Post on 07-Apr-2016
Coleta: volume, anticoagulante
Estocagem: temperatura, luz, frasco
Processamento preliminar
Pesagem ou diluição
Remoção de partículas
Extração da amostra de interesse
ANÁLISE
OBJETIVOS
-Livre interferentes
- Concentração da amostra
- Erros na quantificação- Necessidade de atingir limites cada vez menores
- Deterioração das colunas e outras partes (compatível com o sistema de análise)
- Perda de tempo com manutenção preventiva (limpeza de detector, corte da coluna, limpeza da fonte de íons)
Máxima recuperação do analito de interesse
Menor número de passos
Rápido
Alta precisão
Fácil automação
PROCEDIMENTO DE EXTRAÇÃO IDEAL
ESCOLHA DO TIPO DE EXTRAÇÃO
Características da matriz
Características do analito
Técnica de análise empregada
DESVANTAGENS- Gera grande quantidade de resíduo- Possui um pequeno espectro de aplicações- Compostos podem ser degradados com o ultrassom
VANTAGENS- Baixo custo- Rapidez (um ciclo de extração dura 3 minutos)- Excelente para análise de hidrocarbonetos de petróleo
PRECIPITAÇÃO DE PROTEÍNAS(amostras biológicas)
DESVANTAGENSBaixa recuperação
Não seletivoBaixa exatidão
Em alguns casos: diluição da amostra
DESPROTEINIZAÇÃO
- solventes orgânicos (solubilidade das proteínas)
- ácidos (formação de sais insolúveis)
EXTRAÇÃO LÍQUIDO-LÍQUIDO (LLE)
PARTIÇÃO DA AMOSTRA ENTRE DOIS LÍQUIDOS IMISCÍVEIS: FASE AQUOSA E FASE ORGÂNICA
ANALITO: COEFICIENTE DE PARTIÇÃO ENTRE AS DUAS FASES
solvente extrator pH da fase aquosa volume do solvente extrator
A eficiência da LLE depende:
DESVANTAGENS
• amostras com alta afinidade pela água são parcialmente extraídas pelo solvente orgânico
• impurezas do solvente são concentradas junto com a amostra (solvente ultrapuro)
• pode ocorrer a formação de emulsões
• volumes relativamente grandes de amostra e solventes são requeridos
• toxicidade dos solventes orgânicos
• difícil automação
VANTAGENS
• simples
• grande número de solventes (solubilidade e seletividade)
• proteínas presentes na amostra são desnaturadas
Vantagens- Baixo custo- Boa aplicabilidade a varredura de compostosDesvantagens- Gera grande quantidade de resíduos (disposição do resíduo)Sérios problemas com emulsão- Processo demorado para análise de várias amostras
Extração líquido-líquido (método descontínuo)
PARÂMETROS
Tipo do solventeanalito solúvel no solventebaixo ponto de ebuliçãobaixa viscosidadeseletivo
pHnão ionizada (partição na fase orgânica)
Quantidade de solvente
Tempo
Temperatura
Baixa recuperação/salting out
Emulsão (RECUPERAÇÃO)- adição sal- resfriar ou aquecer- adição de solvente orgânico- centrifugação
PROBLEMAS
EXTRAÇÃO EM FASE SÓLIDA (SOLID PHASE EXTRACTION-SPE)
Vantagens da SPE em relação à LLE
Maior eficiência Elimina maior número de interferentes Reduzido consumo de solvente orgânico Fácil coleta do analito Fácil automação
VANTAGENS- Material extrator semelhante ao cartucho- Área de contato maior- Camada extratora mais delgada - Partículas menores e mais homogêneas
DESVANTAGENS- Eficiência da extração depende do condicionamento (etapa limitante)- Obstrução por macromoléculas- Maior custo
MECANISMOMECANISMO
Modo reversoModo normal
Troca iônica
RETENÇÃO: analito e grupos funcionais da sílica
C8, C18 e CN: interações de van der Waals
Modo normal: pontes de hidrogênio, interações - e dipolo-dipolo
Troca iônica: interações eletrostáticas
Condicionamento – expor os sítios de interação Aplicação da amostra - lenta Lavagem – eliminar interferentes Secagem do cartucho Eluição – eluir composto de interesse
MICRO EXTRAÇÃO EM FASE SÓLIDA (SOLID PHASE MICRO EXTRACTION-SPME)
VANTAGENS
- Tempo reduzido
- Baixo consumo de solvente
FIBRAS – POLÍMEROS
-Polidimetilsiloxano (PDMS)- Poliacrilato (PA)- Carbowax (CW)
COMBINADAS
- Polidimetilsiloxano-divinilbenzeno (PDMS-DVB)
- Carboxen-polidimetilsiloxano- Carbowax-divinilbenzeno
Espessura: 7-100 mComprimento: 1 cm
OTIMIZAÇÃO DOS PARÂMETROS DA SPME
Tipo de fibra
Tempo de extração
Agitação da amostra
pH
Força iônica – salting-out
PRINCIPAL LIMITAÇÃO
Limite de quantificação alto
Variações entre os diferentes lotes e marcas de polímeros extratores
CONCENTRAÇÃO DO EXTRATO ORGÂNICO
Objetivo: Concentrar o extrato orgânico de modo a detectar os analitos na menor quantidade possível no extrato, quando for desejável
QUAL O TIPO DE EXTRAÇÃO DEVO UTILIZAR?
Analito Matriz Composto específico ou varredura Custo Tempo Número de amostras