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ESTUDIO FITOQUÍMICO DE ESTUDIO FITOQUÍMICO DE
Piper pesaresanum Piper pesaresanum Y Y Piper Piper crassinerviumcrassinervium (Piperaceae)(Piperaceae)
ANGÉLICA GIRALDO ARICAPAANGÉLICA GIRALDO ARICAPA
DIRECTOR DEL PROYECTODIRECTOR DEL PROYECTO
JAIME NIÑO OSORIOJAIME NIÑO OSORIO
CONTENIDO DE CONTENIDO DE
EXPOSICIÓNEXPOSICIÓN •• DESCRIPCIÓN DE LA FAMILIA DESCRIPCIÓN DE LA FAMILIA
PiperaceaePiperaceae
•• JUSTIFICACIÓN DEL PROYECTOJUSTIFICACIÓN DEL PROYECTO
•• OBJETIVOSOBJETIVOS
•• SECCIÓN EXPERIMENTALSECCIÓN EXPERIMENTAL
•• RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN
•• RESUMENRESUMEN
DESCRIPCIÓN DE LA DESCRIPCIÓN DE LA
FAMILIA PiperaceaeFAMILIA Piperaceae
DESCRIPCIÓN DE LA DESCRIPCIÓN DE LA
FAMILIA PiperaceaeFAMILIA Piperaceae
CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN
TAXONÓMICATAXONÓMICA
GÉNEROSGÉNEROS GÉNEROSGÉNEROS
CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA CLASIFICACIÓN TAXONÓMICA
DE LA FAMILIA PiperaceaeDE LA FAMILIA Piperaceae
Reino: PLANTAE Reino: PLANTAE
División: ANGIOESPERMAEDivisión: ANGIOESPERMAE
Clase: MAGNIOLOPSIDAClase: MAGNIOLOPSIDA
Orden: PIPERALESOrden: PIPERALES
Familia: PIPERACEAEFamilia: PIPERACEAE
Género: Género: PiperPiper
Especies: Especies: Piper pesaresanumPiper pesaresanum
Piper crassinerviumPiper crassinervium
DESCRIPCIÓN DE LA DESCRIPCIÓN DE LA
FAMILIA PiperaceaeFAMILIA Piperaceae
CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN CLASIFICACIÓN
TAXONÓMICATAXONÓMICA
GÉNEROSGÉNEROS GÉNEROSGÉNEROS
GÉNEROS DE LA GÉNEROS DE LA
FAMILIA FAMILIA
Piperaceae Piperaceae
PiperPiper PiperPiper
PiperomiaPiperomia PiperomiaPiperomia PothomarphePothomarphe PothomarphePothomarphe
OttoniaOttonia OttoniaOttonia
SarcorhachisSarcorhachis SarcorhachisSarcorhachis TrianaeopiperTrianaeopiper TrianaeopiperTrianaeopiper
GÉNERO GÉNERO PiperPiper
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN
DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN
GEOGRÁFICAGEOGRÁFICA
ESPECIES ESPECIES ESPECIES ESPECIES
ESTUDIADASESTUDIADAS
DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL DISTRIBUCIÓN GEOGRÁFICA DEL GÉNERO GÉNERO Piper Piper EN AMÉRICAEN AMÉRICA
GÉNERO GÉNERO PiperPiper
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN
DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN
GEOGRÁFICAGEOGRÁFICA
ESPECIES ESPECIES ESPECIES ESPECIES
ESTUDIADASESTUDIADAS
PRINCIPALES NÚCLEOS PRINCIPALES NÚCLEOS
FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL
GÉNERO GÉNERO PiperPiper
PRINCIPALES NÚCLEOS PRINCIPALES NÚCLEOS
FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL FITOQUÍMICOS DE LAS ESPECIES DEL
GÉNERO GÉNERO PiperPiper ALCALOIDES Y ALCALOIDES Y
AMIDASAMIDAS LIGNANOSLIGNANOS LIGNANOSLIGNANOS PROPENILFENOLESPROPENILFENOLES PROPENILFENOLESPROPENILFENOLES
TERPENOSTERPENOS TERPENOSTERPENOS ESTEROIDESESTEROIDES ESTEROIDESESTEROIDES FLAVONOIDESFLAVONOIDES FLAVONOIDESFLAVONOIDES
Aristolactama A II- Piper longum
β-Pinone-Piper nigrum
Aschatin-Piper cubeba Heterotropan-Piper cubeba
Estigmasterol - Piper aduncum 5,7-dimetiloxiflavona-P.
hostmanianum
GÉNERO GÉNERO PiperPiper
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN
DISTRIBUCIÓN DISTRIBUCIÓN
GEOGRÁFICAGEOGRÁFICA
ESPECIES ESPECIES ESPECIES ESPECIES
ESTUDIADASESTUDIADAS
ESPECIES ESTUDIADASESPECIES ESTUDIADAS
Piper pesaresanumPiper pesaresanum Piper pesaresanumPiper pesaresanum Piper crassinerviumPiper crassinervium Piper crassinerviumPiper crassinervium
JUSTIFICACIÓN DEL JUSTIFICACIÓN DEL
PROYECTOPROYECTO
JUSTIFICACIÓN DEL JUSTIFICACIÓN DEL
PROYECTOPROYECTO
Piper Piper pesaresanum pesaresanum
y y Piper Piper crassinerviumcrassinervium
ACTIVIDAD ACTIVIDAD ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
ACTIVIDADACTIVIDAD ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN DE NÚCLEOS DE NÚCLEOS
FITOQUÍMICOSFITOQUÍMICOS
JUSTIFICACIÓN DEL JUSTIFICACIÓN DEL PROYECTOPROYECTO
Especie Actividad biológica Referencia
Piper hispidum Antifúngico contra
Cladosporium sphaerospernum Navickiene et al., 2000
Piper tuberculatum Antifúngico contra
Cladosporium sphaerospernum Navickiene et al., 2000
Piper sarmentosum Analgésico, antiinflamatorio,
anticarcinogénico
Zakaria et al., 2010;
Zainal et al., 2009
Piper capense Antiparasitario Kaou et al., 2010
Piper dilatatum Antifúngico contra
Cladosporium sphaerospernum Terreaux et al., 1998
Piper chaba Hepatoprotectiva Matsuda et al., 2009
Rama et al., 2011
Piper kadsura Antineuroinflamatoria Hyun et al., 2010
Piper longum Insecticida - acaricida Park et al., 2002
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANA CONTRA:ANTIBACTERIANA CONTRA:
Escherichia coliEscherichia coli Escherichia coliEscherichia coli Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus
RESISTENCIA DE RESISTENCIA DE Escherichia coli Escherichia coli A A
ALGUNOS ANTIBIÓTICOSALGUNOS ANTIBIÓTICOS
0
10
20
30
40
50
60
% d
e R
es
iste
nc
ia
Antibióticos
Fuente : Organización Panamerica de la Salud (http://www.paho.org/Spanish/HCP/HCT/antimicrob_index.htm)
PORCENTAJE DE RESISTENCIA A LOS PORCENTAJE DE RESISTENCIA A LOS
ANTIBIÓTICOS DE ANTIBIÓTICOS DE Staphylococcus aureusStaphylococcus aureus
0
10
20
30
40
50
60
70
80
% d
e R
es
iste
nc
ia
Año
Fuente : National Nosocomial Infections Surveillance (NNIS) System (Campaña de Prevención de la Resistencia a los Antimicrobianos) (2009)
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA
CONTRA CONTRA Mycosphaerella fijiensis Mycosphaerella fijiensis MoreletMorelet
EFECTOS EFECTOS
CONTROLES CONTROLES
ANTIFÚNGICOS SINTÉTICOS ANTIFÚNGICOS SINTÉTICOS
CONTRA SIGATOKA NEGRACONTRA SIGATOKA NEGRA
ANTIFÚNGICOS SINTÉTICOS
SISTÉMICOS
TRIAZOLES
BENZIMIDAZOLES
PENETRANTES MORFOLINAS
DE CONTACTO
CARBAMATOS
CLORADOS
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA
CONTRA CONTRA Mycosphaerella fijiensis Mycosphaerella fijiensis MoreletMorelet
EFECTOS EFECTOS
CONTROLES CONTROLES
EFECTOS DE LA SIGATOKA EFECTOS DE LA SIGATOKA
NEGRANEGRA
• Disminución de la
capacidad fotosintética.
