partir de cebola. Protocolos similares so usados nas extraes de DNA de outras fontes, como amostras de sangue, tecidos, etc. A extrao de DNA de clulas eucariontes consta fundamentalmente de trs etapas: !"ruptura (fsica e qumica) das membranas celulares para liberao do material gentico; !"desmembramento dos cromossomos em seus componentes bsicos: DNA e protenas; !"separao do DNA dos demais componentes celulares.

MATERIAIS !"lcool isoproplico (Isopropanol) !"Cebola picada !"Soluo de lise (quebra): 4 colheres de sopa de detergente incolor (SDS Dodecil Sulfato de Sdio), 1 colher de ch de cloreto de sdio, 75 mL de gua. !"Papel de filtro !"Gelo !"2 bqueres pequenos de plstico (50 mL) e 1 bquer de 500 ou 1000 mL !"Funil !"Tubos Falcon (tubos cnicos de 50 mL) ou tubos de ensaio com tampa !"Basto de vidro ou de madeira (para macerao) !"Estilete ou faca de cozinha !"Banho-maria (~60 C) !"Palitos de sorvete

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Atividades de apoio em Biologia Celular e Molecular PROCEDIMENTOS !"Pique a cebola em pedaos pequenos; !"Coloque no bquer pequeno de plstico (50 ml) 4 colheres de ch de pedaos de cebola; !"Adicione 2 colheres de sopa de soluo de lise; !"Macere intensamente com o auxlio do basto de madeira; !"Complete com a soluo de lise at 25 mL no bquer, misturando a soluo; !"Coe a soluo, com o auxlio do funil e do papel de filtro; coloque o filtrado em um tubo Falcon ou tubo de ensaio com tampa (dica: suspenda o papel de filtro para facilitar o escoamento da soluo); !"Depois de filtrar a soluo, tampe o tubo e o coloque no banho-maria por 15 minutos; !"Em seguida, coloque o tubo no bquer com gelo e gua, durante 5 minutos; !"Decorrido este tempo, adicione um volume igual de isopropanol (gelado) ao do tubo e misture vagarosamente (por inverso). O que ocorreu? 1. ______________________________________________________________________________ QUESTES 2. Por que a cebola deve ser picada? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________

3. Por que usado detergente e qual a importncia do aquecimento? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________

4. Qual a funo da adio do lcool isoproplico (isopropanol) ? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________

5. Por que voc no pode ver a dupla-hlice do DNA? ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________ ________________________________________________________________________________

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Atividades de apoio em Biologia Celular e Molecular 6. O esquema abaixo representa as etapas da extrao do DNA da cebola que voc realizou no laboratrio. Que etapas so essas? (sero distribudas seta com os nomes das etapas; coloque as setas entre as figuras, indicando essas etapas).

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Atividades de apoio em Biologia Celular e Molecular PLANO DE AULA: EXTRAO DO DNA DA CEBOLA I OBJETIVOS: Conhecer os princpios bsicos da extrao do material gentico da cebola, a partir dos tecidos do bulbo; Estudar a estrutura e composio celular; Identificar a localizao do material gentico na clula

II - SUGESTES DE PERGUNTAS QUE PODEM SER APLICADAS A CADA ETAPA DO PROCEDIMENTO E PROVVEIS REPOSTAS. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. Por que macerar a cebola? Como quebrar a parede celular? Como poderamos separar o DNA? Por que aquecer a soluo? Por que usar o detergente? Qual a funo do lcool? Faa a comparao do tamanho do DNA com o tamanho da clula. J no final, como feito em laboratrios especializados? Resp. de maneira mais refinada, mas o princpio o mesmo.

III - RESPOSTAS DAS QUESTES PROPOSTAS 1. Para que haja a ruptura da parede celular, expondo o material gentico das clulas da cebola. 2. As molculas do detergente desestruturam as molculas de lipdios presentes nas membranas celulares. O aquecimento favorece a reao e desnatura as molculas de DNA. 3. DNA insolvel em lcool e deste modo se separa da soluo. O DNA tem tambm menor densidade que os outros constituintes celulares, por isso surge na superfcie da soluo. O lcool desidrata as molculas de DNA, fazendo com que elas se aglutinem. 4. A estrutura de dupla-hlice s pode ser visualizada de modo indireto e atravs de aparelhos sofisticados. O que voc est observando so milhares de fitas de DNA juntas. 5. Macerao + soluo de lise; filtragem; aquecimentos e adio de lcool. 6. Pde-se observar um aglomerado de molculas de DNA. IV DURAO Pode ser aplicado durante 100 minutos de aula. V COMENCTRIOS Esta atividade contou com a participao de monitores com grupos de, no mximo, 7 alunos. Ela foi conduzida a partir de uma situao-problema: extrair o DNA da cebola, a fim de que fosse possvel manipul-lo. Desta forma, no foi entregue um roteiro explicativo, sendo o monitor (pofessor) a pessoal responsvel por oferecer algumas diretrizes para que fosse possvel alcanar os objetivos da atividade, utilizando sempre as concepes prvias dos alunos acerca da situao proposta.Programa de pesquisas aplicadas sobre a melhoria do ensino pblico no Estado de So Paulo - FAPESP Parceria USP-So Carlos e EESOR 4/4