Microfibrilas e Trombose

Cláudio C. Werneck

Departamento de Bioquímica-IB

UNICAMP

Fibras Elásticas em Tecidos em Desenvolvimento

Davis E.C. Davis E.C.

Proteínas Componentes das Microfibrilas Associadas à Elastina

•Fibrilina 1Fibrilina 1•Fibrilina 2Fibrilina 2•LTBP 2LTBP 2

•MP70/78 (big-H3)MP70/78 (big-H3)

•MAGP-1MAGP-1•MAGP-2MAGP-2

Gibson et al. Gibson et al. J. Biol. Chem. 1989, 264J. Biol. Chem. 1989, 264:4590:4590

Artéria carótida

A região carboxi-terminal da MAGP-2 interage com diferentes proteínas

Clone Identity of isolated clones8 Fibrillin-11 Fibrillin-23 Fibrillin-25 Fibrillin-230 Fibrillin-29 Fibulin-17 Jagged-115 MEGF-66 Von Willebrand factor21 Glycogenin10 HMG144 Unknown29 Unknown Penner et al. J. Biol. Chem. 2002,

277:35044.

Função do Fator de von Willebrand na Agregação Plaquetária

Aplicação do laser 540 nm

3

Posicionamento da ultra-sonda

2

Modelo de Lesão da Artéria Carótida

Isolamento do vaso

1

Injeção do corante

4

Medida do tempo de oclusão

5

Modelo de Trombose da Artéria Carótida

Time (min)20 40 6010 30 500

0.5

1.0

0.0

Rose Bengal IV Occlusion Time

Blood flow(ml/min)

-10

Laser on

Camundongos Deficientes em MAGP1 Apresentam Tempo de Oclusão Prolongado

A Injeção de MAGP1 Recombinante Resgata o Tempo de Oclusão Normal

Werneck et al., BLOOD, 2008, 111: 4137.

Pull down com Proteínas Plasmáticas

FN Fbg vWF

Werneck et al., BLOOD, 2008, 111: 4137.

Werneck et al., BLOOD, 2008, 111: 4137.

Possíveis Funções da MAGP-1 na Agregação de Plaquetas

MAGP-1 MAGP-1

MRAASLFLLF LPAFLLAQGQ YDLDPLPPYP DHVQYTHYSE QIENPDYYDY PEMTPRPPEE QFQFQSQQQV QQEVIPAPTL EPGTVETEPT EPGPLDCREE

QYPCTRLYSI HKPCKQCLNE VCFYSLRRVY VVNKEICVRT

VCAQEELLRA DLCRDKFSKC GVLASSGLCQ SVAAACARSC GGC

MAGP-1

A região carboxi-terminal da MAGP1 apresenta

atividade pró-trombótica

DCREE QYPCTRLYSI HKPCKQCLNE VCFYSLRRVY VVNKEICVRT

VCAQEELLRA DLCRDKFSKC GVLASSGLCQ SVAAACARSC GGC

MAGP-1

TSP-1 Peptide

• Thrombospondin-1: KRFYVVMWKK

• MAGP-1: RRVYVVNK

Model for TSP1 in platelet-platelet interactions

Bonnefoy et al., Cell. Mol. Life Sci. 2008

Bone phenotypes in MAGP1 -/- mice

WEINBAUM et al., J. B. C., 2008.

WEINBAUM et al., J. B. C., 2008.

Bone phenotypes in MAGP1 -/- mice

Active Forms of BMP-7 and TGF-β1 Bind to MAGP1

WEINBAUM et al., J. B. C., 2008.

Estrutura dos Domínios nas Famílias das Fibrilinas e LTBPs.

RGD

Pro

RGD RGD

Gly

RGD

EGFEGF--Ca2+ Binding

8-Cys (CCC)

Hybrid (CC)

Unique

Glycosylation (potential)

Unknown

RGD

Fibrilina-1

Fibrilina-2

LTBP-1

LTBP-2

LTBP-3

LTBP-4

RGD

RGD RGD

G/PFibrilina-3

Síndrome de Marfan

Nature Genetics 33:406 (2003)

Fbn1mgΔ (inframe hypomorphic deletion)

Losartan, an AT1 Antagonist, Prevents Aortic Aneurysm in a Mouse Model of Marfan Syndrome

Jennifer P. Habashi,1* Daniel P. Judge,2* Tammy M. Holm,1 Ronald D. Cohn,1 Bart L. Loeys,1Timothy K. Cooper,1,3 Loretha Myers,1 Erin C. Klein,1 Guosheng Liu,3 Carla Calvi,2Megan Podowski,2 Enid R. Neptune,2 Marc K. Halushka,4 Djahida Bedja,3Kathleen Gabrielson,3 Daniel B. Rifkin,5 Luca Carta,6 Francesco Ramirez,6David L. Huso,3 Harry C. Dietz1,2†

Science 312, 117 (2006)

Tempo de oclusão x Losartan

Tratamento com Atenolol e Captopril

AgradecimentosUNICAMPCristina P. Vicente Paulo P. Joazeiro Denise Machado Tallita VassequiAna Claudia C. N. Diez João Batista Fabrin NetoCatherine Pereira Silvio ConsonniTalita Dellariva Guilherme BragaFabiana Uno de Souza Danielle SousaWashington University in Saint Louis-MOBob Mecham Tom BroekelmannDoug Tollefsen

São Paulo J. E. Krieger Lygia V. PereiraLeonardo dos Santos