• Disminución de peso del
fruto de 50-100%.
• Uso de fungicidas de
alto costo (En Colombia
30 millones de dólares al
año).
• Contaminación del
medio ambiente y se ve
afectada la salud del
agricultor.
AGENTE ANTIFÚNGICO DE ORIGEN AGENTE ANTIFÚNGICO DE ORIGEN
NATURALNATURAL
• Evite la germinación de ascosporas de M. fijiensis
• Disminuya el costo de su tratamiento por año.
• Reducir el impacto ambiental y el riesgo de enfermedades por la exposición a los fungicidas
OBJETIVOSOBJETIVOS
OBJETIVO GENERALOBJETIVO GENERAL RealizarRealizar elel estudioestudio fitoquímicofitoquímico dede loslos
extractosextractos dede laslas especiesespecies PiperPiper crassinerviumcrassinervium yy PiperPiper pesaresanumpesaresanum
(Piperaceae)(Piperaceae) yy lala determinacióndeterminación dede lala
actividadactividad antibacterianaantibacteriana contracontra
EscherichiaEscherichia colicoli yy StaphylococcusStaphylococcus aureusaureus
yy antifúngicaantifúngica contracontra MycosphaerellaMycosphaerella fijiensisfijiensis MoreletMorelet
OBJETIVOS ESPECÍFICOSOBJETIVOS ESPECÍFICOS •• EvaluarEvaluar lala actividadactividad antifúngicaantifúngica yy antibacterianaantibacteriana inin vitrovitro
dede loslos extractosextractos dede hexano,hexano, diclorometano,diclorometano, metanolmetanol yy
metanolmetanol––aguaagua ((99::11),), dede lala parteparte aéreaaérea dede PP..
pesaresanumpesaresanum yy PP.. crassinerviumcrassinervium..
•• CaracterizarCaracterizar aa travéstravés dede lala marchamarcha fitoquímicafitoquímica loslos
metabolitosmetabolitos secundariossecundarios enen loslos extractosextractos dede hexano,hexano,
diclorometano,diclorometano, metanolmetanol yy metanolmetanol--aguaagua ((99::11),), dede laslas
especiesespecies PP.. pesaresanumpesaresanum yy PP.. crassinerviumcrassinervium..
•• SepararSeparar elel extractoextracto concon actividadactividad antifúngicaantifúngica contracontra
MycosphaerellaMycosphaerella fijiensisfijiensis MoreletMorelet y/oy/o antibacterianaantibacteriana
contracontra EscherichiaEscherichia colicoli yy StaphylococcusStaphylococcus aureusaureus,, porpor
cromatografíacromatografía dede columnacolumna..
•• EvaluarEvaluar lala actividadactividad fungicidafungicida contracontra MM.. fijiensisfijiensis MoreletMorelet
y/oy/o bactericidabactericida contracontra EE.. colicoli yy SS.. aureusaureus dede laslas
fraccionesfracciones dede mayormayor pesopeso obtenidasobtenidas dede loslos extractosextractos dede
hexano,hexano, diclorometano,diclorometano, metanolmetanol yy metanolmetanol--aguaagua ((99::11))
activosactivos..
•• EstablecerEstablecer loslos perfilesperfiles cromatográficoscromatográficos porpor HPLCHPLC dede loslos
extractosextractos dede PP.. pesaresanumpesaresanum yy PP.. crassinerviumcrassinervium concon
actividadactividad antifúngicaantifúngica y/oy/o antibacterianaantibacteriana..
OBJETIVOS ESPECÍFICOSOBJETIVOS ESPECÍFICOS
SECCIÓN SECCIÓN
EXPERIMENTALEXPERIMENTAL
MATERIAL MATERIAL VEGETALVEGETAL DE DE Piper Piper pesaresanum pesaresanum Y Y Piper crassinerviumPiper crassinervium
Fue recolectado en el Parque Regional Fue recolectado en el Parque Regional
Natural UcumaríNatural Ucumarí
Santa Rosa Pereira
Piper Piper pesaresanum pesaresanum
(FJR 3996)(FJR 3996) Coordenadas:Coordenadas:
N 04N 04°° 42’ 24,1’’ y 42’ 24,1’’ y
W 075W 075°° 32’ 53,0’’32’ 53,0’’
con una altura de 2020 con una altura de 2020
msnm msnm
Piper Piper crassinervium crassinervium
(FJR 4021)(FJR 4021) Coordenadas:Coordenadas:
N 04N 04°° 42’ 25,7’’ y42’ 25,7’’ y
W 075W 075°° 32’ 53,0’’32’ 53,0’’
con una altura de 2063 con una altura de 2063
msnm msnm
MATERIAL MATERIAL VEGETALVEGETAL DE DE Piper Piper pesaresanum pesaresanum Y Y Piper crassinerviumPiper crassinervium
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
OBTENCIÓN DE EXTRACTOS OBTENCIÓN DE EXTRACTOS
MATERIAL VEGETALMATERIAL VEGETAL MATERIAL VEGETALMATERIAL VEGETAL SECADOSECADO SECADOSECADO MATERIAL MOLIDOMATERIAL MOLIDO MATERIAL MOLIDOMATERIAL MOLIDO
MASERACIÓN MASERACIÓN
PASIVAPASIVA
CONCENTRARCONCENTRAR SOXHLETSOXHLET
OBTENCIÓN DE EXTRACTOS OBTENCIÓN DE EXTRACTOS
Piper Piper pesaresanumpesaresanum
••557 g557 g
Piper Piper crassinerviumcrassinervium
••584584 gg
MATERIAL VEGETAL SECO MATERIAL VEGETAL SECO
Y MOLIDOY MOLIDO
OBTENCIÓN DE EXTRACTOSOBTENCIÓN DE EXTRACTOS
((ExtExt con 2L HEX ) x 3con 2L HEX ) x 3 ((ExtExt con 2L HEX ) x 3con 2L HEX ) x 3
((ExtExt con 2L DCM) x 3con 2L DCM) x 3 ((ExtExt con 2L DCM) x 3con 2L DCM) x 3
((ExtExt con con ) x 3) x 3 ((ExtExt con con 2LMeOH2LMeOH) x 3) x 3
((ExtExt en Soxhlet) x 48 Horasen Soxhlet) x 48 Horas ((ExtExt en Soxhlet) x 48 Horasen Soxhlet) x 48 Horas
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANA POR DIFUSIÓN EN ANTIBACTERIANA POR DIFUSIÓN EN POZOSPOZOS
