Centro Tecnológico de Atualização e Formação Profissional Ltda.

Hematologia Clínica

Prof. Jairo Alves de Oliveira, M.Sc.

2007

Programa de Hematologia Clínica

� Hematopoiese – Cinética medular � Metabolismo da Hemoglobina� Mecanismo de atuação dos neutrófilos� Leucometria global e específica� Composição do Hemograma

� Valores de referência � Leucograma de Schillihg� Fórmula Leucocitária relativa e absoluta � Principais alterações patológicas nas séries:

� Vermelha: Anisocitose, poiquilocitose, anemia ferropriva, megaloblástica, etc.

� Branca: Anomalias leucocitárias (Pelger-Huet, Chediak-Higashi,etc.)

� Desvio à esquerda e à direita � Hemograma infeccioso bacteriano, viral e parasitário. � Reação leucemóide� Atipias linfocitárias

� Leucemias Agudas: � Mieloblásticas – Aspectos Clínicos e Morfológicos � Classificação Fab – M1 a M7 � Leucemias Linfoblásticas - Aspectos Clínicos e Morfológicos

� Leucemias Crônicas: Aspectos Clínicos e Morfológicos � LLC � LMC � MMA

� SMD – Síndrome Mielodisplásica� Diferenciação morfológica, citoquímica, imunofenotípica

HematopoieseEmbrionária – Fetal – Pós natal

Hematopoiese

� Cinética medular – Compartimentos� Fatores de crescimento, diferenciação e

maturação celular � linf. T, macrófagos, cél. estroma� Interleucinas IL-1 IL-3 IL-5 IL-6� GM-CSF G-CSF M-CSF� Eritropoietina - rim� Trombopoietina - fígado

Hematopoiese – ações dos fatores de crescimento

Hematopoiese

Hematopoiese

Hematopoiese - eritropoietina

Metabolismo da hemoglobina

Síntese da hemoglobina

Glicólise (Via Embden-Meyerhof)

2,3 DPG (Difosfoglicerato)

Mecanismo de atuação dos neutrófilos

Hematologia Clínica

� Técnica para confecção de distensão sanguínea� Microscopia� Corantes

� Ácidos� Básicos

� Métodos de coloração� Contagem específica� Contagem global dos elementos morfológicos do sangue –

Câmara de Neubauer� Leucócitos� Hemácias� Plaquetas

Distensão sangüínea - Técnica

Distensão sangüínea – Padrão

Distensão sangüínea – Padrão

Distensão sangüínea – Vídeo

Laminas.avi

Microscopia

Distensão sanguínea – Erro grave

Distensão sanguínea - EDTA

Distensão sanguínea – sem anticoagulante (capilar)

Distensão sanguínea – sem anticoagulante (venoso)

Distensão sanguínea – normal

Distensão sanguínea – normal

Distensão sanguínea – normal

Distensão sanguínea – normal

Distensão sanguínea – normal

Distensão sanguínea – normal

Distensão sanguínea – normal

Distensão sanguínea – normal

VHS – Velocidade de hemossedimentação

� Métodos� Wintrobe – 0-100 mm (1ª hora) Citrato de Sódio� Westergren – 0-200 mm (1ª hora)

� 3 estágios – 10 - 40 - 10 (minutos)� Dentro das primeiras duas horas

� Automação – Diesse Vés-matic (20 minutos)

� Princípios da hemossedimentação� Potencial Zeta

� Patologias relacionadas� Hiperfibrinogenemia, gamaglobulinemia, colesterol alto� Febre, anemia� Mieloma múltiplo

“roleaux”

Potencial Zeta 4230> 85 anos

3020> 50 anos

2015< 50 anos

Mulher(mm)Homem(mm)V. Referência

Corantes

� CORANTES DO TIPO ROMANOVSKY� Azul de Metileno, Azur B e Eosina� Ácidos e Básicos� May-Grunwald-Giemsa, Leishman, Jenner, MacNeal.� Wright� Giemsa pH = 7,2

� FIXADORES� PANÓPTICO� MÉTODOS DE COLORAÇÃO

� Automação� Manual� Gota espessa� “A fresco”

