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Validação de método para determinação de cotinina

em urina por cromatografia líquida de alta eficiência

Alunos: Carolina LadeiraFernanda Barreto Gabryela NardyKamila LacerdaMariana Tito Teixeira

FACULDADE DE CIENCIAS BIOLOGICAS E DA SAUDE Engenharia Química

EQU107- Métodos e Analises Instrumentais

Professora: Ligia Vieira

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1. Introdução

CROMATOGRAFIA:

1. Introdução 3

SEPARAÇAO IDENTIFICAÇAO

QUANTIFICAÇAO

Slide do esquema de Carol

4

HPLC (Cromatografia liquida de alta eficiência)

1. Introdução 5

6

Danos a saúde

Demanda por analises

laboratoriaisCâncer pulmonar

Umas das maiores causa de morte no mundo

1. Introdução

7

O consumo de tabaco representa a segunda maior causa de mortes no mundo.

Estrutura da nicotina, um alcalóide do tabaco extremamente venenoso

1. Introdução

Grande parte da nicotina absorvida é biotransformada em cotinina, seu principal metabólito.

8 1. Introdução

• Validar um método por CLAE precendida por extração líquido-líquido para mensurar os níveis de cotinina na urina, com a finalidade de monitorar a exposição ao tabaco, incluindo a exposição ambiental.

2. Objetivo

2. Objetivo 9

3. Materiais e Métodos:

3. Materiais e Métodos10

Cotinina ,

Nicotina, Sigma-Aldfrich

2-fenilimidazol

11

Hidroxido de sodio , NaOH Diclorometano , H2CCl2 Metanol H3C-OH AcetonitrilaCH3CN Merck Acido CitricoC6H8O7

TrietilaminaN(CH2CH3)3

Acetato de sodio ( CH3COONa )

3. Materiais e Métodos

Parâmetros cromatográficos

•Fase móvel: Agua Milli-Q

•pH: 4,4 com acido acético

123. Materiais e Métodos

Procedimentos de extração• Foram pipetados amostra de urina centrifugada. Posteriormente

adicionado de hidróxido de sódio , padrão interno e diclorometano. Posteriormente esta solução sofreu agitação em um homogeneizador e centrifugada . Após a fase orgânica foi transferida para um frasco evaporador e colocados em termobloco, sob corrente de nitrogênio e temperatura ambiente, até secura. A seguir o resíduo foi reconstituído com com a fase móvel e injetado na CLAE.

133. Materiais e Métodos

Validação analitica,

143. Materiais e Métodos

LinearidadeLimite de detecção

Precisão inter-ensaio

Exatidão Estabilidade

4. Resultados:

4. resultados e discursões 15

Os 3 GRAFICOs:

Tabela

•

16 4. resultados e discursões

Devido meia-vida, a estabilidade e o fato de ser o metabolito mais abundante, tornam a cotinina o biomarcador mais adequado para determinar a exposição do tabaco.

4.1- Discussões 4. resultados e discursões 17

•A CLAE exige um pré-tratamento das amostras por extração liquido-liquido ou extração em fase solida. Devido ao menor e a boa qualidade dos resultados obtidos com extração liquido-liquido, foi empregado diclorometano como solvente de extração.

18 4. resultados e discursões

•Conclui-se que este trabalho apresentou um metodo sensicel e especifico para a determinação de cotinina em urina por CLAE precedida da extração liquido-liquido.

5. Conclusão

5. Conclusão

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OBRIGADO !

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