SOLUCIÓNSOLUCIÓN ADICIONAR M. O.ADICIONAR M. O. ADICIONAR EL AGARADICIONAR EL AGAR ADICIONAR EL AGARADICIONAR EL AGAR
REALIZAR 7 POZOSREALIZAR 7 POZOS REALIZAR 7 POZOSREALIZAR 7 POZOS ADICIONAR EXTRACTOS ADICIONAR EXTRACTOS ADICIONAR EXTRACTOS ADICIONAR EXTRACTOS
Y CONTROLESY CONTROLES LECTURALECTURA
4000 2000
1000 500 250
Cp Cn
CRITERIO DE EVALUACIÓN: CÁLCULO CRITERIO DE EVALUACIÓN: CÁLCULO
DE LA CONCENTRACIÓN MEDIA DE LA CONCENTRACIÓN MEDIA
INHIBITORIA (ICINHIBITORIA (IC5050))
Cálculo del porcentaje de inhibición:
y = 38.563x - 52.967 R² = 0.9923
48
53
58
63
68
73
78
83
88
2,6 2,8 3 3,2 3,4 3,6
% d
e in
hib
ició
n
Logaritmo en base 10 de las concentraciones evaluadas
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICA CONTRA
Mycosphaerella fijiensis
FASES DE REPRODUCCIÓN DE FASES DE REPRODUCCIÓN DE
Mycosphaerella fijiensisMycosphaerella fijiensis Morelet Morelet
EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICA CONTRA ANTIFÚNGICA CONTRA M. M. fijiensis fijiensis MoreletMorelet
Fase sexualFase sexual
••Elongación Elongación del tubo del tubo
germinativogerminativo
Fase asexualFase asexual
••Crecimiento Crecimiento ••Crecimiento Crecimiento radialradial
ESTADÍO 1 ESTADÍO 2 ESTADÍO 3 ESTADÍO 4 ESTADÍO 5 ESTADÍO 6
PREPARACIÓN DE LA CÁMARA PREPARACIÓN DE LA CÁMARA
HÚMEDA PARA ACTIVACIÓN DE HÚMEDA PARA ACTIVACIÓN DE
ASCOSPORASASCOSPORAS
MATERIAL INFECTADO HUMEDECER CÁMARA HÚMEDA
ELONGACIÓN DEL TUBO ELONGACIÓN DEL TUBO
GERMINATIVOGERMINATIVO
Sumergir los discos con Sigatoka
en agua destilada por 5 minutos
Retirar el exceso de agua sin
tocar las hojas de plátano
infectadas.
Envenenamiento de agar
Permitir la descarga de las ascosporas sobre el
agar durante 8 a 10 horas
Continua…
ENVENENAMIENTO DE AGAR ENVENENAMIENTO DE AGAR
(2%)(2%)
CONCENTRACIÓN DE
EXTRACTO 1000 mg/L
CONTROL POSITIVO BENLATE 1mg/L
CONTROL NEGATIVO SOLVENTES DE LA
SOLUCIÓN MADRE
ELONGACIÓN DEL TUBO ELONGACIÓN DEL TUBO
GERMINATIVOGERMINATIVO
Sumergir los discos con Sigatoka
en agua destilada por 5 minutos
Retirar el exceso de agua sin
tocar las hojas de plátano
infectadas.
Envenenamiento de agar
Permitir la descarga de las ascosporas sobre el
agar durante 8 a 10 horas
Continua…
ELONGACIÓN DEL TUBO ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVOGERMINATIVO
Retirar los discos e incubar a 26°C durante 24 a 48 horas
Determinar el porcentaje de ascosporas con: GN:
Germinación normal, GD: Germinación deforme, GC:
Germinación corta y NG: No germinada
Realizar el conteo de 150 ascosporas en 3 campos diferentes
distribuidos en las 2 cajas de petri correspondientes,
… Continuación
LECTURA DEL BIOENSAYO CONTRA LECTURA DEL BIOENSAYO CONTRA
Mycosphaerella fijiensis Mycosphaerella fijiensis Morelet FASE Morelet FASE
SEXUALSEXUAL
A) Germinación normal B) No germinados A) Germinación normal B) No germinados
C) Germinación corta y D) Germinación deformeC) Germinación corta y D) Germinación deforme
CRECIMIENTO RADIAL
DESCARGADESCARGA
MONOSPÓRICOMONOSPÓRICO
CÁMARA HÚMEDA CÁMARA HÚMEDA
CRECIMIENTO EN 14 A 20 CRECIMIENTO EN 14 A 20
DÍASDÍAS
ADICIONAR SOBRE ADICIONAR SOBRE
AGAR ENVENENADOAGAR ENVENENADO
SIEMBRA POR SIEMBRA POR
SUPERFICIESUPERFICIE
SOLUCIÓNSOLUCIÓN
CRECIMIENTO RADIAL
LECTURA DEL BIOENSAYO LECTURA DEL BIOENSAYO
CONTRA CONTRA Mycosphaerella fijiensis Mycosphaerella fijiensis Morelet FASE ASEXUALMorelet FASE ASEXUAL
ElEl análisisanálisis estadísticoestadístico
porpor lala pruebaprueba dede
KruskalKruskal Wallis,Wallis, aa
travéstravés deldel softwaresoftware
InfostatInfostat
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
CROMATOGRAFÍA DE CAPA CROMATOGRAFÍA DE CAPA
DELGADA (CCD)DELGADA (CCD)
SISTEMAS DE ELUCIÓN DE PLACAS
HEXANO DCM, MeOH y
MeOH-H2O (9:1)
HEXANO–
ACETATO DE
ETILO (7:3)
HEXANO-ACETATO
DE ETILO-
METANOL
(7:2.5:0.5)
EXT: HEXANOEXT: HEXANO
PRUEBA DE
FLAVONOIDES
UV: 380 nm
EXT: HEXANO
PRUEBA DE
COMPUESTOS
FENÓLICOS
REVELADOR: FeCl3
NÚCLEOS FITOQUÍMICOSNÚCLEOS FITOQUÍMICOS GRUPO
FITOQUÍMICO PATRÓN REVELADOR QUÍMICO
CARACTERÍSTICA DE LA
MANCHA
Alcaloides y
heterociclos de
nitrógeno
Quinina Dragendorff Naranja brillante o Marron.
Terpenos y
esteroides Lanosterol Libermann – Burchard
Verde, rojas, amarillas,
positivas para esteroides y
azules verdosas positivas
para terpenos.
Fenoles Catecol Cloruro férrico Azul oscuro
Flavonoides Kaempferol Tricloruro de aluminio Intensas fluorescencias
Taninos Ácido gálico y
Ácido tánico Cloruro Férrico Manchas azules oscuras
Lactonas Cumarina Cloruro de
hidroxilamina Café oscuro
Cumarinas Cumarina Hidróxido de potasio al
5% en metanol. Manchas azules intensas
Saponinas Diosgenina Ácido sulfúrico al 10%
en etanol.
Inicialmente se ven de un
color rosa pálido y luego se
tornan de color café.