Corantes - Padrão

Corantes

Contagem específica

Contagem global –câmara de Neubauer

Contagem global - Câmara de Neubauer

Contagem global - câmara de Neubauer

� LeucócitosL= nlc x 10 x 20

4

� HemáciasH= nhc x 10 x 5 x 200

� PlaquetasP= npc x 10 x 5 x 50

X 50

X 10000

X 2500

Contagem global - câmara de Neubauer

� Comprimento (c) e largura (l) total = 3 mm� Altura (h) = 0,1 *área = c x l

*volume = c x l x h� Área total – 1 quadrado com 9 mm2

� Volume total – 0,9 mm3

� 9 quadrados com 1 mm2 de área� 64 quadrados com 0,0625 de área� 25 quadrados com 0,04 de área� 400 quadrados com 0,0025 de área

Hemograma – Série branca e Série Vermelha

� Leucometria global� Leucometria específica� Hematócrito – Macro e micro-hematócrito� Hemoglobina – Reativo de Drabkin� Índices hematimétricos V. referência

� VCM = hto x 10 80-96 fLhm

� HCM = hb x 10 27-32 pghm

� CHCM = hb x 100 32-36 % ou g dLhto

� Contagem de plaquetas� RDW� PDW

Observar Verificar Alterações

Hemácias

NúmeroRoleauxConteúdo de hemoglobinaForma (Poiquilocitose)Tamanho (Anisocitose)ImaturidadeInclusões

Policitemia, anemiaAusente ou presente“Hipercromia”, hipocromiaDrepanócitos,esferócitos,ovalócitoseliptócitos,esquizócitos,dacrió

citos, acantócitos, “em alvo”Micrócitos,macrócitos, megalócitos

Presença de núcleo (eritroblastos), reticulócitos,Policromatofilia, Howell-Jolly, Heinz

Leucócitos

Número aumentadoNúmero diminuídoFormas normaisFormas imaturasFormas atípicasAlterações morfológicasNúcleoCitoplasmaGrânulosInclusões

LeucocitoseLeucopenia

Blastos (Leucemias)Macronucléolo

Denteamento nuclear, granulações grosseiras, HipersegmentaçãoGranulações tóxicas, vacúolosBastonetes de AuerAnomalia de Alder---------Reilly, DohleChediak-Higashi

PlaquetasNúmero aumentadoNúmero diminuídoAlterações morfológicas

Trombocitose (hiperplaquetemia)Trombocitopenia (hipoplaquetemia)

Tamanho, forma

Outras células

AusentesPresentes Células plasmáticas

Blastos

Hematozoários

HemáciasMononucleares

Extracelulares

Plasmódio, Babesia

Leishmania

Tripanossoma, Filária, Trichinella, Leptospira, Treponema, Leishmania

Hemograma – Fórmula leucocitária

LeucometriaGlobal (mm3)

4.500a

10.000

Bas Eos Mie Met Bas Seg Lin Mon

% 0-1 1-4 0 0-1 1-5 50-70 20-35 2-8

mm3 0-100 45-400

0 0-100 45-500

2250-7000

900-3500

90-800

Valores relativos e absolutos

Hemograma – Fórmula leucocitária

LeucometriaGlobal (mm3)

2.000

Bas Eos Mie Met Bas Seg Lin Mon

% 0 1 0 0 2 15 80 2

mm3 0 20 0 0 40 300 1600 40

DIAGNÓSTICO:NEUTROPENIA SEVERA

Hemograma – Reticulócitos

Valor absoluto(mm3)

66.000

Valores relativos e absolutos

Valores de referência:Relativo - 0,5 a 1,5 % Absoluto – 25.000 a 75.000 / mm 3 (hematimetria - 5.000.000 mm 3)

Paciente – 3,0 %Hematócrito – 20 %Hematimetria – 2.200.000 / mm 3

Hemograma – Desvio à esquerda (infecção aguda)

Bas Eos Mie Met Bas Seg Lin Mon

% 0 0 2 5 25 58 8 2

mm3 0 0 440 1100 5500 12760 1760 440

LeucometriaGlobal (mm3)

