Post on 10-Feb-2016
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Testagem da resistência de isolados bacterianos a antibióticos. Método da
difusão em agar com discos (técnica de Kirby-Bauer)
Tocar com uma ansa em quatro ou cinco colónias bem isoladas, de aparência
semelhante e transferir o crescimento assim obtido para um tubo contendo 5 ml de caldo
nutritivo. Incubar o tubo a 35 °C durante 24 h. Ajustar a turvação do meio, com caldo
nutritivo esterilizado, até igualar a dum padrão McFarland 0,5 (correspondente a 106
células/ml). Inundar as placas com Agar de Mueller-Hinton com a suspensão. Esperar cerca
de 30 min para que o agar absorva algum do líquido. Deitar fora o excesso para um goblé
com lixívia (trabalhar com luvas). Secar bem as placas (1 – 2h). Os discos são aplicados por
meio de pinça esterilizada ou aplicador. Aplicam-se 6 discos por placa, com intervalos
suficientes para que não haja sobreposição das respectivas zonas de inibição (devem estar
a, pelo menos, 15 mm da borda da placa e com um espaçamento de, pelo menos, 20 mm
entre eles). Para cada isolado, preparam-se duas placas, totalizando assim 12 discos por
placa. Deixa-se secar as placas durante mais 30 min. Incuba-se a 35 ºC, por 16 – 18 h.
Medem-se as zonas de inibição por meio duma craveira digital, arredondando as leituras
até ao milímetro, incluindo o diâmetro do disco. As medições devem ser feitas a olho nu,
por visualização da parte de trás da placa, com boa iluminação, contra um fundo negro
não reflector. Para a interpretação dos resultados, consultar as tabelas disponibilizadas na
aula.