Amidas Formamida Cloruro de
hidroxilamina Color morado
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ELUCIDACIÓNELUCIDACIÓN ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ANÁLISIS HPLCANÁLISIS HPLC--MS DE LOS EXTRACTOS MS DE LOS EXTRACTOS
ACTIVOS DE ACTIVOS DE P. pesaresanum P. pesaresanum y y
P. crassinervium P. crassinervium (Scott et al., 2005)(Scott et al., 2005)
Condiciones del análisis
Columna Zorbax Eclipse XDB-C18
Sistema de elución Elución en gradiente
CH3CN- H2O
Flujo 0,4 mL/min
Volumen de inyección 2 µL
Detector DAD
Tiempo de corrida 20 min
Modo Ion positivo
Ionización APCI
Rango de masas 100-370 m/z
Longitud de onda para
identificación de amidas
insaturadas
205 y 340 nm
Longitud de onda para
compuestos fenólicos 254 y 280 nm
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISIS ESTRUCTURALANÁLISIS ESTRUCTURAL
ANÁLISIS ESTRUCTURALANÁLISIS ESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS
DE DE P. pesaresanum P. pesaresanum y y P. crassinervium P. crassinervium POR CROMATOGRAFÍA DE COLUMNAPOR CROMATOGRAFÍA DE COLUMNA
SOPORTE SÍLICA GEL
SISTEMA DE ELUCIÓN
Gradiente de polaridad
ascendente al 5% con
solventes hexano–
acetato de etilo–metanol
DIÁMETRO 8 cm
ALTURA 80 cm
SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS SEPARACIÓN DE EXTRACTOS ACTIVOS
DE DE P. pesaresanum P. pesaresanum y y P. crassinervium P. crassinervium POR CCDPOR CCD--PP
Cromatoplacas:Cromatoplacas: sílica sílica
gel de 20x20 cm y gel de 20x20 cm y
1.5mm de espesor.1.5mm de espesor.
Sistema de elución: Sistema de elución:
CloroformoCloroformo--metanol metanol
(80:20) + 1% de (80:20) + 1% de
ButanolButanol
ANÁLISIS POR CGANÁLISIS POR CG--EM DE LOS EM DE LOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
Condiciones del análisis
Columna
RTX-5Sil MS de 30 m
de largo, 0,25 mm de
diámetro y 0,25 µm de
espesor.
Ionización EI
Temperatura de horno 50°C
Temperatura de
inyección: 230°C
Modo de inyección: Split
Presión 88.3 Kpa
Flujo de columna 1.5 mL/min
Temperatura de
ionización
260°C y de interfase
280°C
ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE ETAPAS DEL ESTUDIO FITOQUIMICO DE
P. pesaresanum P. pesaresanum Y Y P. crassinerviumP. crassinervium
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA SEPARACIÓN CROMATOGRÁFICA
DE METABOLITOS SECUNDARIOSDE METABOLITOS SECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ANÁLISIS ESTRUCTURALANÁLISIS ESTRUCTURAL
ESPECTROSCOPÍA ESPECTROSCOPÍA INFRARROJO INFRARROJO -- BRUKERBRUKER
RESONANCIA MAGNÉTICA RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR NUCLEAR –– BRUKER 300 HzBRUKER 300 Hz
ESPECTROMETRÍA DE ESPECTROMETRÍA DE MASASMASAS
•• HPLCHPLC--MSMS
RESULTADOS Y RESULTADOS Y
DISCUSIÓNDISCUSIÓN
RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
OBTENCIÓN DE EXTRACTOSOBTENCIÓN DE EXTRACTOS
RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE
Piper crassinerviumPiper crassinervium
Piper crassinervium
Extracto S. aureus E. coli
Hexano X X
Diclorometano X X
Metanol X X
Metanol-agua (9:1) X X
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum
Piper pesaresanum
Extracto S. aureus E. coli
Hexano X X
Diclorometano X
Metanol X X
Metanol-agua (9:1) X X
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA CONTRA ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA CONTRA
S. aureus S. aureus DEL EXTRACTO DE DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE P. pesaresanumP. pesaresanum
EXTRACTO CRUDO DE
DICLOROMETANO
EXTRACTO CRUDO DE
DICLOROMETANO
y = 38.563x - 52.967 R² = 0.9923
48
53
58
63
68
73
78
83
88
2,6 2,8 3 3,2 3,4 3,6
% d
e in
hib
ició
n
Logaritmo en base 10 de las concentraciones evaluadas
ICIC5050 parapara elel extractoextracto
dede diclorometanodiclorometano
fuefue dede 468468..8484 mg/Lmg/L
ESPECIES DEL GÉNERO ESPECIES DEL GÉNERO Piper Piper CON CON
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANAACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
CONTRA E. coli
P. multiplinervium
P. lanceafolium
CONTRA S. aureus
P. aduncum
P. porphyrophyllum
P. multiplinervium
P. nigrum
RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANALISISANALISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA
CONTRA CONTRA Mycosphaerella Mycosphaerella fijiensis fijiensis DE LAS ESPECIES:DE LAS ESPECIES:
crassinerviumcrassinervium Piper Piper
crassinerviumcrassinervium (Pc)(Pc)
FJRFJR--40214021
Piper Piper
pesaresanumpesaresanum ((PpPp))
FJRFJR--39963996
ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO
DE DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. P. crassinervium crassinervium
CRECIMIENTO RADIAL DE CRECIMIENTO RADIAL DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. crassinerviumP. crassinervium
PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE LOS EXTRACTOS DE P. crassinervium
EXTRACTO PORCENTAJE DE
INHIBICIÓN
HEXANO 50%
DICLOROMETANO 60%
METANOL 25%
METANOL-AGUA (9:1) 13,3%
ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO ELONGACIÓN DEL TUBO GERMINATIVO
DE DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. P. pesaresanumpesaresanum
CRECIMIENTO RADIAL DE CRECIMIENTO RADIAL DE M. fijiensis M. fijiensis CON EXTRACTOS DE CON EXTRACTOS DE P. pesaresanumP. pesaresanum
PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE LOS EXTRACTOS DE P. pesaresanum
EXTRACTO PORCENTAJE DE INHIBICIÓN
HEXANO 100%
DICLOROMETANO 76%
METANOL 30%
METANOL-AGUA (9:1) 2%
COMPARACIÓN DE ESPECIES COMPARACIÓN DE ESPECIES
CON ACTIVIDAD ANTIFÚNGICACON ACTIVIDAD ANTIFÚNGICA
ESPECIE FAMILIA EXTRACTO FASE DE
REPRODUCCIÓN % DE
INHIBICIÓN
Topobea cf discolor Melastomataceae Metanol Sexual 100
Phenax rubra Urticaceae Metanol
Sexual
82
Passiflora antioquiensis
Passifloraceae Metanol
Sexual
85
Piper pesaresanum Piperaceae Metanol Sexual 100
Piper pesaresanum Piperaceae
Hexano Asexual 100
Phyllantus sp Euphorbiaceae Metanol Asexual 100
RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISIS ANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