22.000

Obs.: Granulações grosseiras

Vacúolos citoplasmáticosInclusões de Dohle

Hemograma – Desvio à direita

� Aumento do número de segmentosAnemia megaloblástica

� Vitamina B12 e ácido fólico

� Maior porcentagem com 4 ou 5 segmentos Infecção crônica

Fórmula de SchillingMie Met Bast Seg Seg Seg Seg

Segmentos(lóbulos)

0 0 0 2 3 4 5

% - - - 10 60 20 10

Hemograma – Princípio Coulter-Counter

Hemograma – Histograma STKS

Hemograma -Histograma Cell-Dynn

Hematologia Clínica - Anemias

� Deficiência na síntese de hemácias – Fe ou B12 e Folato� Absorção Fe - Duodeno (DMT1) e B12-Folato (FI, cobilina

e TC I, II E III)� Perda

� Aguda� Crônica

� Destruição exagerada – Mecanismo normal� SRE� Hemólise

� Mecânica � Válvulas� Fragilidade

� Auto-imune – DHRN e Teste de Coombs� Hemoglobinopatias

� Talassemias – A. Falciforme – C � Diagnóstico e interpretação clínica

Absorção de Ferro

Absorção de B12 e Folato

Hematologia Clínica – Eletroforese Hb

Hematologia Clínica - Eletroforese Hb

Hematologia Clínica - Eletroforese Hb

Leucemias

� Reação Leucemóide� Linfocítica� Granulocítica� Eosinofílica

� Leucemias� Aspectos Clínicos e Morfológicos� Citoquímica – PAS, SB, Peroxidase� Imunofenotipagem� Classificação FAB

� Leucemias agudas - M0,M1,M2,M3,M4,M5(a e b),M6 e M7� Leucemias Crônicas

� LMC – ausência do hiato leucêmico� LLC� MMA� SMD

Leucemias

Leucemias – M1

Leucemias – M1

Leucemias – M2

Leucemias – M2

Leucemias – M3

Leucemias – M3

Leucemias – M3 microgranular

Leucemias – M4

Leucemias – M5

Leucemias – M6

Leucemias – M6

Leucemias – M7

Leucemias – M7

Leucemias - Eosinofílica

Leucemias - Prólinfocítica

Leucemias - Prolinfocítica

Leucemias - LLC

Leucemias - LMC

LMC

LMC

Plasmócitos

Leucemias – Hair Leukemia

Leucemias – Hair Leukemia

Neutrófilo Plurisegmentado

Leucemias – CitoquímicaLEUCEMIAS PAS Mielop. SB ASD Alfa naftil

M0 (<3%) - + + + -

M1 (>3%) - + + + -

M2 (>85%) - + + + -

M3 (>85%) - ++ ++ ++ -

M4 +/- +/- +/- +/- +++

M5 +/- +/- + +/- +++

M6 + - - - ++

M7 + - - - +

LLA - - - - -

Leucemias – LLA

CITOLOGIA L1 L2 L3

Tamanho Pequeno Grande Grande/homog.

Cromatina Homogênea Variável Finamentepontilhado

Forma Regular Irregular Oval a redonda

Nucléolos Raros Presentes 1-3

Citoplasma Escasso Moderado Moderado

Basofilia Moderada Variável Intensa

Teste de Fragilidade Osmótica

� Osmolaridade� Soluções Hipotônicas – 0,85 a 0,10% NaCl

� HI – Hemólise inicial – 0,55% NaCl� HF – Hemólise Final – 0,45% NaCl Hb

H2O

- +

Pesquisa de Células LE

� Etapas� Obtenção do coágulo - B.M. 37 0C (30 minutos)� Maceração do coágulo� Filtração em gaze� Centrifugar – 2.000 rpm 5 minutos� Retirar o sobrenadante e transferir o restante para tubo

de Wintrobe� Centrifugar - 2.000 rpm 5 minutos� Camada cremosa de leucócitos� Confecção de lâminas - Wright

Pesquisa de Células LE

Prova do Nitroblue-tetrazolium (NBT)

� Neutrófilos� Diagnóstico de infecções bacterianas� Redução do NBT (incolor) a Formazan (pp de

coloração azul escura)� Aumento da atividade enzimática

� V.R. – 3 A 10%� Doença granulomatosa crônica da infância