Post on 17-Apr-2015
Anticorpos Monoclonais Nanocorpos
UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO-CCB
DEPARTAMENTO DE GENÉTICAPROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM
GENÉTICADisciplina de Genética Molecular
Professor Paulo Andrade
UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO-CCB
DEPARTAMENTO DE GENÉTICAPROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM
GENÉTICADisciplina de Genética Molecular
Alexandre Magalhães Martins
Constituído por duas cadeias idênticas Leve (≈17.000 daltons) (L) Pesada (≈35.000 daltons) (H)
Mantidas juntas por pontes dissulfídicas (s—s) As seqüências cadeias H e L variam de anticorpo
para anticorpo Estas diferenças estão restritas praticamente aos
100 últimos aminoácidos da região amino-terminal Esta última definida com região variada (V) e a
outra constante (C)
Anticorpos
AnticorposDiversidade de anticorpos• Estrutura do anticorpo (imunoglobulina) – IgG como exemplo
I gG secretada
Cadeia leve
Cadeia pesada Sítio ligador
de antígeno
Região FabDobradiça
Sítios ligadoresdo receptor Fc e do complemento
Cauda carboxi-terminalLigação dissulfeto
Domínio Ig
Região Fc
Genes separados para segmentos V e C (Willian Dreyer e Claude Bennett – 1965) Somente um gene para as cadeias Hc e Lc Vários Genes para as gadeias Hv e Lv Acreditava-se que o DNA no cromossomo é imutável
exceto na meiose para formar as células sexuais Susumu Tonegawa em 1976 verificou que os
fragmentos de restrição de DNA de anticorpos de mieloma de rato não são similares aos do DNA embrionário destes anticorpos
Anticorpos
AnticorposDiversidade de anticorpos• Os genes para as imunoglobulinas e a geração da diversidade de
anticorpos
Locus da cadeia H (1250 kb; cromossomo 14)
ativador
Outra cadeia pesada (H)
Uma cadeia leve (L) Estrutura esquemática da cadeia pesada (H)
Anticorpos
Locus da cadeia (1820 kb; cromossomo 2)
Locus da cadeia (1050 kb; cromossomo 22)
Uma cadeia pesada (H)
Diversidade de anticorpos• Os genes para as imunoglobulinas e a geração da diversidade de
anticorpos - continuação
AnticorposD
ive
rsid
ad
e d
e a
nti
co
rpo
s•
Qu
ad
ro f
ina
l d
e g
era
ção
da
div
ers
ida
de
de
an
tic
orp
os
Linhagem germinativa
Transcrito primário de
RNA
mRNA
DNA recombinado
Polipeptídeonascente
Polipeptídeomaduro
Molécula de Ig montada
Cadeia pesada Cadeia pesada
Recombinação somática (rearranjo do DNA); ligação D- J
Recombinação somática (rearranjo do DNA); ligação VJ
Recombinação somática (rearranjo do DNA); ligação V-DJ
transcrição transcrição
Processamento de RNA (splicing)
Processamento de RNA (splicing)
tradução tradução
processamento, glicosilação da
proteína
processamento, glicosilação da
proteína
Anticorpos Diversidade
Estudos indicam que a diversidade tolerada in vitro de em VhH (Cadeia pesada autônoma possíveis) em 3 CDR’s (região determinante de complementaridade ) clássicos e CDR4 é muito maior do que a existente na natureza independente dos aspectos genéticos e biológicos aos quais está sujeito o sistema imunológico.Sidhu ss (2005)
Anticorpos Monoclonais
Sistema imunológico é altamente complexo Às vezes é lento ,Ineficaz ou complacente Às vezes reage demasiado Outras vezes ataca o próprio sistema
Anticorpos Monoclonais
Clonagem de anticorpos idênticos artificialmente para contornar as deficiência imunológicas
Custo alto Moléculas são grandes e complexas Isolam anticorpo de um Camundongo (mieloma) Humanização da molécula manipulando os genes que as
codificam substituindo todas ou algumas proteínas por seqüências de aminoácidos copiadas de anticorpos humanos.
Moléculas não podem ser sintetizadas, mas sim, cultivadas em biorreatores de células mamárias
Inadequadas para produção em alta escala Limitações práticas (Temperatura, PH e rápida digestão)
Anticorpos Monoclonais
Anticorpos Monoclonais
Anticorpos Monoclonais
Anticorpos Monoclonais
Fragmentos de anticorpos (FABs) Seccionamento da base e de um dos braços do
anticorpo Não recrutam as células T Podem ser clonados por vetores (fungos e
leveduras) devido ao tamanho reduzido Carreiam substâncias para os tecidos alvo
(isótopos radioativos e quimioterápicos) Meia-vida ativa de poucas horas
Anticorpos Monoclonais
Fragmentos de anticorpos (Fabs) Foram ainda mais reduzidos restando apenas as
CDR (Região determinante de complementaridade)
Clonagem via vetores bacterianos Estes Fabs “grudam” e se aglomeram no interior
das bactérias que os produzem e no interior dos pacientes que os tomam atrapalhando a realização das suas tarefas
Anticorpos Monoclonais
Descoberta de Anticorpos mais simples em Dromedários (Muyldemans – 1989) Apresentam anticorpos normais de quatro cadeias e
cerca de 50% mais simples com um par de cadeias Em camelídeos do velho e novo mundo (camelos,
lhamas e dromedários) quase metade dos anticorpos que circula no sangue não possui a cadeia leve (Muyldemans – 1993)
Os anticorpos apresentam a mesma eficiência dos normais apesar de apresentarem somente metade das CDR’s e ser dez vezes menor
Maior agilidade podendo se atracar antígenos menores
Os anticorpos dotados apenas de cadeias pesadas não grudam uns nos outros ao contrário dos Fabs
Nasceram assim os:
Nanocorpos
Nanocorpos
Não são hidrofóbicos Mais resistência ao calor e ao PH Podem ser codificados por um único gene Produtividade de 1 g/l de levedura Quatro meses da imunização do antígeno
alvo isolado até a extração dos nanocorpos de alta afinidade.
Nanocorpos
Nanocorpos