CARACTERIZACIÓN FITOQUÍMICACARACTERIZACIÓN FITOQUÍMICA
Nombre científico Extracto
Metabolitos secundarios analizados
Alc
alo
ide
s
Es
tero
ide
s y
Tri
terp
en
os
Sa
po
nin
as
Fe
nó
les
Fla
vo
no
ide
s
Ta
nin
os
La
cto
na
s
Cu
ma
rin
as
Am
ida
s
Piper crassinervium
Hexano + + - + ++ ++ + + +
Diclorometano - - + ++ ++ + + - -
Metanol - + + + ++ - + ++ ++
Metanol - Agua
(9:1) - - + + + - ++ - +
Piper pesaresanum
Hexano ++ + + + ++ ++ + ++ +
Diclorometano ++ - + + ++ + - ++ +
Metanol - + + ++ ++ + - ++ -
Metanol - Agua
(9:1) - - + - + + + ++ -
(-) Ausente; (+) Presente; (++) Abundante
ESPECIES ACTIVAS DEL ESPECIES ACTIVAS DEL
GÉNERO GÉNERO PiperPiper
Especie Metabolitos
secundarios Referencia
Piper hispidum Amidas Navickiene et al., 2000
Piper tuberculatum Amidas Navickiene et al., 2000
Piper sarmentosum Alcaloides Zakaria et al., 2010; Zainal et
al., 2009
Piper capense Amidas Kaou et al., 2010
Piper
dilatatum
Chalconas y
derivados del ácido
benzóico
Terreaux et al., 1998
Piper chaba Amidas y alcaloides Matsuda et al., 2009
Rama et al., 2011
Piper kadsura Neolignanos Hyun et al., 2010
Piper longum Amidas Park et al., 2002
ENFOQUE DEL ESTUDIO ENFOQUE DEL ESTUDIO
Piper crassinerviumPiper crassinervium Piper crassinerviumPiper crassinervium Elongación del tubo germinativoElongación del tubo germinativo
CrecimientoCrecimiento radialradial ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Extracto S. aureus E. coli
Hexano X X
Diclorometano X X
Metanol X X
Metanol-agua
(9:1) X X
PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE LOS
EXTRACTOS DE P. crassinervium
EXTRACTO PORCENTAJE DE
INHIBICIÓN
HEXANO 50%
DICLOROMETANO 60%
METANOL 25%
METANOL-AGUA
(9:1) 13,3%
ENFOQUE DEL ESTUDIO ENFOQUE DEL ESTUDIO Piper pesaresanumPiper pesaresanum Piper pesaresanumPiper pesaresanum
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA
Extracto S. aureus E. coli
Hexano X X
Diclorometano X
Metanol X X
Metanol-agua (9:1) X X
Elongación del tubo germinativoElongación del tubo germinativo
CrecimientoCrecimiento radialradial
PORCENTAJE DE INHIBICIÓN DE LOS EXTRACTOS
DE P. pesaresanum
EXTRACTO PORCENTAJE DE
INHIBICIÓN
HEXANO 100%
DICLOROMETANO 76%
METANOL 30%
METANOL-AGUA (9:1) 2%
RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
PIPERAMIDAS IDENTIFICADAS CON LA PIPERAMIDAS IDENTIFICADAS CON LA
METODOLOGÍA A 205 Y 340 METODOLOGÍA A 205 Y 340 nmnm Especie donde
se encuentra Piperamida
tr
(min) Estructura
Espectro de masas M+
m/z (Int rel)
P. tuberculatum Pellitorina 6.00 223.1(10);182.0(10);181.1
(100)
P. guinense Piperilina 6.20
273.1(15);
272.1(100);201.0(40);
135.0(10)
P. guinense y P.
tuberculatum
4,5-
dihidropiperlongumini
na
6.87 277.1(15); 276.1(100);
135.0(45)
P. longum Piperlonguminina 7.02 275.1(15); 274(100);
201.0(40); 135.0(25)
P. nigrum 4,5-dihidropiperina 7.48 289.1(18);288.1(100);135.0(1
0)
P. nigrum Piperina 7.73 287.1(20;)286.1(100);201.0(3
5);135.0(5)
P. nigrum Pipercida 12.12 357.1 (25); 356.1 (100); 255.1
(10); 234.1(5); 135.0(25)
O
CH3
CH3
NHCH3
O
O
O
N
O
O
O
NH
CH3
CH3
O
O
O
NH
CH3
CH3
O
NO
O
O
O
O
N
H
O
O
O
N
CH3
CH3
HPLCHPLC--MS PARA EXTRACTOS MS PARA EXTRACTOS
ACTIVOS DE ACTIVOS DE P. pesaresanumP. pesaresanum EXTRACTO DE DICLOROMETANOEXTRACTO DE DICLOROMETANO EXTRACTO DE DICLOROMETANOEXTRACTO DE DICLOROMETANO EXTRACTO DE METANOLEXTRACTO DE METANOL EXTRACTO DE METANOLEXTRACTO DE METANOL
254 nm
340 nm
205 nm
280 nm
254 nm
340 nm
205 nm
280 nm
ESPECTRO DE MASAS PARA EL COMPUESTO COMÚN
EN LOS EXTRACTOS DE DICLOROMETANO Y METANOL
DE P. pesaresanum
COMPARACIÓN DE SEÑALES DEL COMPARACIÓN DE SEÑALES DEL
COMPUESTO IDENTIFICADO Y LA PIPERCIDA COMPUESTO IDENTIFICADO Y LA PIPERCIDA
(Amida insaturada de (Amida insaturada de Piper Piper nigrumnigrum))
PIPERCIDA
COMPUESTO
356,1 (100) 355(10)
234.1 (5) 235.0 (25)
135.0 (25) 122.0 (100)
H
O
O
O
N
CH3
CH3 CH3O
O
O
O
N
ESTRUCTURA POSIBLE DEL
COMPUESTO PRESENTE EN LOS DE
DICLOROMETANO Y METANOL
ACTIVOS DE P. pesaresanum
CH3O
O
O
O
N
RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum
ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LAS ACTIVIDAD ANTIBACTERIANA DE LAS
FRACCIONESFRACCIONES Fracción
Bioensayo 1 Bioensayo 2
Concentraciones en ppm (Cp) Concentraciones en ppm (Cp)
1000 500 250 75 62,5 250 1000 500 250 75 62,5 250
DCM-Pp-2
X X X X X 18 X X X X X 16
X X X X X 18 X X X X X 18
X X X X X 14 X X X X X 17
DCM-Pp--3
X X X X X 18 X X X X X 16
X X X X X 18 X X X X X 14
X X X X X 18 X X X X X 15
DCM-Pp--4
13 11 X X X 16 X X X X X 16
15 12 X X X 18 X X X X X 16
14 11 X X X 18 X X X X X 15
DCM-Pp--5
14 12 X X X 18 14 12 X X X 17
14 11 X X X 19 14 11 X X X 15
14 11 X X X 19 14 11 X X X 16
DCM-Pp--6
17 X X X X 19 17 X X X X 16
X X X X X 19 X X X X X 16
X X X X X 22 X X X X X 16
DCM-Pp--7
X X X X X 20 X X X X X 16
X X X X X 18 X X X X X 16
X X X X X 18 X X X X X 17
DCM-Pp--8
X X X X X 18 X X X X X 15
X X X X X 18 X X X X X 15
X X X X X 17 X X X X X 15
DCM-Pp--9
18 16 12 10 8 18 12 10 8 X X 15
19 14 12 11 9 18 12 9 7 X X 14
17 14 12 10 9 19 11 8 8 6 X 15
DCM-Pp--10
14 12 10 9 8 16 12 10 8 6 X 15
13 11 9 9 7 16 12 8 7 6 X 14
14 11 9 9 8 15 13 11 8 6 X 16
DCM-Pp--11
22 18 16 14 11 16 21 19 16 12 11 16
19 17 14 13 11 18 22 19 18 14 12 15
19 16 13 13 11 14 15 14 12 11 9 14
CONCENTRACIÓN MEDIA CONCENTRACIÓN MEDIA INHIBITORIA (ICINHIBITORIA (IC5050))
FRACCIÓN DCM 9 FRACCIÓN DCM-Pp-9
y = 30.299x - 5.735 R² = 0.9461
45
55
65
75
85
95
1,7 2,2 2,7 3,2
% d
e in
hib
ició
n
Log en base 10 de las concentraciones
FRACCIÓN DCM FRACCIÓN DCM-Pp-10
y = 32.057x + 0.557 R² = 0.9092
50
60
70
80
90
100
1,50 2,00 2,50 3,00
% d
e in
hib
ició
n
Log en base 10 de las concentraciones
FRACCIÓN DCMFRACCIÓN DCM-Pp-11
y = 40,148x - 4,139 R² = 0,9678
50,0
70,0
90,0
110,0
1,50 2,00 2,50 3,00 3,50
% d
e in
hib
ició
n
Logaritmo en base 10 de las concentraciones evaluadas
Código IC50 (mg/L)
DCM-Pp 468,84
DCM-Pp–9 69,19
DCM-Pp–10 38,93
DCM-Pp–11 22,31
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE SECUNDARIOS DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS
DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE
Piper pesaresanumPiper pesaresanum
RESULTADOS Y DISCUSIÓN RESULTADOS Y DISCUSIÓN
OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE DE
EXTRACTOSEXTRACTOS
CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN CARACTERIZACIÓN
FITOQUÍMICAFITOQUÍMICA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIBACTERIANAANTIBACTERIANA
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ACTIVIDAD ACTIVIDAD
ANTIFÚNGICAANTIFÚNGICA
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS
SECUNDARIOSSECUNDARIOS
EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS EXTRACTOS ACTIVOSEXTRACTOS ACTIVOS
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
ANÁLISISANÁLISIS ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR IR –– EM EM -- RMNRMN
ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS ANÁLISIS POR HPLCANÁLISIS POR HPLC--MSMS
ANÁLSIS ANÁLSIS
ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR RMN EM
ESPECTRO IR DE LA FRACCIÓN ESPECTRO IR DE LA FRACCIÓN
DCMDCM--PpPp--1111--8 DEL EXTRACTO DE 8 DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DICLOROMETANO P. pesaresanumP. pesaresanum
Aromaticidad
ANÁLISIS ANÁLISIS
ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR RMN MS
SEPARACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS SEPARACIÓN DE METABOLITOS SECUNDARIOS
DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE DEL EXTRACTO DE DICLOROMETANO DE
Piper pesaresanumPiper pesaresanum
RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR DE RESONANCIA MAGNÉTICA NUCLEAR DE
LA FRACCIÓN DCMLA FRACCIÓN DCM--PpPp--88--6 DEL EXTRACTO 6 DEL EXTRACTO
DE DICLOROMETANO DE DE DICLOROMETANO DE P. pesaresanumP. pesaresanum
RMN-1H COSY COSY 11HH--11HH
ESPECTRO RMN-1H DE LA FRACCIÓN
DCM-Pp-11-8-6 DEL EXTRACTO DE
DICLOROMETANO DE P. pesaresanum
ESPECTRO COSY 1H-1H DE LA MUESTRA
DCM-Pp-11- 8-6 DEL EXTRACTO DE
DICLOROMETANO DE P. pesaresanum
ANÁLSIS ANÁLSIS
ESTRUCTURALESTRUCTURAL
IR RMN MS
RESULTADOS CGRESULTADOS CG--MS DE LA FRACCIÓN MS DE LA FRACCIÓN
DCMDCM--PpPp--10 DEL EXTRACTO DE 10 DEL EXTRACTO DE
DICLOROMETANO DE DICLOROMETANO DE Piper pesaresanumPiper pesaresanum
COMPUESTOS EN EL GENERO
Piper
COMPUESTOS REPORTADOS COMPUESTOS DETECTADOS
4-isoprenil-1metil-3-ciclohexenen-1-ol
Piper nigrum
4-Isopropenil-1-metil-1,2-
ciclohexanodiol
EN RESUMEN EN RESUMEN Piper pesaresanumPiper pesaresanum
Piper pesaresanum
Actividad antibacteriana contra S. aureus
El extracto de diclorometano IC50 de
468, 84 mg/L fracciones polares:
DCM-Pp-9 69,19 mg/L
DCM-Pp-10 38,93 mg/L
DCM-Pp-11 22,31 mg/L
Actividad antifúngica Extracto metanol inhibió el 100% de
la germinación de ascosporas y el
de diclorometano un 96%
Análisis HPLC-MS Se identificó un compuesto con
características estructurales a la
Pipercida aislada de Piper nigrum
Separaciones y análisis de IR y
RMN
Se identificaron los grupos
funcionales del compuesto
separando
BIBLIOGRAFÍA
Anastasiou D. M., Morgan Margie., Ruanec P. J., Steenbergena J. N., Katza B.
D., Aldera J.D., Thornea G. M (2008). In vitro activity of daptomycin against
multidrug-resistant Staphylococcus aureus and S. aureus with known
virulence factors, including community-acquired methicillin-resistant isolate.
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Hyun K., Wook J., Keun S., Yeou S., Lee K. (2010). Neolignans from Piper kadsura and their anti-neuroinflammatory activity. Bioorganic & Medicinal
Chemistry Letters. 20: 409–412
Hoffmann E. and Stroobant V. (2007). Mass Spectrometry. Principles and
Applications. 3Th Ed . Jhon Wiley & Sons. Ltd. 483p.
Kaou M. A., Mahiou – Leddet V., Canlet C., Debrauwer L., Huttler S., Azas N
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L.f. (Piperaceae).Fitoterapia. 81: 632 – 635.
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plant extracts against Black Sigatoka (Mycosphaerella fijiensis Morelet).
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revista de la facultad de química farmacéutica de la Universidad de Antioquia.
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atlas. 2a Edition. Springer – Verlag, Berlin, Germany.
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Yamaguchi L. F., Lago J. H. G., Tanizaki T. M., Mascio P. D. and Kato J. M.
(2006). Antioxidant activity of prenylated hydroquinone and benzoic acid
derivatives from Piper crassinervium Kunth. Phytochemistry 67: 1838 – 1843.
GRACIAS!!!
DIREFENCIA EN LOS TIPOS DE DIREFENCIA EN LOS TIPOS DE
IONIZACIÓN IONIZACIÓN
IONIZACIÓN EI IONIZACIÓN EI IONIZACIÓN APCI IONIZACIÓN APCI
COMPUESTOS AISLADOS DE COMPUESTOS AISLADOS DE
Piper crassinerviumPiper crassinervium
Ácido [4-hidroxy-(3’-7’-dimetil6’
Ácido [4-hidroxy-(3’-7’-dimetil-10-oxo-octa-2’-E-6’-dienil)benzoico]
Ácido[4-hidroxi-3-(3’,7’-dimetil -6’
Ácido[4-hidroxi-3-(3’,7’-dimetil-3’-hidroxi-1’-oxo-6’-octenyl)benzoico]
1,4-dihidroxi-2-(3’,7’-dimetiloctadienil)benceno
1,4-dihidroxi-2-(3’,7’-dimetil-1’-oxo-2'-E-6’-octadienil)benceno
Isosakuratenina Isosakuratenina Sakuratenina Sakuratenina
ANOVAANOVA
Es una medida de la dispersión de sus datos con respecto a su media. Como establece diferencia entre las medias poblaciones; es un método matemático creado para probar la hipótesis de que las medias aritméticas de más de 2 grupos poblacionales son iguales.
Para la correcta aplicación de ANOVA se requiere el cumplimiento de cuatro supuestos estadísticos que sustentan la validez de las conclusiones de esta prueba:
a) Respuestas normalmente distribuídas
b) Homogeneidad de varianzas
c) Error experimental distribuído homogéneamente
d) Un modelo matemático conocido
ANOVAANOVA
ANÁLISIS ESTADÍSTICO NO ANÁLISIS ESTADÍSTICO NO
PARAMÉTRICOPARAMÉTRICO
Analiza los procedimientos inferenciales que se encuentran sujetos a la forma de distribución de la población y no requieren que las observaciones estén dadas en escala de intervalo.
Código
Versión
Fecha
Pagina
1. DATOS GENERALES DE LA ACTIVIDAD
RazónSocial____________________________________________________________
NIT.__________________________________________________________________
Actividad: ____________________________________________________
Representante Legal: _______________________C.C._________________________
Municipio: _____________________ Departamento:____________________________
Dirección: _____________________________________________________________
Teléfono: _______________Fax: _______________ E – mail: _________________
Presión barométrica: ___________ (mm Hg). ______ Altitud: ________msnm________
Temperatura ambiente:________(°C)
Producción horaria en Toneladas (en términos de producto terminado) relacionada con la fuente que se está midiendo): _______________ (Tn/h)
2. UBICACIÓN SEGÚN P.O.T - E.O.T ó P.B.O.T: Zona Urbana: ____ Zona Rural: ____
3. FECHA DE LA MEDICIÓN: ____________________________________________
4. NOMBRE DEL RESPONSABLE DE LA EVALUACIÓN DE EMISIONES ACREDITADO POR EL IDEAM: ____________________________
5. LABORATORIO QUE REALIZA LOS ANÁLISIS: ___________________________________
6. CONTAMINANTES A MEDIR:
Dióxido de Azufre: (SO2) ____ Óxidos de Nitrógeno (NOx) ____
Monóxido de Carbono (CO): ____ Dióxido de Nitrógeno (NO2): ____
Oxigeno (O2): ____ Oxido Nítrico (NO) ____
123-LCA-FOR-004
1
11/08/2011
1 de 1
IDENTIFICACION GENERAL DE LA EMPRESA
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
Código 123-LCA-FOR-005
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Pagina 1 de 3
Laboratoio: Calidad del Aire NUMERO:
Number
FIRMAS AUTORIZADAS
Authorized signatoriea
___________________________ __________________________
Técnico del Laboratorio Director del Laboratorio
Measurements made Head in Charge Laboratory
Fecha de emisión:
Date of issue:
Dirección: Laboratorio de Calidad del Aire de la Universidad Tecnológica de Pereira - Vereda la Julita Pereira (Risaralda). Tel: (6)3210961 ext 457
PRUEBA MEDIDA:
Test Measure
00000
AREA:
Area
DIRECCIÓN:
Adress
SOLICITANTE:
Customer
FECHA DE MEDICION:
Date of Measurement
FECHA DE SOLICITUD:
Date of Solicitation
Este certificado expresa fielmente el resultado de las mediciones realizadas. No podrá ser reproducido parcialmente, excepto cuando se haya obtenido previamente permiso por escrito del laboratorio que lo emite.
This certificate is an achúrate record of the performed measurements reults. This cetificate may not be partially or totaly reproduced, except the issuing laboratory.
Los resultados obtenidos en el presente certificado se refieren al momento y condiciones en que se realizaron las mediciones. El laboratorio que lo emite no se responsabiliza de los prejuicios que pueden derivarse del uso inadecuado en el proceso.
NÚMERO DE PÁGINAS DEL CERTIFICADO INCLUYENDO ANEXOS:
Number of pages of this Certificate and documents attached
Los certificados sin las firmas autorizadas no tienen validez.
The results of this certificate refer to the moment and conditions in wich the measurement werw made. The laboratory that issued it is not liable for the prejudice that may result from inappropriate use in the process.
Laboratorio de Calidad del Aire- Universidad Tecnológica de Pereira (Vereda la Julita) Tel: 3210961 ext 457 - Pereira (Risaralda).
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION
Código 123-LCA-FOR-005
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Pagina 2 de 3
No =H8
El XXXXX permite un error de indicación máximo: #¡REF! mm
La incertidumbre para la XXXX es de: #¡REF! mm
RESULTADOS DE LA MEDICION
Punto de Medida del XXXX Error del instrumento mm Incertidumbre Combinada de Medición
mm
METODO DE MEDICIÓN
INCERTIDUMBRE DE LA MEDICIÓN
La incertidumbre de medición ha sido calculada con un nivel de confianza de 95% utilizando un factor de cobertura de K=2.
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION
0,00
0,20
0,40
0,60
0,80
1,00
1,20
10 30 50 70 90 110 130 150
Err
or
del In
str
um
en
to (m
m)
Punto de Medida)
ERROR DE INDICACIÓN
Código 123-LCA-FOR-005
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Pagina 3 de 3
No #¡REF!
TRAZABILIDAD
OBSERVACIONES
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION
Código
Versión
Fecha
Pagina
Laboratoio: Calidad del Aire
EQUIPO: SERIAL:
MARCA: PROVEEDOR:
FECHA DE COMPRA:
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN 123-LCA-FOR-006
1
HOJA DE VIDA DEL TESTO 350 XL “Analizador de gases de combustión” 11/08/2011
1 de 2
DESCRIPCIONFECHA UBICACIÓN ACTUAL RESPONSABLE FIRMAN. DOC
SERVICIO
CLASE T o M
FECHA: Dia que realizo el servicio T: Traslado M: Mantenimiento
Código
Versión
Fecha
Pagina
Laboratoio: Calidad del Aire
EQUIPO: SERIAL:
MARCA: PROVEEDOR:
Caja de salida analógica
Caja de alimentación
Sonda de muestreo de combustión
Unidad de control
Logger
Caja analizadora de gases de combustión
VERIFICACION DE EQUIPO BUENO REGULAR MALO
FECHA DE MANTENIMIENTO:
BSERVACIONES
ESTADO GENERAL DEL EQUIPO ESTADO
HOJA DE VIDA DEL TESTO 350 XL “Analizador de gases de combustión” 11/08/2011
2 de 2
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN 123-LCA-FOR-006
1
Código 123-LCA-FOR-008
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Pagina 1 de 2
Laboratorio: FECHA: Nº
Dióxido de Azufre: (SO2) ____ Óxidos de Nitrógeno (NOx) ____
Monóxido de Carbono (CO): ____ Dióxido de Nitrógeno (NO2): ____
Oxigeno (O2): ____ Oxido Nítrico (NO) ____
HUMEDAD:
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
1 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
2 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
3 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Xa= 0,00000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Ra= 0,00000
1 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
2 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
3 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Xb= 0,00000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Rb= 0,00000
1 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
2 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
3 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Xc= 0,00000
0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 Rc= 0,00000
Media Observ. 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 0,0000 X= 0,00000
Rp= 0,0000 Xdiff= 0,0000 Rprom= 0,0000 LSCR= #¡VALOR! D4= NO VALIDO
ELABORADO POR:
Media
Rango
REVISADO POR:
Media Observ.: Media de observaciones, es el promedio de todas la mediciones en un punto realizadas por todos los observadores.
Rp: es el rango de la media de observaciones "Media Observ.".
Rprom: es el promedio de los tres rangos de operador ((Ra+Rb+Rc)/3).
D4: es 3,2686 para cuando se hacer dos pruebas y 2,5735 para tres.
LCSR: representa el limite para las Rs individuales (LCSR=D4*Rprom). Se deben marcar los rangos individuales que se encuentren mas allá de este límite, identificar las causas y corregirlas. Se
deben repetir las lecturas con el mismo operario e instrumento como al principio o descartar los valores y volver hacer el promedio, volver a estimar R y los valores límite para las observaciones
restantes.
Media
Rango
B
Analista Laboratorio Director del laboratorio
B
Rango
Media
0,0000
0,0000
0,0000
Media
C
Rango
MediaMedia
Rango
C
OBSERVADOR/
PRUEBA Nº
RESULTADOS DE LAS OBSERVACIONESMEDIA
A
0,0000
0,0000A
OBSERVADOR C:
DATOS GENERALES DEL ESTUDIO
TEMPERARTURA:
OBSERVADOR A:
OBSERVADOR B: TOLERANCIA:
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
ESTUDIO DE REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD
Calidad del Aire
CONTAMINANTES A MEDIR
Código 123-LCA-FOR-008
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Pagina 2 de 2
Laboratorio: FECHA: Nº
Repetibilidad: Variaciones del Equipo (EV)
Pruebas K1
EV= 0,0000 2 4,56 %EV= #¡DIV/0!
3 3,05
Reproducibilidad: Variaciones del Observador (AV)
AV= 0,0000 %AV= #¡DIV/0!
n: Número de datos Observ. 2 3
r: Número de Pruebas K2 3,65 2,79
R&R: Repetibilidad y Reproducibilidad
Datos K32 3,65
3 2,70
R&R= 0,0000 4 2,30 %R&R= #¡DIV/0!
5 2,08
Variación por partes (PV) 6 1,93
7 1,82
8 1,74
9 1,67
PV= 0,0000 10 1,62 %PV= #¡DIV/0!
Variación Total (TV) RESULTADO DEL ESTUDIO
#¡DIV/0!
TV= 0,0000
Criterios para aceptar el estudio: R&R<10% EXCELENTE
10%<=R&R<=20% BUENO #¡DIV/0!
20%<=R&R<=30% ACEPTABLE
R&R>30% NECESITA MEJORAS
Análisis de Mediciones Unitarias % Variaciones Totales (PV)
Calidad del AireCalidad del Aire
ANÁLISIS DE DATOS
ESTUDIO DE REPETIBILIDAD Y REPRODUCIBILIDAD
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
Código 123-LCA-FOR-
009
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Pagina 1 de 1
Día Mes Año
R&R R&R
S
I
S: R&R: I :Repetibilidad y ReproducibilidadSupervisión Intercomparaciones
Diciembre Verificado
PLAN DE ASEGURAMIENTO DE CALIDAD
Abril Mayo JunioEQUIPO EneroFecha
Julio Septiembre Octubre NoviembreAgosto
SUPERVISIÓN DIRECTOR
Febrero
TESTO 350 XL “Analizador de
gases de combustión”
INTERCOMPARACIÓN
Marzo
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
AÑO:
Laboratorio: Calidad del Aire
2012
Código
Versión
Fecha
Pagina
Laboratorio: Calidad del Aire
Día Mes Año SI NO SI NO
26 10 2005
5 6 2008
VersiónNombre
NTC-ISO-IEC 17025 Requisitos Generales de Competencia
de Laboratorios de Ensayo y Calibración.
RESOLUCION 909 Por la cual se establecen las normas y
estandares de admision admisibles de contaminantes a la
atmosfera por fuentes fijas y se dictan otra disposiciones.
Entidades Asociadas
Revisión Página WEB
Firma
1 revisión 2 revisión
Cambios Cambios
2
1
1 de 1
ICONTEC
MINISTERIO DE AMBIENTE,
VIVIENDA Y DESARROLLO
TERRITORIAL
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
ACTUALIZACIÓN Y REVISIÓN DE NORMAS TÉCNICAS
123-LCA-FOR-010
1
11/08/2011
Fecha de
Actualización
Código
Versión
Fecha
Pagina
Laboratorio: Calidad de Aire
Fecha: _______________________ Pereira (Risaralda)
123-LCA-FOR-011
1
ACTA DE COMPROMISO ÉTICO 11/08/2011
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
1 de 1
____________________________ _____________________________
Firma del Empleado Firma Director del Laboratorio
Yo ___________________________ identificado con C.C. ________________________ de ____________________
doy fe de que me encuentro libre de cualquier presión indebida comercial, financiera u otra que pudiere influir en el criterio técnico del laboratorio,
además me comprometo a no realizar ninguna actividad que pueda poner en peligro o disminuir la confianza en la competencia, imparcialidad, criterio o
integridad operacional del laboratorio.
Acepto las sanciones legales a nivel civil y penal que correspondan en caso de cometer alguna infracción en el cumplimiento de mi deber.
Código
Versión
Fecha
Pagina
Laboratorio: Calidad del Aire
Fecha: Nombre del control:
1, Coincidencia con todas las respuestas 1. Datos Obtenidos
Evaluación Evaluación
Acciones a tomarAcciones a tomar
Revisar los procedimientos del laboratorioCapacitación del personal en...
Ejecución de la prueba por las personas a cargo
Análisis de los resutados de la prueba
Evaluación individual con cada persona
Capacitación manejo de equipos
Otras Acciones emprendidas (Descripción) Otras Acciones emprendidas (Descripción)
P C P C
Parte Teórica Parte Práctica
123-LCA-FOR-012
1
11/08/2011
1 de 1
CONTROLES DE APTITUD O CALIDAD
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
P: Acción Preventiva C: Acción Correctiva
Con diferencias Con diferenciasIguales
Causas EfectoIguales
Causas Efecto
Código 123-LCA-FOR-013
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Pagina 1 de 2
Laboratorio:
CÓDIGO
EMPRESA
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
SEGUIMIENTO AL SERVICIO
Calidad del Aire
TELÉFONO CORREOEMPRESA DIRECCIÓN
Código 123-LCA-FOR-014
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Pagina 1 de 1
Laboratoio: Calidad del Aire
Año Mes Día
Año Mes Día
CORREO CERTIFICADO:
Dióxido de Azufre: (SO2) ____ Óxidos de Nitrógeno (NOx) ____
Monóxido de Carbono (CO): ____ Dióxido de Nitrógeno (NO2): ____
Oxigeno (O2): ____ Oxido Nítrico (NO) ____
VALOR TOTAL:
ANALISTA DEL
ENSAYO:Nombres y Apellidos: Firma:
Observaciones:
ENTREGA DEL CERTIFICADO DE GASES DE COMBUSTION
Fecha
MEDIO EMPLEADO
NOMBRE:
Correo electrónico:
Representante de la empresa: Cargo:
Teléfono / Fax:
Razón social: Nit:
MEDIO EMPLEADO
Nombres y Apellidos: Firma:ENTREGA
No DE RECIBO:
PERSONAL:
OTRO: CUÁL:
ENTREGADO (O ENVIADO ) A
CONTAMINANTES QUE SE DESEAN MEDIR
DATOS DE LA EMPRESA
E-mail: Correspondencia RadicaciónTelefónico:
Municipio / Departamento:
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
Fecha
Dirección:
GASES DE COMBUSTION
PEDIDO Y ACUERDO PARA LA MEDICION DE
Código 123-LCA-FOR-O15
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Pagina 1 de 1
Laboratorio:
AÑO:
Tiempo
estimado
Día Mes Horas Día Mes
Int: Capacitación interna Ext: Capacitación externo
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
PROGRAMA ANUAL DE CAPACITACIÓN Y FORMACIÓN
NúmeroTema de Capacitación o
FormaciónInt Ext
Fecha
planeada
Calidad del Aire
Funcionarios participantes
Nota de ejecución
Fecha
Firma
Código 123-LCA-FOR-016
Versión 1
Fecha 11/08/2011
Pagina 1 de 1
Laboratorio: Calidad del Aire
CÓDIGO EMPRESA DIRECCIÓN TELÉFONO
001
002
003
004
005
006
007
008
009
010
011
012
013
014
015
016
017
VICERRECTORÍA DE INVESTIGACIONES, INNOVACIÓN Y EXTENSIÓN
CLIENTES LABORATORIO - EMPRESA
CORREO